O documento descreve os meios de cultura utilizados para o crescimento de microrganismos em laboratório. São apresentados os principais tipos de meios de acordo com a consistência (sólidos, semi-sólidos e líquidos), classificação (complexos, sintéticos, diferenciais, seletivos, de enriquecimento), condições para o crescimento de bactérias (temperatura, pH, atmosfera gasosa) e métodos de preparação e esterilização dos meios.
Métodos de detecção de resistência bacteriana aos antimicrobianos em bacilos ...João Marcos
Métodos laboratoriais utilizados para a detecção de resistência bacteriana aos antimicrobianos (ou antibióticos), tendo como foco, neste trabalho, os bacilos Gram-negativos.
Métodos de detecção de resistência bacteriana aos antimicrobianos em bacilos ...João Marcos
Métodos laboratoriais utilizados para a detecção de resistência bacteriana aos antimicrobianos (ou antibióticos), tendo como foco, neste trabalho, os bacilos Gram-negativos.
É todo o esforço organizado e documentado dentro de uma empresa com o sentido de desenvolver, produzir, manter e assegurar as características do produto, de modo que cada unidade do mesmo esteja de acordo com suas especificações.
É todo o esforço organizado e documentado dentro de uma empresa com o sentido de desenvolver, produzir, manter e assegurar as características do produto, de modo que cada unidade do mesmo esteja de acordo com suas especificações.
Trabalho na disciplina de Microbiologia.
Com enfoque em meios de cultura usados em laboratórios de analises clinicas. é utilizado no estudo das propriedades
bioquímicas das bactérias, auxiliando, assim,
sua identificação. Auxiliando no diagnóstico laboratorial. a escolha dos meios de cultura, para o
processamento inicial das amostras é muito
importante e está condicionada à flora
patogênica desse local;
- em geral é usado mais de um tipo de meio,
no sentido de fornecer condições de
crescimento a todos os patógenos possíveis
de estarem presentes.
O conceito de microbiologia é relativamente novo, no entanto, o controle dos microrganismos já era realizado a centenas de anos atrás. O cozimento dos alimentos é um dos métodos de preservação dos alimentos mais antigo e que é empregado até hoje com algumas modificações. Os microrganismos estão presentes em várias coisas que acontecem à nossa volta, estão envolvidos na fermentação, reciclagem de nutrientes, fabricação de alimentos e bebidas, na indústria farmacêutica, medicina e na agricultura.As descobertas que ocorrem na microbiologia ajudam os profissionais da saúde a compreender, diagnosticar e tratar doenças que não são bem compreendidas.
Ao trabalharmos com o manuseio de microrganismos, seja em um laboratório, um hospital, uma indústria dependemos de c onhecer formas de controlar os microrganismos no ambiente em quese encontram. Vários são os métodos que podem manter os microrganismos em uma população estável e a melhor a ser escolhida depende do que você quer destruir
Durante a quebra da teoria da gera ção espontânea, os cientistas da época comprovaram que a fervura poderia matar muitos microrganismos, embora bactérias esporulantes pudessem sobreviver devido à sua resistência ao calor. Os cientistas descobriram que os microrganismos poderiam ser mortos quando expostos a várias substâncias químicas ou de serem removidos do ar ou de um líquido utilizando filtros especiais.
Caro aluno (a),
Na presente atividade prática, você dará sequência na aula prática 1, cujo preparou os meios de cultura bacteriano e agora irá realizar o cultivo de bactérias presente no cotidiano. É de conhecimento cientifico que as infecções relacionadas com os profissionais da área se devem a higienização incorreta das mãos. Portanto, vocês irão semear no meio de cultivo amo stras coletas de mãos não higienizadas, higienizada apenas com álcool 70 e amostra obtida após a realização correta da antissepsia com álcool iodado.VÍDEO-POCKET LEARNING
EMBASAMENTO TEÓRICOAs substâncias antimicrobianas, são aquelas que matam ou inibem o crescimento dos microrganismos. Dependendo do microrganismo afetado se tornam específicos como: antibacterianos, antifúngicos, antiprotozoarios e antiviral. Os agentes antimicrobianos que matam os microrganismos são denominados de microbicidas.
As denominações bactericidas e fungicidas indicam o tipo de microrganismo destruído. E quando ocorre a destruição de todos os microrganismos presentes em um material é denominado de esterilização. No entanto tem os agentes que inibem o desenvolvimento do microrganismo, que são chamados microbiostáticos, e claro que muitas definições podem surgir sendo os mais utilizados fungistático e bacteriostático.
Caros alunos (as),
Ao realizar a prática, separe um espaço organizado, limpo e arejado. Separe todos os materiais necessários e coloque-os em uma disposição de fácil acesso e que permita que você fique confortável, de preferência sentado, respeitando uma postura correta.
Tome cuidado ao manipular os materiais, principalmente no momento de utilizar a fonte de calor, seja o fogão ou o micro-ondas. Coloque o seu material em recipiente adequado para cada situação.
/
VÍDEO POCKET LEARNINGPASSO A PASSO DA PRÁTICAProcedimento 1: Preparo do meio de cultura
1. Inicie o preparo separando os materiais.
2. Posteriormente, macere o tablete de caldo de carne, desmanchando os grumos. Misture com a gelatina em pó. Adicione uma xícara de água, leve ao fogo até ferver levemente e dissolver a gelatina e o caldo de carne.
3. Reserve e deixe esfriar brevemente.
Procedimento 2: Acondicionamento do meio de cultura em placa de Petri
1. Você encontrará as placas de Petri estéreis disponíveis para venda em lojas online. Somente abra as placas no momento da transferência do meio para evitar a contaminação das mesmas. 2. Para evitar a contaminação durante a manipulação das placas e transferência do meio de cultura. Acenda o fogo de uma das bocas do fogão e manuseie a transferência no perímetro ao entorno no fogo.
3. Transfira uma pequena quantidade do meio para as placas de Petri e aguarde sua solidificação em temperatura ambiente ou em geladeira para acelerar o processo caso seja necessário. Mas lembre-se, caso tenha levado as placas para solidificação em geladeira antes de realizar o semeio (prática 2) a mesma deverá estar em temperatura ambiente.
Escaneie ou clique sobre o QR Code
Caro aluno (a), Você deverá entregar o Relatório tipo Apresentação Simples (Power point ). Para isso, faça o download do template, disponibilizado junto a este roteiro, e siga as instruções contidas no mesmo.Vídeo cultivando microrganismos em casa Parte 1. Disponível em:
https://www.youtube.com/watch?v=u3Wfp_YAjIc
CONTROLE DO CRESCIMENTO MICROBIANO –ANTISSEPSIA DAS MÃOS1. Executar corretamente a higienização das mãos, compreendendo a diferença entre o método simples e a antissepsia.
2. Aplicar os conhecimentos obtidos na aula prática demonstrativa através da realização do semeio de amostras em meio de cultura.O conceito de microbiologia é relativamente novo, no entanto, o controle dos microrganismos já era realizado a centenas de anos atrás. O cozimento dos alimentos é um dos métodos de preservação dos alimentos mais antigo e que é empregado até hoje com algumas modificações. Os microrganismos estão presentes em várias coisas que acontecem à nossa volta, estão envolvidos na fermentação, reciclagem de nutrientes, fabricação de alimentos e bebidas, na indústria farmacêutica, medicina e na agricultura.As descobertas que ocorrem na microbiologia ajudam os profissionais da saúde a compreender, diagnosticar e tratar doenças que não são bem compreendidas.
Ao trabalharmos com o manuseio de microrgan
istático e bacteriostático.
Os agentes de controle dos microrganismos podem sofrer grande influência de vários fatores ambientais, bem como as características biológicas do microrganismo. Dentre as variáveis de maior importância a serem consideradas quando se quer avaliar a eficácia de uma agente antimicrobiano são: o tamanho da população microbiana; Intensidade ou concentração do antimicrobiano; tempo de exposição ao agente microbiano; temperatura que os microrganismos são expostos ao agente antimicrobiano; natureza do material que contém microrganismos e característica do microrganismo presente.
Em relação ao tamanho da população, quanto maior for mais tempo vai levar para morrer. Quanto menor for a intensidade ou a concentração do antimicrobiano mais tempo se leva para destruir uma população de microrganismos. E quando se leva em consideração o tempo de exposição, quanto maior for o tempo maior será o número de células mortas.
Os agentes microbianos são classificados como agentes físicos e químicos. A ocorrência da redução do número de microrganismos por meio de um método físico ou químico é denominado de Escaneie ou clique sobre o QR Code
desinfecção. Enquanto, a esterilização é a destruição de todas as formas de vida microbiana (fungos,
bactérias e vírus) seja por meio da aplicação de um método físico ou químico.
Entre os agentes físicos temos: o calor, a flambagem, a filtragem e a radiação. Todavia, os
métodos químicos utilizam substâncias que têm capacidade de matar ou inibir o crescimento de um
microrganismo. Dentre os métodos químicos podemos citar os gases tóxicos e as soluções
desinfetantes.
Entre as soluções desinfetantes mais utilizadas nos laboratórios de microbiologia podemos citar:
o álcool 70%, ou hipoclorito de sódio e o peróxido de hidrogênio. O álcool 70% é amplamente utilizado
na obtenção do microrganismo em cultivo puro, como também em superfícies de trabalho e câmara
de fluxo. Quando utilizamos o álcool 70 % para desinfetar fragmentos estes ficam de 30 a 60 segundos
mergulhados no álcool 70%. O hipoclorito de sódio ou cálcio é eficiente para eliminar microrganismos
oportunistas da superfície dos tecidos. O hipoclorito de sódio ou cálcio é utilizado nas concentrações
de 0,05 a 0,1%. E o peróxido de hidrogênio é usado na concentração de 5% (pv).
A higienização do laboratório é imprescindível temos que estar atentos a vários cuidados de
assepsia e o material a ser utilizado pois qualquer corpo estranho pode levar a risco todo o trabalho,
experimento ou resultado de uma pesquisa. IMPORTÂNCIA DA HIGIENIZAÇÃO DAS MÃOS
De acordo com as comprovações científicas as mãos são responsáveis pela transmissão das
infecções relacionadas a assistência à saúde, portanto, é de suma importância a realização de
procedimentos de higienização das mãos para diminuir as taxas de infecções principalmente entre os
profissionais de saúde.
VÍDEO POCKET LEARNINGPASSO A PASSO DA PRÁTICAProcedimento 1: Identificação das Placas de Petri
Escolha um local confortável com superfície previamente higienizada para iniciar o experimento.
a) Na aula prática 1 você preparou 3 meios de cultura sólidos em placas de Petri e após a solidificação dos meios poderá iniciar o experimento.
b) Com o auxílio de uma caneta marcadora identifique as placas de Petri como: 1) mão sem lavar, 2) álcool 70° e 3) Antissepsia com álcool iodado.
Procedimento 2: Obtenção da amostra e semeadura nos meios de culturaPara as 3 etapas do experimento a amostra deverá ser obtida sempre da mesma mão, podendo escolher realizar a coleta da mão direita ou esquerda.
a) Com o auxílio de um swab ou cotonete limpo (de preferência obtidos de embalagem lacrada sem estar no uso cotidiano). O mesmo foi umedecido no soro fisiológico e friccionadosobre a pele da palma da mão sem estar higienizada. Em seguida, a amostra foi semeada na placa de Petri contendo a identificação “mãos sem lavar (1)”; A semeadura consiste em depositar a amostra na placa de Petri em forma de estrias como mostrado na imagem abaixo.
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a) Posteriormente, foi realizado a higienize das mãos com álcool em gel 70° (2). Um novo
swab ou cotonete foi umedecido no soro fisiológico e esfregue na pele das mãos e realizado a
semeadura na placa que estava identificada como álcool 70°.
b) Para finalizar a última parte do experimento, foi realizada a higienização das mãos com
sabão de acordo com a técnica de lavagem das mãos. Posteriormente, foi realizada a antissepsia das
mãos pré-lavadas, com álcool iodado deixando agir por 1 minuto, esperando secar ao ar. A seguir foi
utilizado outro swab ou cotonete umedecido no soro fisiológico e o mesmo foi friccionado na palma da
mão lavada e feito antissepsia corretamente. Após isto, foi realizado a semeadura no meio de cultura
identificado como antissepsia com álcool iodado (III).
Procedimento 3: Crescimento microbiano
OBSERVAÇÃO: Caso queira acelerar o processo de crescimento bacteriano e a temperatura se
sua cidade estiver fria o ideal que seja criado um ambiente aquecido imitando uma estufa. E
para isso basta acoplar uma lâmpada através de um foro na caixa de papelão e mantê-la ligada
na tomada. OBSERVAÇÃO: Caso queira acelerar o processo de crescimento bacteriano e a temperatura se
sua cidade estiver fria o ideal que seja criado um ambiente aquecido imitando uma estufa. E
para isso basta acoplar uma lâmpada através de um foro na caixa de papelão e mantê-la ligada
na tomada. Caro aluno (a), Você deverá entregar o Relatório tipo Apresentação Simples. Neste caso, estruture seu documento conforme apresentado a seguir. Para isso, faça o download do template em Power Point, disponibilizado junto a este roteiro.
• Vídeo correta lavagem das mãos: https://www.youtube.com/watch?v=qR0ejxtr_Wk• Vídeo aula prática antissepsia das mãos: https://eaulas.usp.br/portal/video.action?idItem=20059• Roteiro de Aula Práti
Microbiologia Geral e Biossegurança
MICROBIOLOGIA GERAL E BIOSSEGURANÇA1. Todos os campos do Formulário Padrão deverão ser devidamente preenchidos.
2. Esta é uma atividade individual. Caso seja identificado plágio, inclusive de colegas,
a atividade será zerada.
3. Cópias de terceiros como livros e internet, sem citar a fonte caracterizam-se como plágio, sendo o trabalho zerado.
4. Ao utilizar autores para fundamentar seu Projeto Integrador, os mesmos devem
ser referenciados conforme as normas da ABNT.
5. Ao realizar sua atividade, renomeie o arquivo, salve em seu computador,
anexe no campo indicado, clique em responder e finalize a atividade.
6. Procure argumentar de forma clara e objetiva, de acordo com o conteúdo da disciplina.
Formatação exigida: documento Word, Fonte Arial ou Times New Romantamanho 12.
MEIO DE CULTURA1. Conhecer as técnicas básicas utilizadas na rotina da microbiologia.
2. Produzir o meio de cultura sólida utilizado para favorecer o crescimento bacteriano.
A rotina laboratorial executada por profissional atuante nas análises clínicas é imprescindível para monitorar o estado de saúde dos indivíduos que devem manter o hábito constante de procurar atendimento médico-laboratorial. Os exames básicos promovem uma abordagem ampla a respeito dos agentes patológicos que pode estar prejudicando a saúde do paciente au xiliando profissionais da saúde a compreender, diagnosticar e tratar doenças.Caro aluno (a),
Na presente atividade prática, você irá preparar um meio de cultura caseiro utilizando recursos adaptados da versão laboratorial, mas que proporcionará a você a noção de como o meio de cultura para cultivo bacteriano é preparado. Vamos usar gelatina como substituto para o Ágar, responsável pela solidificação do meio. E o caldo de legumes que será fonte de nutrientes para o crescimento e reprodução das bactérias.
VÍDEO-POCKET LEARNING
EMBASAMENTO TEÓRICOA cultura pura é quando se obtêm um microrganismo por meio de uma única célula que cresce e se multiplica no meio de cultura , possibilitando o estudo das características morfológicas e fisiológicas dos microrganismos.
Quando estamos cultivando os microrganismos empregamos meio de cultura que contém nutrientes e vitaminas necessários parao seu crescimento e reprodução. O fornecimento de nutrientes tem que atender às exigências das espécies a serem cultivadas promovendo o crescimento e ou esporulação satisfatória do microrganismo. A maior parte dos microrganismos cultiváveis crescem em meio à cultura que contém uma fonte de carbono e nitrogênio e em menor quantidade outros nutrientes como potássio, fósforo, enxofre, ferro e manganês.
O carbono é um elemento de grande importância para o desenvolvimento de microrganismos,seja no seu habitat ou em meio de cultivo. Ele é um elemento estrutural que é considerado a principal fonte de energia. O carbono é fornecido por meio de monossacarídeos como glicose, frutose e galactose.
A higienização correta das mãos é uma medida individual simples e imprescindível para prevenir
a propagação das infecções. A higienização das mãos pode ser: simples, antisséptica, fricção
antisséptica e a antissepsia cirúrgica das mãos. A higienização das mãos possui as seguintes
finalidades:
1) Remoção de sujidade, suor, oleosidade, pelos, células descamativas e microbiota da
pele, interrompendo a transmissão de infecções veiculadas ao contato;
2) Prevenção e redução das infecções causadas pelas transmissões cruzadas.
A utilização de agente antisséptico para higienização das mãos deve ter ação antimicrobiana
imediata e efeito residual ou persistente. Não devem ser tóxicos, alergênicos ou irritantes para a pele.
Recomenda-se que sejam agradáveis de utilizar, suaves e, ainda, ofereçam boa relação
custobenefício, dentre os agentes antissépticos disponíveis os mais utilizados são: álcool e a
clorexidina. Os álcoois apresentam rápida ação e excelente atividade bactericida e fungicida usados
para higienização das mãos são o etanol, o isopropanol e o n-propanol. A clorexidina é um agente
antisséptico cuja atividade antimicrobiana é mais lentamente que a dos álcoois, sendo considerada de
nível intermediário. Porém, seu efeito residual, pela forte afinidade com os tecidos, torna-o o melhor
antisséptico disponíveis (CONSELHO REGIONAL DE FARMÁCIA DE SÃO PAULO, 2010).
A técnica de higienização das mãos se torna inadequado na prática diária pelo esquecimento
de algumas etapas necessárias deste procedimento, havendo preocupação, por parte dos
profissionais de saúde, com a quantidade e não com a qualidade deste ato. As principais falhas na
técnica ocorrem, principalmente, pela não utilização de sabonete e a não observação das superfícies
das mãos a serem friccionadas. A higienização das mãos dos profissionais da saúde pode ser feita
utilizando: água e sabonete, preparação alcoólica e antisséptico degermante.
As técnicas de higienização das mãos podem variar, dependendo do objetivo ao qual se
destinam, a eficácia deste procedimento depende da duração e da técnica empregada.
1) Higienização simples das mãos
Possui a finalidade de remoção dos microrganismos que colonizam as camadas superficiais da
pele, assim como o suor, a oleosidade e as células mortas, retirando a sujidade propícia à permanência
e à proliferação de microrganismos.
Duração do procedimento: 40 a 60 segundos.
2) Higienização antisséptica das mãos A finalidade dessa técnica é promover a remoção de sujidades e de microrganismos, reduzindo
a carga microbiana das mãos, com auxílio de um antisséptico. A técnica de higienização antisséptica
é igual àquela utilizada para higienização simples das mãos, com a diferença que o sabonete é
substituído por um antisséptico degermante, por exemplo, clorexidina.
Duração do procedimento: 40 a 60 segundos.
Os meios de cultivo podem apresentar se: seletivos, não seletivos e diferenciais. Os meios de
cultivos seletivos são aqueles que você vai adicionar uma substância que favorece o desenvolvimento
de um determinado organismo. Por exemplo adiciona cristal de violeta ao meio de cultivo favorecendo
o desenvolvimento de bactérias Gram negativa. Os meios de cultivo que desenvolvem uma grande
gama de microrganismos são denominados meios não seletivos. E os meios diferenciais, são meios
que permitem, mediante a adição de reagentes, verificar o comportamento de dois ou mais
microrganismos. Por exemplo quando adiciona ao meio de cultivo eosina e azul de metileno consegue
ver a diferença de Escherichia coli de Enterobacter aerogenes.
O meio de cultivo Batata-agar-dextrose (BDA), que é considerado o meio universal pois suporta
o crescimento de muitos organismos (fungos e bactérias) por isso é usado mundialmente como meio
de rotina nos laboratórios para o isolamento (obtenção da cultura pura) e manutenção temporária das
culturas.
A batata serve como importante fonte de Carboidrato, o amido é absorvido pelo microrganismo
como glicose após a hidrólise enzimática. A dextrose na quantidade certa permite o crescimento do
microrganismo pois é um monossacarídeo mais importante utilizado como fonte de energia na
respiração de procariotos e eucariotos. Como é preparado este meio, qual a receita do meio? O modo
de preparo é simples. Primeiro passo é ferver 200g de batata em 500 ml de água por 30 minutos.
Em seguida filtrar o caldo em gases. Fazer a fusão do ágar (20g) junto com a quantidade de
dextrose (20g) em 500 ml de água. Em seguida adicione o caldo e complete o volume para 1000 ml
de água. E o meio está pronto para ser esterilizado. Após ser esterilizado pode ser vertido em placas
de Petri, para ser feito o isolamento do microrganismo.
Referência: Página 26-28 da unidade II da apostila de Microbiologia e biossegurança.Materiais de consumo:
Descrição Observação3 placas de Petri estéril descartável Material a ser fornecido pelo alunoÁgua Material a ser fornecido pelo aluno 1 tablete de caldo de carne Material a ser fornecido pelo aluno 1 envelope de gelatina em pó incolor Material a ser fornecido pelo aluno Fogão Material a ser fornecido pelo aluno Panela Material a ser fornecido pelo aluno Software/aplicativo/simuladorSim ( ) Não ( X )
Em caso afirmativo, qual?
Pago ( ) Não Pago ( )
Tipo de Licença: Não se aplica
Descrição do software/aplicativo/simulador:
Caso não seja necessário o uso do recurso, preencher com *Não se aplica (NSA)
O nitrogênio é a parte essencial para a formação dos aminoácidos que compõem as proteínas e é fornecido de forma orgânica (asparagina, caseína e peptona) e de forma inorgânica (nitrato de sódio e nitrato de cálcio). Enquanto que o enxofre é utilizado na forma de sulfato para a biossíntese de aminoácidos como cisteínas e metio nina. O enxofre na forma de sulfeto pode ser tóxico aos microrganismos. O fosfato é um componente da membrana e está presente na síntese dos ácidos nucleicos e ATP e é fornecido como fosfato de potássio. Os demais nutrientes são necessários em pequena quan tidade e funcionam como cofatores. Entretanto, a composição do meio de cultivo depende do microrganismo que se deseja cultivar e do objeto de estudo.
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De modo geral, quando trabalhamos com o cultivo de microrganismos o ambiente é asséptico,
ou seja, ambiente livre de contaminação. Após o preparo dos meios de cultivo eles devem ser
esterilizados, para garantir que estamos trabalhando somente com o microrganismo que pretendemos
estudar. Os meios de cultivo são classificados quanto: sua consistência; composição e seletividade.
Quanto à consistência, o meio pode ser líquido ou sólido. O meio líquido contém todos os
nutrientes necessários para o crescimento do microrganismo são dissolvidos em água. Uma vez
preparado e esterilizado pode inserir o microrganismo que se pretende trabalhar em meio de cultivo.
Este meio é utilizado quando se tem por objetivo obter maior massa em menor tempo, geralmente é
utilizado para o crescimento de bactérias. Contudo, os meios sólidos são preparados a partir da adição
de um agente solidificador, o AGAR na concentração de 1,5 a 2% p/v, antes de esterilização. Este tipo
de meio é o mais utilizado para a obtenção de culturas puras para estudar as características
morfológicas e para a estocagem de culturas puras.
O meio de cultivo em relação a sua composição pode ser: Sintético, semissintético e natural.
O meio sintético é quando sua composição química e concentrações são conhecidas. Um
exemplo é o meio CZAPK (nitrato de sódio 2g L-1, sulfato de magnésio 0,5 2g L-1, cloreto de potássio
0,52g L-1, sulfato ferroso 0.01 2g L-1, difosfato de potássio 1,0 2g L-1, sacarose 30 2g L-1, e o pH final
7,2).
O meio de cultivo semissintético é a composição química é parcialmente conhecida de alguns
componentes, por exemplo o meio de cultivo batata-ágar-dextrose. Sua composição é 500 ml do caldo
de batata (componentes desconhecidos), 20g dextrose e 20 g de ágar e completa para 1000 ml de
água.
Quando a composição do meio é desconhecida por completo, é denominado de meio de
cultivo natural como por exemplo o meio cenoura-ágar, que é composto de 400 ml do extrato de
cenoura, 20 g de ágar e completa para 1000 ml de água. O meio natural por apresentar baixo custo,
acaba sendo o mais utilizado nos laboratórios de pesquisa.
2. MEIO DE CULTURA
DEFINIÇÃO
- São preparados especiais com
finalidade de cultura e isolamento de
microrganismos.
- Uma grande variedade de
processo e de preparações nutrientes
é utilizada para induzir o crescimento
e as reproduções de
microorganismos.
3. MEIOS DE CULTURA
- Não existe um meio de cultura
universal para o crescimento de todos os
microrganismos.
Ex: não existe meio de cultura para
microrganismos como Treponema
pallidum e Micobacterium leprae.
- Estes microrganismos só podem
ser cultivados em animais de laboratório.
4. MEIOS DE CULTURA
NATURAIS
- Lagos
- Oceanos
- Solo
ARTIFICIAIS OU SINTÉTICOS
- São nutrientes preparados no
laboratório para o crescimento de
microrganismos.
6. MEIOS DE CULTURA
PREPARAÇÃO
- De acordo com o fabricante.
- Técnica de preparação vem
especificada no rótulo dos frascos.
- Pesar e hidratar o meio conforme
as instruções do fabricante.
8. MEIOS DE CULTURA
MÉTODOS DE ESTERILIZAÇÃO
1 - Autoclave (calor úmido) 121ºC
por 15 a 20 minutos.
- Vapor fluente
9. MEIOS DE CULTURA
MÉTODOS DE
ESTERILIZAÇÃO
2 – FILTRAGEM
- Produtos termo sensíveis
- Membranas de acetato de
celulose (0,22 μm).
10. RECIPIENTES PARA OS MEIOS
DE CULTURA.
- Placas de petri, tubos de ensaio,
garrafas, frascos, etc...
11. CONSTITUINTES DO MEIO DE
CULTURA
- Água: Principal solvente dos
nutrientes.
- Fontes de Carbono: pode ser do
CO2 ou de nutrientes orgânicos
(carboidratos, lipídeos e proteínas).
- Fonte de energia: Carboidratos
como amido, glicogênio,
monossacarídeos
12. CONSTITUINTES DO MEIO DE
CULTURA
• - Fonte de Nitrogênio “base amino-
proteína”: peptidase: Aminoácidos,
peptídeos, proteínas complexas e
peptona.
• - Fontes de oxigênio, hidrogênio,
fósforo (fosfatos) e enxofre (sulfatos)
- Vitaminas: Complexo B ( biotina e
13. CONSTITUINTES DO MEIO DE
CULTURA
- Sais tamponados: Fósforo
(fosfatos), enxofre (sulfato) e citrato.
- Sais minerais: Cálcio, Ferro,
Magnésio
- Fatores de crescimento: sangue,
soro e extrato de levedura.
14. MEIOS DE CULTURA
- Agentes seletivos: Químicos,
Corantes, e Antimicrobianos
- Indicadores de pH: feno vermelho
- Agentes de gelificação para
meios sólidos: Ágar
16. 1 – DE ACORDO COM A CONSISTÊNCIA
SÓLIDOS
- Usa ágar, um polímero de
galactose como agente solidificante na
concentração de 1,35 a 2,0%.
- Funde-se à 100ºC, Líquido à 40ºC
e sólido à 37ºC.
- São feitos em frascos, placas de
petri e tubos de ensaio.
17. 1 – DE ACORDO COM A
CONSISTÊNCIA
SEMI-SÓLIDOS
- Usa ágar, como agente
solidificante na concentração de 0,2 à
0,75%.
- Funde-se à 100ºC, Líquido à
40ºC e Semi-sólido à 37ºC.
- São feitos em tubos de ensaio
18. 1 – DE ACORDO COM A
CONSISTÊNCIA
LÍQUIDOS
- São os meios isentos de ágar.
- São sempre líquidos mesmo até
a 37ºC e em temperaturas inferiores.
- São feitos em tubos de ensaio
19. CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO: o crescimento de
bactérias é visualizado pela formação de
colônias.
MEIO SEMI-SÓLIDO: o crescimento
de bactérias é visualizado pela turvação.
Meio muito utilizado para verificar a
motilidade (movimento) da bactéria.
MEIO LÍQUIDO: o crescimento de
bactérias é visualizado pela turvação do
meio.
20. CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO
COLÔNIAS: são milhares de células
bacterianas derivadas de uma única célula
bacteriana semeada na superfície do ágar.
TEMPO PARA VISUALIZAÇÃO DAS
COLÔNIAS:
- Maioria dos microrganismos cresce
de 12 à 48 horas.
- Outros exigem semanas e até mêses.
26. CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO X MEIO LÍQUIDO
- Meio líquido é impossível afirmar a
existência de mais de uma espécie de
bactérias ou até mesmo quantificar.
- Meio sólido pode-se afirmar a
presença de várias espécies
bacterianas.
27. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE
CULTURA
2 – TIPOS ou FUNÇÃO
MEIOS COMPLEXOS
- São meios quimicamente
indefinidos, mas tem como função
similar ao ambiente natural da bactéria.
Ex: Ágar sangue, Ágar chocolate.
28. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE
CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS SINTÉTICOS
- São meios de composição química
conhecida. São utilizados para estudo de
necessidades nutricionais de
determinadas bactérias.
Ex: Meio para micobactérias.
29. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DIFERENCIAIS
- São meios que permitem a distinção
(diferenciação) entre dois ou mais tipos de
bactérias pelas simples observação das
características apresentadas pelas suas colônias
que neles se desenvolvem.
- Os meios diferenciais permitem o
crescimento de várias espécies ao mesmo
tempo, que facilita a discriminação entre os
diferentes microrganismos.
30. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DIFERENCIAIS
Ex: Mac Conkey
- Permite a distinção entre bactérias
fermentadoras da lactose (lactose
positiva – apresenta colônias rosa) e
bactérias não fermentadora da lactose
(lactose negativa – apresenta colônias
incolores).
33. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS SELETIVOS
- São meios cuja composição promovem
e/ou inibem o crescimento de um
determinado microrganismo ou grupo de
microrganismos.
- Os meios seletivos proporcionam o
meio pelo qual podemos isolar uma
determinada espécie ou categoria de
bactérias.
34. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS SELETIVOS
- São usadas substâncias seletivas
como os corantes tais como cristal violeta,
azul de metileno, eosina e verde brilhante.
Ex. Mac Conkey além de seus
nutrientes contém cristal violeta e sais
biliares que inibe o crescimento de bactérias
Gram- positivas e permitindo o crescimento
de Gram-negativas.
35. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE
CULTURA
2 – TIPOS
OSERVAÇÃO
- ALGUNS MEIOS SÃO TANTO
DIFERENCIAIS COMO SELETIVOS.
Ex: Ágar Mac Conkey
36. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE ENRIQUECIMENTO
- São meios utilizados para isolar um
microrganismo de um meio em que está
presente em pequena quantidade.
- São meios enriquecidos com
sangue, soro ou outros nutrientes.
Ex: Ágar sangue, Ágar chocolate.
37. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE ENRIQUECIMENTO
Ex: Tetrationato e Selenito
- São meios usados para amostras
fecais (coprocultura) inibindo o
crescimento da microbiota (bactérias
normais das fezes) e permitindo o
crescimento de Salmonella e Shigella
que são patogênicas.
38. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE TRANSPORTE
- São meios utilizados para o
transporte e manutenção de amostras
biológicas como fezes e secreções.
- São meios inertes, pois, permitem a
viabilidade da maioria dos patógenos
sem alterar a sua concentração.
39. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE TRANSPORTE
Ex: Meio de Stuart ou Amies
usado para o transporte com swabs.
Ex: Meio Cary-Blair e salina
glicerinada tamponada útil no
transporte de fezes para o isolamento
de shigella e Salmonella.
41. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE MANUTENÇÃO
- São meios utilizados para a
preservação das bactérias para a
realização de exames complementares
para estudos futuros como pesquisa
clínica, epidemiológica ou educacional.
Ex: Caldo TSB, caldo nutriente, água
destilada.
42. MEIOS DE MANUTENÇÃO
Métodos de preservação:
Curto período de tempo: temperaturas de
2 a 8 ºC ou de 4 à 10ºC (refrigerador): duração
por semanas. Fazer subculturas em caldo TSB
ou caldo nutriente.
Longo período de tempo: temperaturas de
-70 à -196ºC. Duração por anos (1 até 10
anos).
- Nitrogênio líquido: (-196ºC)
- Freezers: (-70 à -120ºC) temperatura
ultra baixa.
- Liofilização: congelamento à seco.
43. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE IDENTIFICAÇÃO
- São meios utilizados na identificação
das bactérias Gram-positivas e Gram-
negativas.
Ex: EPM e MILI para identificação de
Enterobactérias (Gram-negativas) e Rugai
Ágar Bile esculina. Identificação de
Gram-positivas.
45. CONDIÇÕES FÍSICAS PARA A
CULTURA DAS BACTÉRIAS
- TEMPERATURA
- pH
- ATMOSFERA GASOSA
- PRESSÃO OSMÓTICA
- PRESSÃO HIDROSTÁTICA
- LUZ
46. CONDIÇÕES FÍSICAS PARA A CULTURA DAS
BACTÉRIAS
PRESSÃO OSMÓTICA
- Meios hipertônicos: as bactérias
perdem água e sofrem plasmólise ou
enrugamento da célula.
- Meios isotônicos: concentrações
iguais, é o mais recomendado.
- Meios hipotônicos: as células
ganham água e sofrem lise.
47. CONDIÇOES FÍSICAS PARA CRESCIMENTO.
TEMPERATURA
- Psicotróficos: 0 à 7ºC
- Psicrófilos: 0 à 20ºC.
- Mesófilos: 20 à 45°C.
- Termófilos: 45 à 90°C.
A maioria são mesófilas.
- Temperatura ótima: 36,5 a 37°C em
estufa bacteriológica.
48. CRESCIMENTOS DAS BACTÉRIAS
pH
- Acidófilos: pH 0,1 à 5,4
- Neutrófilos: pH 5,4 à 8,5
- Alcalófilas: ph 7,0 à 11,5
A maioria na faixa de 4,0 a 9,0.
- Ideal: próximo da neutralidade 6,8 a
7,2.
- pH próximo do neutro (7,0) para a
maioria das bactérias.
50. CRESCIMENTO DAS BACTÉRIAS
PRESSÃO HIDROSTÁTICA
- Água dos oceanos e lagos
exercem pressão hidrostática.
- Bactérias barófilas: vivem em
alta pressão “profundidade”.
51. CRESCIMENTOS DAS BACTÉRIAS
ATMOSFERA GASOSA
- Microrganismos aeróbios: 21% de
oxigênio.
- Jarra de microaerofilia para
microrganismos que necessitam de CO2.
52. CRESCIMENTOS DAS
BACTÉRIAS
ATMOSFERA GASOSA
- Microrganimos anaeróbios
facultativos: crescem na presença de
ar ou anaeróbiose.
- Microrganimos microaerófilos:
Não resistem á níveis de oxigênio (1-
15%).
53. CRESCIMENTOS DAS BACTÉRIAS
ATMOSFERA GASOSA
- Microrganismos anaeróbios:
Morrem em presença de oxigênio, não
crescem em presença de ar e não
utilizam oxigênio para reações de
produção de energia.
- Jarra de anaerobiose.
54. CRESCIMENTOS DAS BACTÉRIAS
TEMPO
- Aumento no número da população
na cultura: 1→2→4→8→16→……
Progressão geométrica?
1→21
→22
→23
→24
….→2n
n = número de gerações
2n
= número total de células em uma
cultura.
55. CRESCIMENTOS DAS
BACTÉRIAS
TEMPO DE GERAÇÃO DAS
BACTÉRIAS.
- De 30 em 30 minutos.
- PERÍODO DE INCUBAÇÃO
- 24 a 48 horas em estufa
bacterilógica.
57. MEIOS DE CULTURA MAIS
UTILIZADOS.
Ágar sangue de carneiro a 5,0%
- Meio não seletivo e diferencial
que permite o crescimento de bactérias
Gram-positivas e Gram-negativas,
além de permitir a visualização de
hemólise.
58. MEIOS DE CULTURA MAIS
UTILIZADOS.
Ágar sangue de carneiro a 5,0%
59. MEIOS DE CULTURA MAIS UTILIZADOS.
Ágar Mac Conkey
- Meio seletivo e diferencial que
permite o crescimento de bactérias
(bacilos) Gram-negativas, diferenciando
as bactérias em lactose positiva e lactose
negativa. Inibe o crescimento de
bacctérias Gram-positivas.
60. MEIOS DE CULTURA MAISUTILIZADOS.
Ágar Mac Conkey
• - É utilizado para o isolamento de
Enterobactérias (Escherichia coli,
Proteus sp, etc.. e bacilos entéricos não
fermentadores (Shigella e Salmonella).
• - Amostras utilizadas: fezes, urina,
água de esgoto, alimentos , etc...
61. MEIOS DE CULTURA MAIS UTILIZADOS.
Ágar Mac Conkey
- Sua composição contém cristal
violeta e sais biliares que inibe o
crescimento de bactérias Gram-positivas.
- Utiliza a lactose como único
carboidrato como fonte de energia e
carbono.
62. MEIOS DE CULTURA MAIS UTILIZADOS.
Ágar Mac Conkey
- Bactérias fermentadoras de
lactose produzem enzimas como a
beta-galactosidase e lactose permease
que produzem ácido diminuindo o pH e
produzem colônias rosas chamadas de
colônias lactose positiva.
Ex: Escherichia coli
63. MEIOS DE CULTURA MAIS UTILIZADOS.
Ágar Mac Conkey
- Bactérias não fermentadoras de
lactose não produzem enzimas portanto
não produzem ácidos, aumenta o pH do
meio, produzindo colônias incolores,
transparentes ou ambar chamadas de
colônias lactose negativa.
Ex: Salmonella typhi, Shigella
dysenteriae.
64. MEIO DE CULTURA Mac Conkey
Lactose positiva Lactose negativa
65. IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS
1 - CARACTERÍSTICAS DAS
COLÔNIAS
TAMANHO (mm)
- Grande: maior que 1 mm de
tamanho
- Média: 1 mm de diâmetro
- Pequena: menor que 1 mm de
diâmetro.
66. IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS
COR
- Amarela, Branca, Branca-
acinzentada, Cinza, Rosa, Esverdeada,
Preta, Alaranjada, Creme, Incolor, etc...
ODOR
- Uva, Água sanitária, Fermento de
pão, Vinagre, Queijo, Terra molhada,
Peixe, Caramelo, etc...
67. IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS
DENSIDADE
- Opaca, Translúcida, Transparente
CONSISTÊNCIA
- Brilhante, Cremosa, Seca, Mucóide
PIGMENTO
- Amarelo, Vermelho, Mostarda
68. IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS
BORDA OU FORMA
- Circular (redonda), irregular,
puntiforme, ondulada
ELEVAÇÃO
- Convexa, Achatada, Elevada,
Umbilicada, centro elevado
69. IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS
HEMÓLISE: é a lise (quebra,
rompimento) da hemácia.
Total (beta- hemólise): zona clara ao
redor das colônias.
Parcial (alfa-hemólise): há formação de
um halo esverdeado em volta da colônia,
indicando hemólise parcial das hemácias.
Ausência de hemólise (gama-
hemólise): o meio permanece íntegro em
volta das colônias.
76. MEIOS DE CULTURA
Inoculação dos meios de cultura.
- INÓCULO: é quando os microrganismos
são colocados em um meio de cultura para
iniciar o crescimento.
Inocular primeiramente os meios menos
seletivos para evitar que substâncias
inibidoras sejam transferidas de um meio para
o outro.
Ex: semear primeiro no ágar sangue ou
ágar chocolate em seguida no mac Conkey.
77. CULTURA: é quando os
microrganismos cresecem e se
multiplicam no meio de cultura.
78. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
BARBOSA, H. R.; TORRES, B. B. Microbiologia básica. São Paulo: Atheneu,
2005.
BLACK, J. G. Microbiologia – fundamentos e aplicações. 4. ed. Rio de
Janeiro: Guanabara Koogan, 2002.
KONEMAN, E. W.; ALLEN, S. D.; JANDA, W. M.; SCHRECKENBERGER, P.
C.; WINN JÚNIOR, W. C. Diagnóstico microbiológico. Texto e atlas
colorido. 5. ed. Rio de Janeiro: MEDSI Ed. Médica e Científica, 2001.
LEVINSON, W.; JAWETZ, E. Microbiologia médica e imunologia. 7. ed.
Porto Alegre: Artmed, 2005.
MINS, C.; PLAYFAIR, J.; RITT, I. WAKELIN, D.; WILLIAMS. R. Microbiologia
médica. 2. ed. São Paulo: Manole, 1999.
PELCZAR Jr., M. J.; CHAN, E. C. S. KRIEG, N. R. Microbiologia – conceitos
e aplicações. 2. ed. v. 1 e 2. São Paulo: Makron Books do Brasil, 1997.
SPICER, W. J. Bacteriologia, micologia e parasitologia clínicas – um texto
ilustrado em cores. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2000.
THOMAS, C. L. Dicionário médico enciclopédico – Taber. 17. ed. São
Paulo: Manole, 2000.
TORTURA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. H. Microbiologia. 8. ed. São
Paulo: Artmed, 2005.
TRABULSI, L. R.; ALTERTHUM. Microbiologia. 4. ed. São Paulo: Atheneu,