O documento discute os métodos para teste de sensibilidade a antimicrobianos (antibiograma), incluindo disco difusão em ágar, diluição em caldo, Etest e sistemas automatizados. Detalha etapas como preparo do inóculo bacteriano, escolha de meios de cultura, incubação, leitura e interpretação de resultados de acordo com padrões do CLSI. Aponta a importância desses testes para orientação terapêutica e monitoramento da resistência bacteriana.

1. O ANTIBIOGRAMA NO LABORATÓRIOMarilene Rodrigues Chang&Ana Cláudia Souza Rodrigues

2. Métodos de Teste de Sensibilidade aosAntimicrobianos (TSA)Dra. Marilene Rodrigues ChangDepartamento de Farmácia e Bioquímica da UFMSMestre em Análises Clínicas, área de Micologia, FCF/USP-SPDoutora em Ciências, área de Bacteriologia, IOC/FIOCRUZ- RJ

3. Resistência Bacteriana a Antimicrobianos

4. Atividade Antimicrobiana: Primeira ObservaçãoAlexander Fleming 1920

5. Ensaios BiológicosReprodução da descoberta de FlemingReprodução da placa de Fleming para a prova de sensibilidade aos antibióticos Susceptibilidade Antimicrobiana

6. Quando e porquê realizar o antibiograma?Isolado requer terapia antimicrobiana

7. Isolado cuja susceptibilidade não é preditiva

8. Isolado capaz de exibir resistência

9. Orientação terapêutica

10. Permite individualizar padrões de resistênciaImportância e indicações do teste de sensibilidadeAvalia o padrão da resposta da bactéria diante de concentrações pré-estabelecidas de antibióticos correlacionadas com níveis séricosO antibiograma reflete a bactéria e a droga, sem considerar aspectos clínicos Deve ser realizado para microrganismos cujas técnica é referendada em consensosIndicado para bactéria cujo padrão de resistência não é previsível Ex. Desnecessária para bactéria cuja sensibilidade é conhecida como a do S. pyogenes frente à penicilinaNão indicada para bactérias no seu sítio anatômico usual. Ex. E. coli de fezes e S. viridans do TRS.A liberação de um resultado pode encorajar o clínico ao tratamento de uma condição normal e encobrir seu verdadeiro problema

11. TESTE DE SENSIBILIDADE AOS ANTIMICROBIANOSMETODOLOGIASAvaliação QUALITATIVADISCO DIFUSÃO EM ÁGAR (Kirby e Bauer, 1966)Avaliação QUANTITATIVA DILUIÇÃO EM CALDOMacrodiluiçãoMicrodiluição DILUIÇÃO EM ÁGAR

12. ETEST

13. AUTOMATIZADOSCLINICAL and LABORATORY STANDARDS INSTITUTECLSI - antigo“NCCLS”Organização internacional, interdisciplinar e educacional que promove o desenvolvimento de normas e procedimentos laboratoriais padronizados.Composta de representantes da área da saúde, incluindo médicos, microbiologistas, educadores, farmacêuticos, representantes do governo e indústria, etc.

14. TESTE DE SENSISIBILIDADE AOSANTIBIÓTICOSPadronizaçãoControle de qualidade dos itens:meiospH temperatura incubação discos (Cepas ATCC)

15. Teste de sensibilidade aos antimicrobianosBactéria e Preparo do Inóculo Suspensão direta

16. Método de crescimento0,5 McFarland 1a 2x108 UFC/mL

17. Teste de sensibilidade aos antimicrobianosProcedimentoBactéria e Inóculo

18. TESTE DE SENSIBILIDADE AOS ANTIMICROBIANOSInóculo - Método do crescimento“3 a 5” colônias 4 a 5 mL de Salina

19. Incubar 33 a 35oC - (2 a 6h)*

20. Ajustar a turbidez 0,5 McFarland1 a 2x108 UFC/mL

21. TESTE DE SENSIBILIDADE AOS ANTIMICROBIANOSInóculo - Suspensão direta 3 a 5 colônias 4 a 5 mL de salina

22. Ajustar a turbidez 0,5 McFarland1 a 2 x 108 UFC/mL Estabilizar 15 min.TESTE DE SENSIBILIDADE AOS ANTIMICROBIANOSInóculo

23. Confirme a Diferença!

24. TESTE DE DISCO DIFUSÃO EM ÁGAR Fácil execução Flexibilidade na escolha dos antibióticos Padronização dos resultados Baixo custo

25. TESTE DE DISCO DIFUSÃO EM ÁGARMeiosÁgar Mueller-HintonÁgar Mueller-Hinton suplementadoReprodutibilidade do teste. Baixo teor de inibidores de sulfonamidas, trimetoprim e tetraciclinas.

26. Permite crescimento satisfatório da maioria dos patógenosTESTE DE DIFUSÃO EM ÁGARO que devemos saber sobre os meios? Umidade

27. Efeito da Timidina ou TiminaInibidores das sulfonamidas e trimetoprim. Teste de esterilidade

28. Efeitos da variação de Magnésio e Cálcio TESTE DE DIFUSÃO EM ÁGARDiscos Conservação 8oC ou  freezer(não “frost free”)Imipenem, Ertapenem, Cefaclor e combinações de ác.clavulânicoRetirar do refrigerador ou do freezer até 2 horas antes do uso

29. Evitar umidade

30. Data de validadeTESTE DE DIFUSÃO EM ÁGARInoculaçãoSuperfície do ágar não deve estar úmida

31. Inoculação homogênea

32. Esperar diminuir a umidade antes da aplicação dos discos Cuidado na distribuição do inóculoInadequadoAdequado

33. TESTE DE DIFUSÃO EM ÁGARAplicação dos discos Bateria pré determinada

34. Aplicar e pressionar o disco

35. Aplicar no máximo 12 discos na placa de 150mm 5 discos na placa de 90mm Inverter a placa e incubar 15 minutos após a aplicação TESTE DE DIFUSÃO EM ÁGARIncubação Temperatura 33 a 35oC

36. Atmosfera atm ambienteexceção Haemoplilus spp., N. gonorrhoeae e estreptococos:  CO2Obs.P/ S. maltophilia, B. cepacea, Streptococcus spp, Leitura de OXA e VAN para Staphylococcus – 20 a 24h de incubaçãoTESTE DE DIFUSÃO EM ÁGARPrincípio do método

37. TESTE DE DIFUSÃO EM ÁGARLeitura e Interpretaçãomm

38. TESTE de MACRODILUIÇÃOg/mL 100 50 25 12.5 6.25 3.12 .16 .8 .4 controle Método quantitativo MICConceito

39. Precisão

40. Vantagens