O documento descreve a técnica de imunofluorescência, que permite detectar antígenos em células e tecidos através da marcação com anticorpos conjugados a moléculas fluorescentes. A visualização é feita em microscópio de fluorescência, podendo ser direta ou indireta. A técnica tem aplicações no diagnóstico médico e veterinário e na pesquisa, apesar de ter algumas desvantagens como alto custo e subjetividade.

1. Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro
Instituto de Biociências
Disciplina: Didática
Imunofluorescência
Trabalho final realizado por Yuli Maia e Natalia Romeiro como
forma de avaliação para conclusão da disciplina sob coordenação
de Rachel Colacique. Atualizado em Outubro de 2012.

2. Imunofluorescência é uma técnica que
permite a detecção ou localização de
antígenos em tecidos ou células a partir de
uma marcação com anticorpos conjugados
a uma molécula fluorescente.

3. Antígeno – É qualquer molécula que
induza uma resposta imunológica.
Anticorpo – É a resposta gerada pelo
sistema imunológico para combater ou
neutralizar os antígenos.
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4. Os anticorpos se ligam especificamente ao
antígeno como em um sistema de chave e
fechadura, ou seja, jamais um anticorpo se
ligará erroneamente a um antígeno.
Entretanto os anticorpos não são visíveis, por
isso é necessário marca-los de alguma forma,
nessa técnica marcaremos os anticorpos com
moléculas fluorescentes que são
denominadas de fluorocromos.

5. Fluorocromos – São moléculas que
possuem a capacidade de absorver a energia
proveniente de uma luz ultravioleta e emitir
parte dessa energia em forma de luz em um
comprimento de onda visível aos olhos. Esse
fenômeno é denominado de fluorescência.
A visualização dessa reação é feita em um
microscópio de fluorescência.

6. Microscópio de
fluorescência – É um tipo
de microscópio capaz de
energizar a amostra, que está
marcada com anticorpos
conjugados a moléculas
fluorescentes, e de captar a luz
emitida pela a amostra,
tornando assim o resultado
visível aos olhos.
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7. Existem dois tipos de imunofluorescência.
Imunofluorescência direta e Imunofluorescência indireta

8. Imunofluorescência Direta
Fluorocromo
Anticorpo primário
Antígeno
Lâmina
É colocado apenas um anticorpo e esse
é conjugado ao fluorocromo, ou seja, o
antígeno é detectado diretamente pelo
anticorpo primário.

9. Imunofluorescência Indireta
Fluorocromo
Anticorpo secundário
Anticorpo primário
Antígeno
Lâmina
 Nessa modalidade de imunofluorescência,
além do anticorpo primário é colocado um
anticorpo secundário, e esse secundário
anticorpo está conjugado a um fluorocromo,
ou seja, o antígeno é detectado indiretamente.

10. Aplicabilidade da técnica
Tem relevância no diagnostico de doenças humanas e
veterinárias, e no campo da pesquisa para a detecção de
microorganismos e moléculas em diversos materiais.
Também pode ser usada na fenotipagem de células
tumorais.

11. Vantagens da técnica Desvantagens da técnica
 Especificidade
• Alto custo do microscópio de
 Sensibilidade fluorescência
 Reprodutibilidade • Técnica realizada manualmente,
 Simples padronização aumentando a chance de erro
 Detecção e localização de • Subjetividade na leitura do
antígenos intra e extracelulares resultado

12. Imagem de células marcadas por Imunofluorescencia Google imagens

13. Obrigada!
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Imagem de imunofluorescência de células-tronco