Aula prática de Identificação de leucócitos

1. Universidade Federal da Bahia
Instituto de Ciências da Saúde
Departamento de Biointeração
AULA PRÁTICA
EXAME
HEMATOLÓGICO
(LEUCÓCITOS)

2. Hemograma
Avaliação da série vermelha
• Nº de eritrócitos
• Volume globular (Hematócrito)
• Hemoglobina
• VGM
• CHGM
• Avaliação morfológica
Avaliação da série branca
• Nº de leucócitos
• Contagem diferencial

3. • Bovinos: veia jugular, mamária ou da cauda
• Equinos: veia jugular
• Suinos: veia marginal da orelha, seio venoso
oftálmico, veia cava anterior.
• Carnívoros: veia safena, radial e jugular
• Coelhos: veia marginal da orelha e coração
• Aves: veia umeral e coração
• Carneiro e cabra: veia jugular
• Peixes e répteis: veia caudal e punção intra-cardíaca
Locais de punção em animais

4. • descarga violenta da seringa
• agitação violenta com anticoagulante
• calor excessivo
• contaminação bacteriana
Causas de hemólise

5. EDTA (etileno diamino tetra acético de sódio ou
potássio) EDTA a 10% ou 7,5%
Proporção de 0,1mL/5mL de sangue
Modo de ação: - Formação de sais insolúveis de cálcio.
Vantagens: - É recomendado para rotina hematológica
porque não interfere na morfologia celular, preservando
a amostra de sangue por 24 horas quando refrigerada.
Desvantagens: - É pouco solúvel. O sal de potássio é
mais solúvel. TUBO DE TAMPA ROXA.
Anticoagulantes

6. Heparina - Tem ação antitrombina e antitromboplastina.
Apresenta como desvantagem a interferência na
coloração do esfregaço sangüíneo, não sendo por isso,
recomendado para exames hematológicos.
Recomendado para hemogasometria e algumas provas
bioquímicas. Usa-se 0,1mL de solução a 1% para não
coagular 5,0mL de sangue. A heparina retarda a
coagulação do sangue por apenas 8 horas. TUBO DE
TAMPA VERDE.

7. Citrato de Sódio - usado para transfusões
sangüíneas e provas de hemostasia, em solução a
3,2%, na proporção de 1,0mL da solução para 9,0mL
de sangue. TUBO DE TAMPA AZUL.
Fluoreto de Sódio - usado para determinação de
glicose e lactato por ser inibidor da glicólise. Mais
usado em associação com outro anticoagulante,
como por exemplo o EDTA fluoretado. Usar 0,5mL
dessa solução para evitar a coagulação e glicólise
de 5,0mL de sangue. TUBO DE TAMPA CINZA.

8. • Homogeneizar a amostra
• Recuperar 20 µL de sangue com a micropipeta
• Limpar o sangue de fora da pipeta com uma gaze.
• Diluir em seguida com 400 µL da solução de ácido
acético 3% (proporção de 1:20).
• Homogeneizar, aguardar 20 minutos e preencher a
câmara de Neubauer por capilaridade.
• Contar os quatro quadrados laterais maiores e
multiplicar por 50.
Contagem global de leucócitos

9. Câmara de Neubauer.

10. Retículos da Câmara de Newbauer

11. 1. Preparar duas lâminas novas e desengorduradas, sendo
uma com os cantos recortados. (Também pode ser
utilizada uma lamínula)
2. Colocar uma gota de sangue na lâmina.
3. Utilizar a lâmina de canto recortado colocando-a à frente
da gota num ângulo de 45º, fazer um ligeiro movimento
para trás até o sangue se espalhar na lâmina.
4. Com um movimento uniforme, para frente, fazer esta
lâmina deslizar sobre a outra. Ela arrastará atrás de si o
sangue que se espalhará em fina camada.
5. O movimento de ser: SUAVE, ÚNICO, RÁPIDO e FIRME
6. Agitar a lâmina ao ar até o esfregaço secar-se
completamente e identificar com lápis.
PREPARO DO ESFREGAÇO:

14. Métodos de coloração (15 a 30 minutos)
LEISHMAN
GIEMSA
ROSENFELD
Fixação – coloração – contra-coloração - lavagem

15. Fazer a contagem diferencial dos leucócitos identificando
cada célula. Para isso contar 100 leucócitos e calcular a
porcentagem de cada uma delas.
Técnicas de contagem diferencial de leucócitos
As células nem sempre se distribuem de maneira
uniforme no esfregaço. Por isso, usamos normalmente 2
métodos para contagem diferencial, os quais visam
reduzir o erro, devido ao fato citado acima.

16. Contagem global de leucócitos = 10.000 /µL ou mm3
Simulação

17. Linfócitos
Células do sistema imune - mononucleares
Monócitos

18. Neutrófilos Eosinófilos Basófilos
Células do sistema imune - polimorfonucleares

19. Identificação de populações celulares
por Imunofluorescência

20. Vamos ao esfregaço...!