O slideshow foi denunciado.
"Western Blotting" Trabalho realizado pelos acadêmicos de Medicina da UFBA Adriana  Campos, Nivaldo Cardozo Filh...
<ul><li>Identifica e caracteriza  antígenos  previamente  desconhecidos,  presentes numa mistura complexa.   </li></ul><ul...
“ Western Blotting” O desenvolvimento do teste  (como exemplo: detecção de  anticorpos anti – HIV em soro): Vírus HIV As p...
Ac anti-Ig humana, ligado a enzima, detecta as proteínas produzindo produto final corado pela adição de cromógeno  95  45 ...
Próximos SlideShares
Carregando em…5
×

Ap11 - Western Blotting

13.678 visualizações

Publicada em

Aula prática: Western Blotting

Publicada em: Saúde e medicina
  • Seja o primeiro a comentar

Ap11 - Western Blotting

  1. 1. &quot;Western Blotting&quot; Trabalho realizado pelos acadêmicos de Medicina da UFBA Adriana Campos, Nivaldo Cardozo Filho, Sabrina Oliveira e Silvana Asfora, sob orientação dos Professores Roberto Meyer, Ivana Nascimento, Robert Schaer, Cláudia Brodskyn, Songelí Freire e Denise Lemaire, do Laboratório de Imunologia do Instituto de Ciências da Saúde da UFBA. Atualizado em setembro de 2003 Ensaio imunoenzimático após transferência eletroforética Aula 11
  2. 2. <ul><li>Identifica e caracteriza antígenos previamente desconhecidos, presentes numa mistura complexa. </li></ul><ul><li>Os antígenos são separados em gel de poliacrilamida (em geral contendo SDS, e em presença de 2-mercaptoetanol; sistema desnaturante) e transferidos para um papel especial (papel tipo nitrocelulose). </li></ul><ul><li>O “Western Blotting” é muito utilizado para confirmação de testes sorológicos de triagem, como o “ELISA” (por exemplo, um teste positivo para HIV). </li></ul><ul><li>O resultado deste teste é obtido após realização de reação imunoenzimática no referido papel, utilizando-se anticorpos heterólogos conjugados a enzimas contra anticorpos do sistema a analisar, por exemplo, anti-IgG conjugados com enzima e o complexo Ag-Ac pode ser detectado por adição do substrato e do cromógeno. </li></ul>
  3. 3. “ Western Blotting” O desenvolvimento do teste (como exemplo: detecção de anticorpos anti – HIV em soro): Vírus HIV As proteínas do vírus HIV são dissociadas em SDS Separação dos Ag através de eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) Os Ag são eletrotrasnferidos para o papel de nitrocelulose, onde reagirão com os Ac do soro do paciente O SDS (dodecil sulfato de sódio) é um detergente - + 35 68 45 12
  4. 4. Ac anti-Ig humana, ligado a enzima, detecta as proteínas produzindo produto final corado pela adição de cromógeno 95 45 24 Os equipamentos necessários: fontes de corrente contínua e cubas uti- lizadas para a transferência eletroforética no Laboratório de Imunologia do ICS-UFBA Resultado de um teste para HIV: controle positivo controle negativo teste PM (KDa) 160 41 24

×