Este documento descreve os principais tipos de teste ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), incluindo suas características, aplicações e interpretação dos resultados. O ELISA é um teste imunológico sensível que detecta antígenos ou anticorpos através da ligação enzimática. Existem quatro principais tipos: indireto, sanduíche, competição e de captura. O ELISA é amplamente utilizado no diagnóstico de doenças humanas e veterinárias.

1. UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – ICSDEPARTAMENTO DE BIOINTERAÇÃODISCIPLINA: IMUNOLOGIA I – ICS 045ELISA (enzyme-linkedimmunosorbentassay)http://www.elisa-development.com/Trabalho realizado pela Acadêmica de Medicina Veterinária da UFBA Ludmilla Soares Sena sob orientação dos Professores Robert Schaer, Roberto Meyer, Claudia Brodskin e Ricardo Portela. Atualizado em Fevereiro de 2010.

2. CARACTERÍSTICAS BÁSICAShttp://www.elisa-development.com/

3. CARACTERÍSTICAS BÁSICASTeste utilizado para detectar a presença de antígenos (Ag) ou anticorpos (Ac) específicos em fluidos corporais ou sobrenadantes de cultura.

4. Une a especificidade de uma ligação Ag-Ac com a sensibilidade de uma reação enzimática, permitindo assim a detecção de quantidades mínimas de uma substância em particular e com grande confiabilidade.

5. Uma enzima, covalentemente ligada a um Ag ou Ac, reage com um substrato, dessa forma levando a oxidação de um cromógeno incolor, o qual então desenvolverá coloração dependente da concentração de Ag/Ac pesquisados.CARACTERÍSTICAS BÁSICAS Utiliza-se uma base sólida (placa de poliestireno com 96 poços dispostos em 12 fileiras verticais, cada uma com 8 poços) na qual Ag/Ac irão se ligar através de interações hidrofóbicas.

6. É um método tanto qualitativo quanto quantitativo.CARACTERÍSTICAS BÁSICAS Elementos necessários para a realização:

7. Ag purificado (caso deseje-se detectar ou quantificar Ac)

8. Ac purificado (caso deseje-se detectar ou quantificar Ag)

9. Controles (Positivo, Negativo, Ponto de Corte) – nos ensaios qualitativos

10. Padrões (soluções com concentração conhecida do analito a ser dosado) – nos ensaios quantitativos

11. Amostras a serem testadas

12. Placa de poliestireno

13. Tampão de lavagem: utilizado para remover o Ag ou Ac livres na placa, Ag ou Ac ligados com pouca avidez e outras moléculas interferentes

14. Conjugado: Ac ou Ag ligados covalentemente a uma enzima

15. Cromógeno: substância incolor que, ao ser oxidada pela reação enzimática, produz cor

16. Leitora de ELISA (espectrofotômetro): converte as diferentes intensidade de cor resultantes ao final do ensaio em valores numéricos (valores de densidade óptica - DO) CARACTERÍSTICAS BÁSICAS Elementos necessários para a realização:http://www.dellta.com.br/detalhes.php?prod_id=89http://portuguese.alibaba.com/product-gs/elisa-plate-flat-bottom-271555304.htmlPlacas de ELISAhttp://www.laborlifescience.com.br/equipamentos_elisa.htmlLeitoras de ELISAhttp://www.analiticaweb.com.br/images/produtos/p4ae04e96cbc7f/placa_elisa.jpg

17. CARACTERÍSTICAS BÁSICAS Vantagens

18. Teste com alta sensibilidade (habilidade de detectar quantidades mínimas do Ag ou Ac pesquisados (O ELISA detecta moléculas na ordem de nanogramas) – menor risco de falsos-negativos.

19. Teste com alta especificidade (característica que indica que o teste em questão identificará somente o Ag ou Ac desejado) – menor risco de falsos-positivos.

20. Permite que várias amostras sejam testadas ao mesmo tempo.

21. Realização relativamente rápida, simples e de custo baixo a médio em comparação com outras técnicas de imunodiagnóstico.CARACTERÍSTICAS BÁSICASDesvantagens

22. Necessidade de mão de obraespecializada.

23. Algunsreagentespodemdegradar-se com facilidade, com exposição à luz do sol ou a elevadastemperaturas.

24. Por ser umatécnicaaltamentesensível e específica, é muitosusceptível a erros de pipetagem, variaçõesnos tempos de incubação e lavagens, e alteraçõesnosreagentes.PRINCIPAIS TIPOShttp://www.elisa-development.com/