O documento descreve três técnicas analíticas: turbidimetria, que mede a turbidez de soluções; nefelometria, que mede a dispersão de luz por partículas em suspensão; e citometria de fluxo, que conta e classifica partículas como células com base em vários parâmetros medidos simultaneamente.
2. Turbidimetria
O QUE É: é o método de dosagem de turbidez de uma solução, pela
determinação da luz transmitida pelas partículas na suspensão
COMO FUNCIONA: a luz é passada através de um filtro criando uma luz de
comprimento de onda conhecido que é então passada através de uma
cubeta contendo uma solução. Uma célula fotoelétrica coleta a luz que
passa pela cubeta/placa. Uma medição é então dada para a quantidade de
luz absorvida (densidade óptica)
A amostra deve ser analisada em agitação constante.
Muito utilizada em análise de água
3. VANTAGENS:
● Não necessita de separação de fases;
● Rápida e econômica;
● Automatizada.
DESVANTAGENS:
● Não é muito eficaz em amostras muito turvas.
APLICAÇÕES:
● Cinética de crescimento microbiano;
● Resistencia antimicrobiana;
● Atividade antimicrobiana de moléculas e/ou proteínas relacionadas ao
sistema imune de insetos
4.
5. Nefelometria
O QUE É: É um método analitico de laboratório que se baseia na diminuição
da intensidade pela difracção da luz.
COMO FUNCIONA: As partículas suspensas são medidas empregando um
feixe de luz. A luz dispersa pelas partículas é coletada por um detector
ajustado para um lado a 90 ° da fonte de luz. A densidade de partículas é
então calculada como uma função da luz espalhada no detector. Até certo
ponto, a dispersão da luz para uma determinada densidade de partículas
depende das propriedades específicas das partículas, como a sua cor e
forma.
6. APLICAÇÃO: Os nefelômetros baseados em microplacas são usados em
laboratórios de pesquisa acadêmica, bem como nas indústrias farmacêuticas.
Eles são principalmente empregados para medições de turvação, exames de
solubilidade de drogas, cinética de ligação de proteínas, crescimento
microbiano e controle de processo de petróleo.
7. importante
● A intensidade de luz e captada varia de acordo com o numero, tamanho e forma das
particulas da amostras.
● é utilizada uma solução padrao de formazina que zera o aparelho e gera uma curva de
calibração.
8.
9. Citometria de fluxo
O QUE É: É uma técnica utilizada para contar, examinar e classificar partículas
microscópicas suspensas em meio líquido em fluxo. Permite a análise de vários
parâmetros simultaneamente, sendo conhecida também por citometria de fluxo
multiparamétrica
COMO FUNCIONA: As análises são feitas simultaneamente à medida que as
células ou partículas suspensas na corrente de fluído passam individualmente
por um feixe de luz de um aparelho medidor – o citômetro de fluxo. Alguns
citômetros de fluxo podem separar fisicamente subconjuntos de células
(classificação) com base em suas características citométricas (classificadores de
células).
10. VANTAGENS: As duas maiores vantagens da
citometria de fluxo são sua capacidade de medir um
grande número de parâmetros (2 a 30 ou mais) em
uma amostra e sua capacidade de coletar
informações de milhões de células em questão de
segundos.
Esta técnica analítica é uma ferramenta poderosa
para aplicações que incluem um número
significativo de análises celulares, desde a
fenotipagem até a saúde e viabilidade celular.
APLICAÇÃO:
● Imunofenotipagem
● Estado de saúde celular
● Status do ciclo celular
11. para que serve
A citometria de fluxo pode ser usada para contar grande número de células ou partículas
baseadas em seu tamanho, complexidade interna, fenótipo, estado celular, função celular,
conteúdo do DNA, expressão genética e para quantificar essas mesmas propriedades
celulares
em um nível de célula única.
Isso permite avaliar:
Se as células estão presentes em uma amostra;
Quantas são
Que tipos de células são;
Quais podem ser suas características funcionais;o;
12. exemplo- Um exemplo a ser utilizado é a Imunofenotipagem
Usando anticorpos conjugados com fluorescência direcionados a uma proteína de
interesse, as células que expressam essa(s) proteína(s) na superfície ou intracelularmente
podem ser detectadas por citometria de fluxo. Tipos de células específicos podem ser
distinguidos dentro de uma população mista usando múltiplos anticorpos conjugados
com fluorescência.
A imunofenotipagem por citometria de fluxo é um exame de alta complexidade, tem sido
o método preferencial para a determinação da linhagem celular e análise da maturação
das células nas neoplasias hematológicas. Através dela é possível definir se um paciente
é portador de uma leucemia e seu tipo específico.