O documento discute a citometria de fluxo e suas aplicações no diagnóstico laboratorial. A citometria de fluxo permite medir propriedades de células individuais em alta velocidade através de marcação com anticorpos fluorescentes. Ela pode identificar tipos e subtipos celulares, estágios de maturação e ativação, entre outras propriedades. Algumas aplicações clínicas importantes incluem imunofenotipagem linfocitária, diagnóstico de neoplasias hematológicas e quant

1. Aplicações da
Citometria de
Fluxo no
diagnóstico
laboratorial
Profª. Me. Mariana Barreto Serra
maribserra@usp.br
Instagram: maribserra
São Luís- MA
2021

2. O que é citometria de Fluxo?
MEDIDA
CÉLULA MOVIMENTO
Medir o quê?

3. Conceito de Citometria de Fluxo
Analisa, caracteriza, diferencia, quantifica células e alguns de seus produtos, partículas e microrganismos

5. Histórico
Nasce da evolução da microscopia- 1934
Sensor fotoelétrico
contando células
coradas, as quais
passariam por um
capilar
1941, Kielland patenteou um modelo semelhante ao de
Moldavan” (BERTHO, [entre 2001 e 2004]).

7. Componentes de um citômetro de fluxo
Sistema de fluidos: introduz e alinha as
partículas em um fluxo contínuo.
Sistema ótico: gera e coleta os sinais de luz-
lasers, lentes, filtros e detectores
Sistema eletrônico: converte os sinais ópticos
em sinais eletrônicos, disponibilizando-os
para o computador

8. Exemplos de citômetros

9. Exemplos de citômetros

10. Exemplos de citômetros

11. Em que se baseia a análise?

12. As células apresentam tamanho e complexidade diferentes

14. Análise de sangue periférico
Em sangue humano
periférico, os valores de
intensidade de luz para
linfócitos, monócitos e
granulócitos obedecem um
padrão
A
B C

15. E no caso dos linfócitos NK, B e T??
E os subtipos celulares???

16. Como diferenciar?
https://www.anthygenus.com.br/artigos/entendendo-cd3-cd4-e-cd8

17. Cluster diferenciation
Estágio maturativo
Tipos e subtipos
Célula ativada
Morte celular
Localização celular
Produtos celulares/ Ac

18. Imunofenotipagem
Fenótipo e função

20. Estratégia de marcação por fluorescência

21. Como fazer a identificação celular por
meio da técnica de imunofenotipagem?
FAB
FC

22. Como interpretar um dot plot?
UL UR
LL LR

23. • Imunofenotipagem Linfocitária
• Imunofenotipagem em doenças
oncohematológicas
• Quantificação de células CD34+
• Pesquisa de HPN
• Avaliação de disfunção e ativação plaquetária
• Analise do conteúdo de DNA
PRINCIPAIS APLICAÇÕES CLÍNICAS
Análise multiparamétrica em uma diversidade de amostras: (como sangue, medula óssea, fluidos das cavidades serosas,
líquido cefalorraquidiano, urina e até tecidos sólidos)

24. Anti-CD3 PerCP
Anti-CD8 PE
Anti-CD4FITC
Análise da Subpopulação Linfocítica
IMUNODEFICIÊNCIA ADQUIRIDA
Anti-CD3 PerCP
Anti-CD16 /CD56PE
Anti-CD19 FITC
http://www.aids.gov.br/pt-br/profissionais-de-saude/monitoramento-da-infeccao-pelo-hiv-hiv/rede-nacional-de-laboratorios-de
Exame CD4, exceto: ser
assintomático; estar em tratamento
antirretroviral (TARV); ter carga viral
indetectável; ter apresentado dois
exames consecutivos – com intervalo
mínimo de seis meses de um para o
outro – que atestem CD4 maior que
350 células/mm³.

26. • Neoplasias hematológicas- Marcador anômalo/ perda de expressão de
marcadores
DIAGNÓSTICO, PROGNÓSTICO E ESTADIAMENTO
DE DOENÇAS ONCO HEMATOLÓGICAS

27. Hemoglobinúria Paroxistica Noturna (HPN)
Doença relacionada a células-tronco clonais, também pode ser diagnosticada através
da citometria de fluxo - detecção de redução ou ausência de CD55 e CD59.
PNH é causada pela biossíntese deficiente de um
glicosilfosfatidilinositol que ancora varias proteínas
imunorregulatorias e do complemento na superfície de
eritrócitos e de outras células sanguíneas (como
monócitos, neutrófilos, linfócitos e plaquetas).
Hemólise intravascular crônica, anemia aplasica e leucemia
aguda

28. HPN - Hemácias
Ausência de expressão antigênica
do CD59 em 34,9% das células
identificadas por Glicoforina A
Ausência de expressão antigênica
do CD55 em 46,5% das células
identificadas por Glicoforina A

29. HPN - Neutrófilos
Controle normal: CD55(+) = 99,8% Ausência de expressão antigênica do
CD55 em 97,7% dos neutrófilos.

30. HPN - Neutrófilos
Controle normal: CD59 (+) =
100,0%
Ausência de expressão antigênica de
CD59 em 82,7% das células
identificadas pelo CD13.

31. HPN - Monócitos
Ausência de expressão do CD14 em
98,3% das células CD 64 (+)
Controle normal: CD14(+) = 99,8%

32. Pesquisa de Anticorpo Anti-plaquetas
Método Direto
• Total de casos 115 pacientes com plaquetopenia.
Amostra: 10 ml de sangue em EDTA.
• Equipamento: Citômetro de Fluxo – EPICS XL-MCL da Beckman
Coulter Material:
-Anti-Human IgG FITC conjugate SIGMA (F-1641)
-CD41 ou CD61 PE Immunotech (PN – IM1416)
- Tampão PBS-EDTA Método:
• As Plaquetas separadas do sangue total coletada em EDTA, são
lavadas e marcadas com CD41PE e IgG FITC e analisadas no Citômetro de
Fluxo. João Carlos C. Guerra, MD, Ruth H Kanayama, PhD, Sonia S.Nozawa, PhD, Márcia R. Ioshida, PhD, Irina Y Takiri, PhD, Robson J. Lazaro, PhD, Nelson
Hamerschlak, MD, Luiz Gastão M. Rosenfeld, MD, Celso Carlos C. Guerra MD and Nydia S. Bacal, MD. Low Platelet Counts: Diagnosis Using Flow
Cytometry and Anti Platelet Antibody – Blood (ASH Annual Meeting Abstracts) 2006 108: abstract 3966.

33. 0.114
1.47
Controle Negativo
Plaquetas – 375.000/mm³ CSM
CSM, 20 anos ,masc.
Plaquetas – 65.000/mm³

34. AVS
AVS, 31 anos, fem.
Plaquetas – 16.000/mm³

35. O antígeno está ausente ou presente em baixa expressão em pacientes com
Síndrome de Bernard-Soulier é identificado pelo anticorpo CD42b que é
específico para a glicoproteina plaquetária GPIb
Essa glicoproteina plaquetária serve como receptor para o Fator Von Willebrand
e tem alta afinidade ao receptor de trombina.
CD42a(GPIX), CD42d(GPV) raramente utilizadas.
CD41 (GPIIb) and CD61 (GPIIIa) – Trombastenia de Glanzmann

36. Quantificação de células progenitoras CD34 (+) - Citometria de Fluxo
Protocolo “ISHAGE”
Plataforma dupla
Sangue periférico
Medula Óssea
Aférese
Cordão Umbilical
A quantificação das células CD34+ em sangue
periférico é utilizada para determinar o melhor
momento de iniciar a aférese, enquanto que na
leucoaférese e no sangue de cordão umbilical
determinam a quantidade de células CD34+ para o
transplante de células progenitoras.

37. USO DE SONDAS, COMO O IODETO DE PROPÍDIO- PENETRA NO
DNA DE CÉLULAS MORTAS- USADO TAMBÉM ESTUDOS DE
VIABILIDADE
CÉLULA VIVA- NÃO CORA COM IP
CÉLULA MORTA- PERMEÁVEL- CORA

42. Aplicações: análise da qualidade do espermatozóide

43. Contagem de células somáticas em laticínios

44. Contagem de células somáticas em laticínios

45. Aplicações

46. Aplicação
https://www.genengnews.com/insights/ethical-
and-biosafety-oversight-of-new-car-t-cell-
products/

49. Controle de qualidade

50. Controle de qualidade

52. • https://campusvirtual.fiocruz.br/gestordecursos/hotsite/citometria30
• http://www.conhecer.org.br/enciclop/2016a/agrarias/citometria.pdf
• https://www.beckman.com/resources/reading-material/ebooks/practical-
flow-cytometry
• https://www.bosterbio.com/protocol-and-troubleshooting/flow-
cytometry-principle
• http://rhlccflow.facilities.northwestern.edu/files/2011/09/Interpreting-
flow-cytometry-data.pdf
•
Referências

53. •“Ama a teu próximo como a ti mesmo...
- Isto, todavia, é mais facilmente dito do que
praticado”.
(“Um diálogo entre Einstein e Freud: Por que a guerra?”, 2005)

54. Obrigada!
...E boa sorte no QuiZ
https://gotoquiz.com/GGKED
Dúvidas, bate papo ou um café- mariana.serra@kroton.com.br