C I T O M E T R I A D E F L U X O
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Aula prática de Imunologia ICS - UFBA: Citrometria de Fluxo
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- 1. UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – ICSDEPARTAMENTO DE BIOINTERAÇÃODISCIPLINA: IMUNOLOGIA I – ICS 045 CITOMETRIA DE FLUXO Trabalho realizado pela Doutoranda de Imunologia da UFBA Danielle Dantas Lima sob orientação dos Professores Robert Schaer, Roberto Meyer, Cláudia Brodskin e Ricardo Portela. Atualizado em Fevereiro de 2010.
- 5. Grande número de células analisadas com rapidez;
- 6. Disponibilidade de amplo perfil de anticorpos específicos;
- 10. Análise da função dos neutrófilos
- 12. Quantificação de subpopulações linfocitárias
- 13. Quantificação das células CD34+ como indicação da capacidade de reconstituição hematopoiética após o transplante de células-tronco
- 18. METODOLOGIA ÂNGULO DE DISPERSÃO LATERAL (SSC) LASER CÉLULA ÂNGULO DE DISPERSÃO FRONTAL (FSC)
- 19. METODOLOGIA 4)Filtro 1)Suspensão de células 6) Análise de dados 5)A luz refletida passa através de filtros e é detectada por tubos fotomultiplicadores que convertem o sinal luminoso em sinal eletrônico 3)Dispersão lateral de luz Laser 3)Dispersão de luz para a frente 2) Anticorpos monoclonais associados a fluorocromos e ligados à superfície de uma célula
- 20. Anticorpos monoclonais marcados Linfócito TCD8 Citometria de fluxo Luz fluorescente Laser METODOLOGIA Linfócito TCD4 Contagem das células
- 21. METODOLOGIA Gráfico de análise de leucócitos (dispersão lateral e frontal) Cada ponto significa uma célula identificada pelo citômetro. Estão divididas pela dispersão frontal (forward) – tamanho da célula - horizontalmente E também pela dispersão lateral (side) - granulação e complexidade – verticalmente Os círculos indica células que pertencem a um grupo de tamanho e complexidade próximos
- 22. METODOLOGIA Gráfico de análise de leucócitos (com fluorescência) Neste quadrante estão as células CD4+ e CD3- Neste quadrante estão as células CD4+ e CD3+ (linfócitos Th) Neste quadrante estão as células CD4- e CD3+ (outros linfócitos que não Th) Neste quadrante estão as células CD4- e CD3- (células que não linfócitos)