O documento descreve diferentes tipos de reações de aglutinação, incluindo aglutinação direta, indireta e testes como Coombs. A aglutinação ocorre quando anticorpos se ligam a antígenos em partículas, levando à agregação visível. Fatores como classe de anticorpo, pH, tempo e concentração afetam a formação de agregados. Aglutinação é usada em testes como tipagem sanguínea e de doenças.

1. UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – ICSDEPARTAMENTO DE BIOINTERAÇÃODISCIPLINA: IMUNOLOGIA I – ICS 045REAÇÕES DE AGLUTINAÇÃOTrabalho realizado pelo Acadêmico de Medicina Veterinária da UFBA José Tadeu Raynal, sob orientação dos Professores Robert Schaer, Roberto Meyer, Claudia Brodskin e Ricardo Portela. Atualizado em Fevereiro de 2010.

2. CARACTERÍSTICAS BÁSICAS

3. CARACTERÍSTICAS BÁSICASAs reações de aglutinação decorrem da ligação entre o Ac e Ag particulado. É o agrupamento de partículas, usualmente por moléculas de Ac, que se ligam a Ag na superfície de partículas adjacentes. Agregação visível de partículasEritrócitosBactériasFungosLátex

4. CARACTERÍSTICAS BÁSICASFatores que influenciam a formação dos agregados

5. Classe do anticorpo envolvido.

6. Concentração iônica e pH do meio.

7. Presença de macromoléculas, íons, enzimas e conservantes.

8. Tempo e temperatura.

9. Padronização adequada da suspensão de micropartículas ou células.

10. Concentração ótima de antígeno ou Ac a ser fixado nas micropartículas ou células.

11. Estabilidade da ligação do Ag/Ac e acessibilidade dessa molécula nas micropartículas ou células.CARACTERÍSTICAS BÁSICASVantagens: • Baixo custo. • Boa especificidade. • Leitura visual. • Facilidade de execução.Desvantagens: • Baixa sensibilidade. • Reprodutibilidade dos lotes de reagentes. • Acessibilidade molecular para interação Ag-Ac. • Estabilidade da ligação do Ag/Ac no suporte.

12. TIPOS DE REAÇÃO

13. AGLUTINAÇÃO DIRETANeste teste, o antígeno faz parte naturalmente da célula, e haverá aglutinação dessas células promovida por anticorpo contra esses antígenos (antígeno é naturalmente insolúvel).AnticorpoAntígenoComplexo precipitadoEx: Identificação de antígenos eritrocitários na tipagem sanguínea, reação de Widal (febre tifóide).

14. AGLUTINAÇÃO DIRETANa reação de aglutinação direta utilizam-se partículas antigênicas insolúveis em sua forma íntegra ou fragmentada. Hemácias, bactérias, fungos, protozoários podem ser aglutinados diretamente por anticorpo. Os testes para detectar anticorpos específicos são realizados empregando-se diluições em série do anticorpo, frente a uma quantidade constante de antígeno. Após um período de incubação, a aglutinação se completa e o resultado é geralmente expresso como o título do anti-soro, isto é, a máxima diluição em que ocorre a aglutinação. Tipagem ABOTestes confirmatórios para sífilisSalmonelose aviária Coriza infecciosa das galinhasMicoplasmoseBruceloseAglutinação bacteriana Presença de infecção Diferenciação de espécies

15. AGLUTINAÇÃO DIRETA Tipagem ABOAGLUTINAÇÃO INDIRETA (PASSIVA)Esse método emprega a adsorção de anticorpos ou antígenos protéicos solúveis na superfície de micropartículas inertes (suporte).Para o teste, as hemácias e as partículas inertes (látex, leveduras, etc.) podem ser sensibilizadas por adsorção passiva, devida ao contato direto com os antígenos solúveis, por adsorção via agentes químicos, como ácido tânico, cloreto de cromo e por conjugação do antígeno, por meio de ligações químicas covalentes, fornecendo reagentes estáveis. Devido à grande diversidade de antígenos que podem se ligar às células ou partículas, a aplicação dos testes de aglutinação passiva é muito variada. +

16. INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃOTeste de gravidezNEGATIVOPOSITIVOUrinaSoro anti hCG+UrinaSoro anti hCG+AcAcParticulas revestidas com hCGIncubados e colocados em placaIncubados e colocados em placa++hCGPositivo não aglutina, pois os Ac se ligaram ao hCG da urina na incubação Negativo aglutina

17. TESTE DE COOMBSAcantiimunoglobulinas (Robert Coombs).Doença Hemolítica do Recém Nato – mãe produz IgG anti-Rh (DHRN)Não aglutinam os eritrócitos.Direto: Ac ligados aos eritrócitos fetais.Indireto: Ac anti-Rh não aglutinantes no soro materno. Permite detectar incompatibilidades Rh, prevenindo contra DHRN.

18. RELAÇÃO ANTÍGENO X ANTICORPOO efeito PRÓ-ZONA ocorredevido ao excesso de anticorposna amostra, que ocorre nossoros fortemente reagentes.Pode ocasionar resultadosFALSO-NEGATIVOS.Para evitar o efeito pró-zona,emprega-se soro diluído.Ocorre FALSO-POSITIVOS