O documento descreve os principais métodos para estudar as interações antígeno-anticorpo, incluindo ELISA, imunofluorescência, citometria de fluxo e Western Blot. Essas técnicas medem as interações de ligação entre antígenos e anticorpos de forma qualitativa e quantitativa.

1. Interações Antígeno-Anticorpo
Ana Cláudia Carvalho Gouveia

2. Interações Ag - Ac
 Ligações não covalentes
 Reversíveis

3. Características das interações Ag-Ac
Afinidade
Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac
(em um único epítopo).

4. Características das interações Ag-Ac
Avidez
- Força de interações total entre Ac e Ag.
- Soma das afinidades de todos epítopos envolvidos
Especificidade
- Capacidade do Ac distinguir seu imunógeno de outros Ags.

5. Características das interações Ag-Ac
Reação cruzada
- Dois Ag diferentes apresentam epítopos estruturalmente
semelhantes
- Ac específicos para um epítopo se ligam a um epítopo não
relacionado, mas com propriedades químicas similares.

6. Métodos
Reagentes não marcados
(A ligação do Ac altera o estado físico do Ag)
 Reação de aglutinação
 Reação de precipitação
Reagentes marcados
 RIA
 ELISA
 IF, citometria de fluxo
 Western Blotting

7. Reação de aglutinação
Direta eritrócitos (hemaglutinação), bactérias, fungos
Passiva látex
(Ag insolúvel)
Qualitativos Semi-quantitativos
Ex.: classificação sanguinea Ex.: detectar infecções

9. Inibição da Aglutinação

10. - Quantidades de Ag solúvel são adicionadas a uma
quantidade fixa de soro contendo o Ac.
Precipitado visível
Reação de precipitação
- A medida que a quantidade de Ag aumenta, a quantidade
de precipitado também aumenta até um máximo, para
depois diminuir.

11. Precipitação em solução

12. Precipitação em gel
Imunodifusão Radial

13. Precipitação em gel
Imunodifusão Dupla

14. Reagentes marcados
- Enzimas, fluorocromos, isótopos
- Tipos:
 RIA
 ELISA
 IF, citometria de fluxo
 Western Blotting

15. Radioimunoensaios
Utilizam Ac conjugados com radioisótopos para
quantificar os ensaios.
• Vantagens:
– Alta sensibilidade
– Permite medidas rápidas e precisas
• Desvantagens:
– Custo
– Vida média dos reagentes
– Risco operacional (radiação)

16. ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
- Baseia-se na quantificação de uma reação enzimática
associada com complexos imunes.

18. Imunofluorescência
- Utilizam-se Ac ou Ag conjugados a moléculas reveladoras
chamadas fluorocromos.
- Visualização em microscópio de fluorescência

19. Isotiocianato de fluoresceína (FITC) VERDE
Ficoeritrina (FE) VERMELHA

20. Imunofluorescência Direta
Aplicações:
- Detecção direta de microrganismos
(secreções, urina, cortes de tecidos);
- Identificação de subpopulações de
linfócitos;
- Fenotipagem de células tumorais
Ex.: Detecção de Chlamydia trachomatis
em secreção uretral

21. Ex.: Detecção de Ac anti- T. cruzi
Aplicações:
- Detecção de anticorpos específicos contra
diversos microrganismos;
- Diagnóstico de doenças auto-imunes;
Detecção de Ac anti-nuclear
Imunofluorescência Indireta

22. Citometria de fluxo
- Detecta, separa e quantifica células contendo um antígeno
particular, marcadas com um fluorocromo;
- Cada anticorpo é marcado com um fluorocromo diferente;
- As células são então analizadas no citômetro de fluxo.

23. - As células saem de uma
célula de fluxo e são
iluminadas por um raio laser;
Citometria de fluxo
- A quantidade de raios laser
que é dispersa para fora das
células durante a passagem
das mesmas pelo laser pode
ser medida, o que
proporciona informação a
respeito do tamanho das
células.

24. - O laser pode também excitar o fluorocromo nas células e a
luz fluorescente emitida pode ser medida por um ou mais
detectores.

25. Aplicações:
-Caracterização de populações celulares;
- Contagem de microrganismos;
- Separação de populações celulares de
acordo com a densidade dos antígenos,
tamanho e granulosidade das células;
- Análise de proliferação celular.
CD4
CD8
CD19

27. Western Blot

28. Ensaios imunocromatográficos
Teste rápido de HIV
(Ac anti-HIV)
Diagnóstico de gravidez
( detecção de beta HCG)

29. Técnicas de Biologia Molecular

30. Reação da Polimerase em Cadeia
Amostra +
Reagentes

31. RT-PCR
(Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction)

32. Termociclador

33. Detecção da Amplificação
Produto
(PCR ou RT-PCR)
Eletroforese em
gel de
poliacrilamida

34. 1. Qual a principal diferença entre os métodos de ELISA e
imunofluorescência?
2. Em uma tipagem sanguínea houve aglutinação ao se misturar o
sangue pesquisado e os soros anti-AB e anti-Rh. Determine o tipo
sanguíneo e faça um esquema explicando a reação ocorrida.
3. Quais as características do anticorpo que podem influenciar a sua
ligação ao antígeno?
4. Ao realizar os exames pré-natais, a gestante J.A.C, 26 anos, apresentou
teste ELISA positivo para HIV. Como você interpreta este resultado?
Descreva suscintamente a reação ocorrida.
5. Qual imunoensaio você escolheria para o acompanhar o prognóstico
de um paciente com linfoma? Justifique sua resposta.
Relatório