Baixado 996 vezes
Carregado porLABIMUNO UFBA
Radioimunoensaio
O documento descreve os princípios e aplicações do radioimunoensaio (RIA). O RIA é uma técnica imunológica sensível que usa isótopos radioativos para detectar e quantificar substâncias biológicas em baixas concentrações. Existem diferentes tipos de RIA que variam de acordo com se o antígeno ou anticorpo é marcado com o isótopo radioativo. O RIA tem sido usado para medir diversas substâncias como hormônios, drogas e marcadores tumorais.
Mais conteúdo relacionado
Radioimunoensaio
- 1. UNIVERSIDADE FEDERAL DABAHIA INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – ICSDEPARTAMENTO DE BIOINTERAÇÃODISCIPLINA: IMUNOLOGIA I – ICS 045 RADIOIMUNOENSAIOS (RIA)Trabalho realizado pela Médica Veterinária MSc Maria Tereza Barreto Guedes sob orientação dos Professores Robert Schaer, Roberto Meyer, Claudia Brodskin e Ricardo Portela. Atualizado em Fevereiro de 2010.
- 2.
- 3. CARACTERÍSTICAS GERAIS1959 Berson e Yalow – primeiro RIA para quantificação de insulina.O RIA foi a primeira técnica imunológica padronizada capaz de detectar e quantificar substâncias da ordem de nano a picogramas. Torna-se então possível determinar qualquer tipo de molécula biológica, desde que haja um receptor específico e que a molécula biológica possa ser marcada.
- 4.
- 5. O termo radioimunoensaio(RIA)é mais empregado em ensaios com antígenos marcados.
- 6. O termo imunorradiométrico(IRMA) é utilizado em ensaios com anticorpos marcados.CARACTERÍSTICAS GERAISApresenta alta sensibilidade que é conferida pela detecção radioativa.O RIA também apresenta elevada especificidade.Graças à sua especificidade, os ensaios podem acontecer diretamente no líquido biológico.Por causa da sua sensibilidade, o volume de amostra pode ser menor.
- 7.
- 8. Instabilidade dosradioisótopos.
- 9.
- 10. Necessidades demedidas especiais.
- 11. Elevado custo debiossegurançae problemas com o descarte de material. Vantagens
- 12. Método muito sensível,específico e de alta afinidade. Baixo custo.
- 13. Requer poucaamostra.
- 14. Rápido.APLICAÇÕES Altasensibilidade -> permite dosagem de substâncias não encontradas em concentrações suficientes para serem percebidas por outras técnicas.
- 15. polipeptídios, catecolaminas,esteróides, antibióticos, hormônios tireoidianos, proteínas, vitaminas, drogas e outras.
- 16.
- 17.
- 18. PRINCÍPIO GERAL Reação de competição por um receptor comum entre uma substância a ser determinada e a mesma substância marcada radioisotopicamente.ComponentesAnticorpo radioativo
- 19.
- 20. Amostra a sertestada
- 21. Leitor radiométrico Leitor radiométrico
- 22.
- 23. É oradioisótopo mais comumente empregado.
- 24. Meia vidade 57,5 dias.
- 25. Liga-se facilmenteaos resíduos de tirosina das proteínas.
- 26.
- 27. Estabilidade menorque 3H.
- 28. Dosagem dehormônios protéicos.
- 29.
- 30.
- 31. Dosagem deesteróides.
- 32. Carbono 14TIPOS DERIA PARA QUANTIFICAÇÃO DE Ag
- 33. TIPOS DE RIADecompetição com Ag marcado.
- 34. De competiçãocom Ac marcado.
- 35. Sanduíche oucaptura de Ag.
- 36. Para detecçãode IgE:
- 37.
- 38. RadioallergosorbentTest (RAST).DE COMPETIÇÃOCOM Ag MARCADOInicialmente, uma quantidade conhecida de anticorpos específicos é colocada na fase sólida.Em seguida, adiciona-se o antígeno marcado com 125 I. Uma amostra de soro de um paciente suspeito é então acrescentada.O antígeno, se presente no soro, compete com o antígeno radioativo pelos sítios de ligação nos anticorpos. A quantificação é feita em aparelho específico para a leitura de radioatividade. A concentração das moléculas antigênicas presentes na amostra é inversamente proporcional à leitura de radioatividade. YYYAntígeno marcadoAntígeno do soro YAnticorpo específico
- 39. DE COMPETIÇÃO COMAc MARCADOInicialmente, antígenos são fixados na fase sólida.A seguir, acrescenta-se a amostra do paciente.YOs anticorpos específicos e marcados com o radioisótopo são acrescentados.Se a amostra for positiva, haverá a formação do complexo Ag/Ac com o Ag do soro.YQuanto maior a quantidade de antígeno na amostra, maior será a ligação destes aos anticorpos, formando imunocomplexos, que serão retirados por lavagem e assim reduzindo a leitura da radioatividade.YAntígeno marcadoAntígeno do soro YAnticorpo marcado
- 40. SANDUÍCHE OU CAPTURADE AgTeste realizado em duas etapas:Primeira etapa: 1) Fixação de Acs não marcados na fase sólida. 2) Adição da amostra (que contém Ag específicos contra o Ac fixado e outros componentes não específicos). 3) Os Ac capturam os Ag específicos da amostra. 4) Deverá ocorrer uma primeira lavagem para eliminação de componentes não específicos.Segunda etapa: 1) Acrescenta-se um segundo anticorpo específico e marcado, que formará o “sanduíche”.YYYY 2) A formação do imunocomplexo será revelada por este segundo anticorpo. Antígeno do soro YAc marcado YAc não marcado Componentes não específicos
- 41. TIPOS DE RIAPARA DETECÇÃO DE IgE
- 42. PAPER RADIOIMMUNOSORBENT TEST(PRIST)Anticorpos anti-IgE e não marcados são fixados na fase sólida.Acrescenta-se o soro a ser pesquisado para a presença de IgE. Em caso positivo, haverá a união do anticorpo IgE + anticorpo anti-IgE.YYYYYYApós lavagem para retirada do excesso de Ac não ligado, acrescenta-se anticorpos anti-IgE marcados com isótopo para que haja a revelação da amostra.YYYApós lavagem, procede-se com a leitura. A determinação da concentração de IgE total presente na amostra ocorrerá através de cálculo que relacionará os valores obtidos com uma determinada curva padrão. YAgIgE da amostra Y Acanti-IgE marcado YAcanti-IgE não marcado
- 43. RADIOALLERGOSORBENT TEST (RAST)Oalérgeno específico para o Ac IgE pesquisado é previamente fixado ao fundo do tubo na fase sólida.Acrescenta-se soro do paciente. Havendo presença de IgE específica ao alérgeno em questão, haverá a formação do complexo Ag/Ac.Acrescenta-se o anticorpo anti-IgE marcado, e este se liga ao Ac IgE pesquisado.YYYYA reação então será revelada através do segundo anticorpo.Alérgeno Y IgE do soro do paciente YAcanti-IgE marcado