O ELISA é um método imunológico usado para quantificar antígenos e anticorpos. Usa anticorpos ligados a enzimas para detectar a presença de antígenos, gerando uma reação colorida. O ELISA Sanduíche permite mensurar pequenas quantidades de antígenos usando dois anticorpos diferentes. O teste de ELISA para HIV detecta antígenos e anticorpos virais no sangue.

1. ELISA
O ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) é um dos métodos imunológicos mais utilizados para quantificar a concentração
de antígenos e anticorpos, por apresentarem grande sensibilidade e especificidade.
Nesse método, uma enzima , que reage com um substrato incolor para produzir um produto colorido, é covalentemente ligada a um
anticorpo especifico que reconhece um antígeno alvo. Se o antígeno estiver presente, o complexo antígeno-enzima irá ligar-se a ele e
a enzima catalisará a reação. Então, a presença de produto colorido indica a presença de antígeno. Trata-se de um método eficiente,
pois permite detectar quantidades de proteínas da ordem de nanogramas (10-9g).
Dentre os diversos tipos de ELISA, destaca-se 0 ELISA SANDUICHE. Nesse método, o anticorpo de um anticorpo particular é,
inicialmente, adsorvido e se liga ao anticorpo. Finalmente, um segundo e diferente anticorpo ligado à enzima é adicionado.Nesse
caso, a intensidade da reação é proporcional a quantidade de anticorpo presente. Logo, permite mensurar até pequenas quantidades de
antígenos.
O ELISA constitui a base do teste para infecção por HIV. Nesse teste, proteínas virais (antígenos) são adsorvidos nos poços da placa
de ELISA. Em seguida, é adicionado soro do paciente contendo anticorpos que se ligam aos antígenos. Finalmente, anticorpos ligados
à enzima ligam-se aos anticorpos humano, propiciando a reação enzimática com mudança de cor.
• Coloca-se, na placa de ELISA, solução tampão contendo o primeiro anticorpo com concentração conhecida e suficiente para
adsorver nos poços da placa. Em geral, a solução é saturada.
• Lavam-se os poços com tampão de lavagem, de forma a retirar o tampão, mas deixar o anticorpo aderido à placa.
• Adiciona-se solução contendo proteína de alto peso molecular, como a BSA (Albumina de Soro Bovino), com o objetivo de
bloquear as áreas onde os anticorpos não aderiram na placa (sítios inespecíficos).
• Realiza-se nova lavagem e a etapa de SENSIBILIZAÇÃO da placa está cumprida.
• Incubação com as amostras (soluções teste com antígenos em concentração desconhecida devem ser adicionadas à placa)
• Nova lavagem e o antígeno que reagiu com o anticorpo previamente aderido à placa também permanecerá aderido. Por outro
lado, os antígenos não ligados serão removidos.
• Incubação com segundo anticorpo, seguida de lavagem.
• Incubação com terceiro anticorpo anti-espécie conjugado a uma enzima, como a peroxidase. Segue-se outra lavagem.
• Adição de substrato para revelação. Trata-se de um substrato incolor que, quando ativado pela porção enzimática do ligante,
produz um produto final corado. A mudança de cor pode ser lida diretamente em aparelho apropriado. Em geral, bloqueia-se
a reação para evitar que o produto final fique muito escuro e atrapalhe a leitura do teste. Além de bloquear a reação, é
possível adicionar um ácido que provoque mudança para uma cor cuja absorbância é melhor detectada pelo leitor de ELISA.