O documento descreve os tipos de anticorpos policlonais e monoclonais, seu processo de obtenção e aplicações. Anticorpos policlonais são produzidos por diferentes linfócitos B e reconhecem múltiplos epítopos, enquanto anticorpos monoclonais são produzidos por um único hibridoma e reconhecem um único epítopo. A técnica de produção de anticorpos monoclonais envolve a fusão de linfócitos B com células tumorais para formação de hibridomas, os quais são

1. Anticorpos monoclonais e
policlonais
[1]
Adriana Lima 85047
Barbara Tagé 85084

2. Anticorpos policlonais
• Anticorpos policlonais (como diz o nome) possuem vários
clones, ou seja, se originam de diferentes linfócitos B, o que
significa que reagem com vários epítopos do antígeno (por
exemplo, várias partes de uma proteína).
Figura 1. : Anticorpos policlonais [2]

3. Anticorpos monoclonais
• Anticorpo específico pra um antígeno e produzido por um
hibridoma de células B (linhagem celular resultante da fusão
de uma única célula B normal com uma linha imortalizada de
tumor de células B).
Figura 2. : Anticorpos monoclonais [2]

4. Anticorpos policlonais
Figura 3 : Obtenção de anticorpos policlonais [3]

5. Anticorpos monoclonais
Figura 4:Obtenção de anticorpos policlonais [4]

6. Histórico
• 1ª evidência do uso de anticorpos: imunoglobulinas
utilizadas para neutralizar toxina diftérica.
Figura 5: Emil Adolf von Behring. Prize nobel: 1/1 [5]
Prêmio Nobel de Medicina e Fisiologia em 1901

7. Histórico
• 1ª Técnica de utilização de hibridomas para produção
de anticorpos monoclonais
Figura 6: Cientistas laureados pelo desenvolvimento da técnica do hibridoma [6]
Prêmio Nobel de Medicina 1984

8. Concepção geral da técnica
• Obtenção de anticorpos monoclonais
Figura 7: Técnica de obtenção de anticorpos monoclonais [7]

9. Concepção geral da técnica
• Obtenção de anticorpos monoclonais
Figura 8: Técnica de obtenção de anticorpos monoclonais [7]

10. Concepção geral da técnica
• Obtenção de anticorpos monoclonais
Figura 9: Técnica de obtenção de anticorpos monoclonais [7]

11. Expectativas de:
• Tratamento para muitas doenças
• Cura do câncer
Então...
• Os problemas foram resolvidos?!
Não foi o que aconteceu...

12. Existia uma limitação!

13. O que é um anticorpo?

14. O anticorpo
Figura 10: Imunoglobulina de Superfície [8]

15. Processo de humanização
Figura 11: Processo de humanização [9]
• Definição

16. Anticorpo monoclonal total
• Resposta HAMA: Anticorpo humano anti-murino, do inglês
human anti-mouse antibody.
Figura 12: Nomenclatura de anticorpos [10]

17. Anticorpo monoclonal quimérico
• Resposta HACA: Anticorpo humano anti-quimérico (Human
anti-chimeric antibody).
• Região variável humana é trocada pela do murino.
Figura 12: Nomenclatura de anticorpos [10]

18. Anticorpo monoclonal humanizado
• Resposta HAHA: Anticorpo humano anti-humano( do inglês
Human anti-human antibody).
• Regiões hipervariáveis murinas são cortadas da Ig Humana
Figura 12: Nomenclatura de anticorpos [10]

19. Humano Total
Figura 12: Nomenclatura de anticorpos [10]
• Sem resposta imune contra o anticorpo.
• Sem proteínas dos murinos.

20. A técnica hoje:
• Primeiramente, o animal a ser selecionado
deve ser livre de patógenos e geneticamente
selecionado. Geralmente, utiliza-se animais
singênicos.
• Para a produção em escala comercial, animais
como camundongos, coelhos e aves,
normalmente galinhas, são utilizados. No
entanto, os camundongos são os mais
utilizados.

21. A técnica hoje:
• Produção de anticorpos monoclonais
• Seleção dos hibridomas
• Clonagem dos hibridomas
• Teste de seleção de anticorpos

22. Produção de anticorpos monoclonais
• Imuniza-se o animal com epítopo desejado.
• Retira-se os linfócitos B, principalmente do
baço.
• Funde-se os linfócitos B obtidos com células
do mieloma (hibridoma) com auxílio de um
surfactante PEG (Polietileno glicol).

23. Produção de anticorpos monoclonais
Figura 13: Esquema de produção de anticorpos monoclonais [11]

24. A técnica hoje:
• Produção de anticorpos monoclonais
• Seleção dos hibridomas
• Clonagem dos hibridomas
• Teste de seleção de anticorpos

25. Seleção dos hibridomas
• Células do mieloma tem enzimas deficientes:
1. Hipoxantina guanina fosforibosil transferase
(HGPRT)
2. Timidina quinase.
• A carência dessas enzimas leva a célula à morte
em meio HAT.
• Meio HAT: contém hipoxantina, timidina e
aminopterina. Seleciona as células fusionadas.

26. Seleção dos hibridomas
• Células fusionadas são capazes de sobreviver a
esse meio por suprirem a sua carência
enzimática pela fusão com os linfócitos B.
• Os linfócitos B não fusionados morrem após
um certo período visto que as células do
mioloma são “imortalizadas”.

27. A técnica hoje:
• Produção de anticorpos monoclonais
• Seleção dos hibridomas
• Clonagem dos hibridomas
• Teste de seleção de anticorpos

28. Clonagem dos hibridomas
• Com a identificação da cultura celular
fusionada as células são diluídas de forma que
tenha apenas uma célula por poço.
• Cada célula isolada irá proliferar-se formando
colônias individuais.
Figura 14: Anticorpos monoclonais crescendo isoladamente [12]

29. Clonagem dos hibridomas
• Após duas semanas já há anticorpos
secretados suficientes .
• As amostras são transferidas para placas de 24
poços.
Figura 15 : Placa de ELISA [13]

30. A técnica hoje:
• Produção de anticorpos monoclonais
• Seleção dos hibridomas
• Clonagem dos hibridomas
• Teste de seleção de anticorpos

31. Teste de seleção de anticorpos
• Técnicas que definem colônias que secretam
anticorpos de alta especificidade.
• Testes de seleção devem ser realizados com o
antígeno em sua forma original, na qual o
anticorpo foi desenvolvido.

32. Teste de seleção de anticorpos
• ELISA é o mais utilizado
Figura 16: Imagem ilustrativa de um poço de ELISA [14]

33. Métodos indiretos e diretos
Figura 17: Imagem ilustrativa e comparativa da técnica ELISA [15]

34. Pontos positivos e negativos
• Positivos:
o Muitas amostras analisadas rapidamente
o Não requer muitos equipamentos
o Reagentes e marcadores de fácil acesso
• Negativos: reações cruzadas.
o Direto: <1% falsos negativos, baixa
sensibilidade
o Indireto: 50% falsos negativos

35. Quais as aplicações dos anticorpos
monoclonais?
• Tratamento da Asma
• Tratamento para linfoma

36. Asma
• IgE – importante mediador de reações alérgicas
• Omalizumabe: 1º e único aprovado pela Food
and Drug Administration desde 2003
(Cook,M.S.;Bochner,B.S.2010)
• anti-IgE (-umabe) previne interação entre IgE e
receptores FcεRII (Low affinity receptor) e FcεRI
(High affinity receptor) nas células dendríticas e
inibe outros receptores de IgE em basófilos.

37. Mecanismo
Figura 18: Mecanismo de atuação do anti-IgE [16]

38. Teste de eficácia
• 419 pacientes com asma grave receberam
Omalizumab ou placebo aleatoriamente por
28 semanas.
• Redução de exacerbações clinicamente
significantes em 26% em relação ao grupo que
recebeu placebo. [17,18]

39. Quais as aplicações dos anticorpos
monoclonais?
• Tratamento da Asma
• Tratamento para linfoma

40. Linfoma
• Linfoma não Hodgkin (mais agressivo).
• Tratamento interrompe a proliferação das
células neoplásicas.

41. Mecanismo
• No tumor a via do NF-κB está ativa inibindo
apoptose.
• Bortezomibe inibe a via do NF-κB permitindo
que ocorra a apoptose inibindo a
proliferação.[19]

42. Referências Bibliográficas
• [1] Disponível em < http://www.tebu-
bio.com/userfiles/image/Corporate/Antibody%20Taskforce/ANTICORPS%20simple.png >. Acessado em :
12.mar.2015.
• [3] Disponível em: < http://www.ptglab.com/blog/wp-content/uploads/2010/08/41.jpg >. Acessado em:
12.mar.2015.
• [4] Disponível em: < http://upload.wikimedia.org/wikibooks/en/a/a1/Biochem-polyclonal.jpg >. Acessado
em: 12.mar.2015.
• [5] Disponível em: < http://www.nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/laureates/1901/ >. Acessado em:
10.mar.2015.
• [6] Disponível em: < http://www.nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/laureates/1984/ >. Acessado em:
12.mar.2015.
• [7] ABBAS, A. K.; LICHTMAN, A. H.; PILAI, S. Imunologia celular e molecular. Rio de Janeiro: Elsevier, 7ª
edição, 2012.
• [8] ACTOR,J.K. Imunologia básica. Rio de Janeiro : Elsevier.2007.

43. Referências Bibliográficas
• [9] Anticorpos monoclonais no tratamento da asma, Revista Brasileira de Alergia e Imunopatologia; São
Paulo, ASBAI, 03.09.2012;25.10.2012
• [10] MURPHY, K. ; TRAVERS, P. & WALPORT, M. Imunobiologia de Janeway. 7ª Edição. Editora ArtMed, 2014.
• [11] LINDBLAD, E. B. Aluminium Adjuvantes. In: STEWARTTULL, D. E. S. (ed). The theory and pratical
application of adjuvantes. Hohn Wiley & Sons, 1995. p. 21-25.
• [12] Disponível em:< http://img3.wikia.nocookie.net/__cb20130414003422/aia1317/pt-
br/images/a/ac/Figura5_9.JPG >. Acessado em: 14.mar.2015.
• [13] Disponível em:< http://i01.i.aliimg.com/photo/v24/514740447/24_wells_PS_culture_plate.jpg >.
Acessado em: 14.mar.2015
• [14] Disponível em:< http://i.ytimg.com/vi/6Ue1Hd3dyaQ/maxresdefault.jpg >. Acessado em: 14.mar.2015.
• [15] Disponível:<
http://www.chemgapedia.de/vsengine/media/vsc/en/ch/25/orgentec/graphics/elisa_en_swf_altref.jpg >.
Acessado em:13.mar.2015.
• [16] COOK,M.S.;BOCHNER,B.S. Update on Biological Therapeutics for Asthma. World Allergy Organization
Journal 2010, 3:188-194

44. Referências Bibliográficas
• [17]Cook, M. L. , Bochner, B. S. Update on Biological Therapeutics for Asthma. World Allergy Organization
Journal 2010, 3:188-194 .
• [18] Humbert M, Beasley R, Ayres J, Slavin R, Hébert J, et al.: Benefits of omalizumab as add-on therapy in
patients with severe persistent asthma who are inadequately controlled despite best available therapy
(GINA 2002 step 4 treatment): INNOVATE. Allergy 2005, 60:309-316.
• [19] Disponível em:< http://www.tmobr.com.br/artigos/artigo_novidade_imprimir.html >. Acessado em:
14.mar.2015.