Ap9 - Facs

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Ap9 - Facs

  1. 1. Trabalho realizado pelos acadêmicos de Medicina da UFBA Adriana Campos, Nivaldo Cardozo Filho, Sabrina Oliveira e Silvana Asfora, sob orientação dos Professores Roberto Meyer, Ivana Nascimento, Robert Schaer, Cláudia Brodskyn, Songelí Freire e Denise Lemaire, do Laboratório de Imunologia do Instituto de Ciências da Saúde da UFBA. Atualizado em setembro de 2003 Aula 9 FACS (Fluorescence-Activated Cell Scanner Fluorescence-Activated Cell Sorter)
  2. 2. A citometria de fluxo permite a identificação, quantificação e isola- mento de células que estejam marcadas por fluorocromos. Isto pode ser feito por fluorocromos conjugados a anticorpos, que por sua vez se ligam a marcadores celulares. O FACS é portanto um citômetro de fluxo muito utilizado em pesquisa, bem como na rotina de diagnóstico laboratorial. O FACScan permite a caracterização e identificação de células e o FACSorter o isolamento de diferentes populações celulares com distintos marcadores de superfície. Os diferentes citômetros atuais permitem a identificação de três ou mais populações celulares, considerndo diferentes parâmetros característicos das populações celulares. Um exemplo de técnica: uma amostra de células, marcada com Ac mono- clonal fluoresceinado (conjugado com fluorocromo), é introduzida na câma- ra vibratória do aparelho, sendo aspirada pela câmara de fluido do mesmo. Neste local, a amostra sofre ação do laser e então as células são identificadas ou separadas (sofrendo deflecção em campos magnéticos), de acordo com seu tamanho, granulosidade e fluorescência emitida.
  3. 3. FACS (fluorescence-activated cell sorter) AMOSTRA (MISTURA DE CÉLULAS) CÂMARA DE FLUIDO CÂMARA VIBRATÓRIA LASER + _ PLACAS DEFLETORAS TUBOS COLETORES RESÍDUOS FLUORESCÊNCIA VERMELHA FLUORESCÊNCIA VERDE dispersor de luz anterior (define tamanho) dispersor de luz de 90 graus (de- fine granulosidade) separadores
  4. 4. Stites, Terr e Parslow,2000. Algumas aplicações clínicas do FACS Gráfico da análise por FACScanner - Populações de linfócitos CD4 e CD8 Imunofenotipagem de leucócitos . Para o diagnóstico de imunodeficiências congênitas . Para avaliação de pacientes com SIDA/AIDS . Monitorização de pacientes receptores de transplante de medula . Diagnóstico de leucemias e linfomas Imunofenotipagem de tumores em geral

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