O documento descreve vários testes diagnósticos baseados em imunologia, incluindo anticorpos monoclonais, reações de precipitação, aglutinação e neutralização. Também discute técnicas como imunofluorescência, ELISA, Western Blotting e o uso de anticorpos monoclonais no diagnóstico e terapia.

1. UNIVERSIDADE ESTADUAL DA PARAÍBA
CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAUDE
DEPARTAMENTO DE ENFERMAGEM
DOCENTE: KARLETE VIEIRA
EQUIPE: ADRIANO, ANA KARINE, DANIELE FIDELIS, DHÉBORA
CHRISTINNE, KAREN SANTOS, TAILLANY CAROLINE, VANESSA KARLA

2. Imunodiagnóstico
Diagnóstico de uma doença ao longo da história;
• Elementos essenciais dos testes diagnósticos:
 Sensibilidade;
 Especificidade.

3. Testes diagnósticos com base
imunólogica
• Alta especificidade do sistema imune;
• Robert Koch:
-Vacina contra a tuberculose;
-Suspensão de Mycobaterium tuberculosis;
-Teste de tuberculina.
Fonte: http://www.daviddarling.info/encyclopedia/K/Koch_Robert.html Fonte: http://oddish3.rssing.com/chan-3342108/all_p12.html

4. Anticorpos monoclonais

5. Anticorpos monoclonais
• Hibridoma é a combinação de uma célula B “normal” com
uma célula B cancerosa.
• Quando uma hibridoma cresce em cultura, suas células
geneticamente idênticas continuam a produzir o tipo de
anticorpo característico da célula B ancestral;
• Os clones das células secretoras de anticorpo podem ser
mantidos indefinidamente em cultivo celular, podendo produzir
grandes quantidades de moléculas idênticas de anticorpo;

6. Anticorpos monoclonais
ou Mabs são anticorpos
cujo todas suas moléculas
são produzidas por um
clone hibridoma único.
São altamente
específicos, uniformes e
podem ser prontamente
produzidos em grandes
quantidades;

7. • Usados como ferramentas diagnósticas e terapêuticas e para superar
efeitos indesejáveis do sistema imune. Exemplos:
• Testes de gravidez usam Mabs para indicar a presença de um
hormônio excretado somente na urina de uma mulher;
• Muromonab-CD3 usado para diminuir a rejeição de transplante de
rim;
• Infliximab (Remicade) ou Entanercept (Embrel) direcionados para
bloquear a ação causadora da inflamação na artrite reumatoide e
distúrbio inflamatório intestinal da doença de Crohn;
• Ibritumonab (Zevalin) e o Rituximab (Rituxan) usado para o câncer
de Hodgkin;
• Trastuzumab (Herceptin) usado para o câncer de mama;

8. • O uso terapêutico de Mabs era limitado pois seus
anticorpos eram produzidos apenas por células de
camundongos (murina). O sistema imune dos
pacientes reagia contra as proteínas estranhas do
camundongo.
• Novas gerações de Mabs:
• Anticorpos monoclonais quiméricos usam
camundongos geneticamente modificados
para produzir uma molécula híbrida
humano/camundongo. A região variável do
anticorpo é murina. A região constante é
humana. São aproximadamente 66%
humanos. Exemplo: Rituximab;

9. • Anticorpos humanizados são desenvolvidos
para que a porção murina esteja limitada aos
sítios de ligação ao antígeno. A região
variável e a região constante são de fonte
humana. São aproximadamente 90%
humanos. Exemplos: Alemtuzumab e o
Trastuzumab;
• O objetivo final é desenvolver anticorpos
humanos completos. Uma abordagem é
modificar geneticamente camundongos para
que contenham genes humanos.

10. Reações de precipitação
• As reações de precipitação envolvem a reação de antígenos
solúveis com anticorpos IgG ou IgM para formar grandes
agregados moleculares, as treliças;
• Ocorrem em dois estágios distintos:
• Os antígenos e os anticorpos
rapidamente formam pequenos
complexos antígeno-anticorpo.
Ocorre dentro de alguns segundos;
• Os complexos antígeno-anticorpo
formam treliças que se precipitam na
solução. Pode levar minutos ou horas;

11. Reações de aglutinação

12. Reações de aglutinação
Aglutinação: é o agrupamento de
partículas usualmente por moléculas
de AC que se ligam a AG na
superfície de partículas adjacentes.

14. Os testes de Aglutinação podem
ser de dois tipos:
• Teste de Aglutinação Direta: Detectam
anticorpos contra quantidades relativamente
grandes de antígenos celulares como hemácias,
bactérias e fungos.

16. Teste de Aglutinação
indireta(Passiva)
• Os Anticorpos contra antígenos solúveis
podem ser detectados por testes de
aglutinação. Os antígenos são adsorvidos em
partículas como bentonita ou mais
frequentemente esferas de látex minúsculas.

18. Hemaglutinação
• Quando reações de aglutinação envolvem a
agregação de hemácias.

20. Reações de
Neutralização

21. Reações de Neutralização
• A neutralização é uma reação antígeno-
anticorpo;
• Um antissoro contendo anticorpo que
neutraliza uma toxina é chamado
antitoxina;
• As reações também podem ocorrer
quando vírus são ligados por anticorpos
específicos;
• Teste in vitro são utilizados para
identificar um vírus e determinar o
anticorpo viral.

22. Teste de Inibição da hemaglutinação
viral.

23. Reações de fixação do complemento
• Usada para detectar quantidades pequenas de
anticorpos;
• Baseia-se na interação entre antígeno anticorpo
seguida pela fixação do componente do
sistema complemento;
• Se houver anticorpos no soro ocorrerá a
formação de imunocomplexos.

24. é adicionada em cada poço uma
fonte de Complemento
• O passo seguinte é a adição em
conjunto de hemácias anticorpos
contra estas células (sistema
indicador ou hemolítico).
• Se houver Complemento livre no
meio, as hemácias serão lisadas
• mas se o Complemento
estiver ligado aos imunocomplexos
não ocorrerá hemólise e a reação
será considerada como positiva

25. Técnicas de anticorpos
florescentes

26. • É uma técnica que permite :
Identificar microrganismos
Detectar anticorpos específicos
Corantes
fluorescentes

27. FA Direto- Utilizado para identificar um antígeno.
FA Indireto- Utilizado para detectar a presença de um
anticorpo especifico no soro.

29. O anticorpo especifico para
contra o micróbio presente, ele
reage com um antígeno para
formar um complexo

30. ENSAIO IMUNOSSORVENTE
LIGADO À ENZIMA
(ELISA)

31. O ensaio imunossorvente ligado á enzima
(ELISA, de enzyme-linked immnosorbet assay) é
mais amplamente utilizado em um conjunto de
testes conhecidos como imunoensaio enzimatico
(EIA, de enzyme immunossay).

32. ELISA direto
O ELISA direto é utilizado para detectar
antígenos contra um anticorpo especifico ligado
a placa de teste.

33. ELISA indireto
O ELISA indireto é utilizado para detectar
anticorpo contra um antígeno ligado a placa
teste.

34. HIV
(Vírus da imunodeficiência humana)
É o mais realizado para
diagnosticar a doença.
Nele, profissionais de
laboratório buscam por
anticorpos contra o HIV
no sangue do paciente.

35. WESTERN BLOTTING OU
IMMUNOBLOTING

36. INTRODUÇÃO:
• Western Blotting é uma técnica usada para
detectar proteínas de uma determinada amostra
e serve como teste confirmatório dos
resultados obtidos em testes
imunoenzimaticos.

37. MÉTODOS DE EXECUÇÃO
DE WESTERN BLOTTING

38. Componentes da
mistura
Eletroforese em
gel
Filtro/membrana
Anticorpo
ligado a enzima
Análise

39. O FUTURO DA TERAPÊUTICA E DO
DIAGNÓSTICO IMUNOLÓGICOS
• A introdução dos anticorpos monoclonais
revolucionou o diagnóstico imunológico ao
tornar disponível grandes quantidades de
anticorpos específicos.

40. REFERÊNCIAS
• TORTORA, Gerard J.. Microbiologia. 6. ed. Porto
Alegre: Artmed, 2003. 827 p. il. ISBN 857307678X
• http://biomedicinapadrao.wordpress.com/2010/
05/05/elisa/
• http://www.saudepratodos.com/conteudo.php?t
=132