Artigo ABMBA - Volume 01 - Número 01 - Artigo 04

1. ISSN 2318-4752 – Volume 1, N1, 2013
O GÊNERO Bacillus E SUA UTILIZAÇÃO PROBIÓTICA
THE Bacillus GENUS AND THEIR PROBIOTIC USE
ARIANE KATIÚSCIA DOS SANTOS MARTINS
1
; FLAVIANO DOS SANTOS MARTINS
2
;
FLÁVIO HENRIQUE FERREIRA BARBOSA
3
RESUMO
O interesse na utilização dos probióticos com objetivo de prevenir ou tratar doenças tem sido explorado há
muitos anos. Mais recentemente têm sido descritos os mecanismos de ação dos probióticos nas doenças
alérgicas e sua interação com o intestino como órgão imunológico. Assim, os probióticos devem ser
cuidadosamente estudados antes de uma ampla recomendação. Esses produtos, de um modo geral, são
muito seguros, uma vez que são comercializados há muitos anos como suplemento alimentar ou alimento
fermentado, e não possuem efeitos colaterais no metabolismo. Evidências científicas definitivas
comprovando o potencial dos probióticos na melhora da qualidade de vida de pessoas com distúrbios
gastrointestinais é tema promissor e de grande expectativa científica. Apesar das informações apresentadas
acima, dentro dos produtos probióticos em uso atualmente, há as bactérias formadoras de esporos, a
maioria do gênero Bacillus. Usados primariamente na forma de esporos, esses produtos têm sido úteis na
prevenção de desordens intestinais, e a diversidade de espécies utilizadas e suas aplicações é
surpreendente. As preparações contendo esporos da bactéria possuem a vantagem de que o esporo pode
sobreviver intacto à passagem pelo estômago, além do aumento do tempo de vida útil do produto.
Palavras-chave: Probióticos, Bacillus, Microbiota Intestinal.
ABSTRACT
The interest in the use of probiotics in order to prevent or treat diseases has been explored for many years.
More recently they have been described mechanisms of action of probiotics in allergic diseases and their
interaction with the gut as immune organ. Thus, the probiotics should be carefully studied before a
comprehensive recommendation. These products generally are very safe, since they are marketed for many
years as a dietary supplement or food fermented and have no side effects in metabolism. Definitive scientific
evidence proving the potential of probiotics to improve the quality of life of people with gastrointestinal
disorders is a subject of great expectations and promising scientific. Although the information presented
above, within the probiotic products currently in use, there are spore-forming bacteria, most of the genus
Bacillus. Used primarily in the form of spores, these products have been useful in the prevention of intestinal
disorders and the diversity of species used and their applications is surprising. Preparations containing
bacteria spores have the advantage that the spores can survive passage through the stomach intact, and
increasing the shelf life of the product.
Keywords: Probiotics, Bacillus, Intestinal Microbiota.
15

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8
1 INTRODUÇÃO
1.1 O gênero Bacillus
O gênero Bacillus compreende bacilos
gram-positivos formadores de esporos
(endósporos), aeróbios ou anaeróbios facultativos.
As bactérias deste gênero caracterizam-se por uma
intensa atividade metabólica, já que produzem
enzimas que degradam muitos substratos
orgânicos. O Bacillus cereus é um bacilo grande,
aeróbio, mesófilo, com flagelos peritríquios, e
produtor de esporos que podem ser centrais ou
subterminais. Linhagens de B. cereus são capazes
de utilizar vários carboidratos: glicose, frutose,
trealose, sacarose, salicina, maltose, manose, m-
inositol e lactose. São capazes de hidrolisar amido,
caseína e gelatina. São catalase positivos e oxidase
variável. Todas as linhagens são produtoras de
hemolisinas, sendo conhecidas pelo menos duas:
cereolisina (termoestável) e hemolisina termolábil.
São também produtores de fosfolipases do tipo C.
Essa bactéria multiplica-se bem entre 10°C e 48°C,
apresentando um ótimo de temperatura entre 28°C
e 35°C. A faixa de pH em que ocorre multiplicação
varia de 4,9 a 9,3 (FRANCO e LANDGRAF, 2002).
A maioria das linhagens de B. cereus é
capaz de produzir uma série de metabólitos
extracelulares, dos quais alguns estão relacionados
com seu mecanismo de virulência. Entre estes
metabólitos destacam-se a toxina diarréica e a
toxina emética, responsáveis por duas formas
distintas de gastroenterite. Ambos os tipos de
intoxicação resultam da ação das enterotoxinas no
lúmem do trato gastrointestinal (GRANUM et al.,
1997; KOTIRANTA et al., 2000). Segundo vários
autores, estas síndromes só se manifestam quando
um alimento contém número elevado de células
viáveis de B. cereus (entre 10
7
e 10
9
células).
As espécies do gênero são encontradas em
uma diversidade de hábitats, e incluem espécies
com significância ambiental, industrial e clínica. B.
cereus é largamente distribuído na natureza, sendo
o solo o seu reservatório natural. Por esta razão,
contamina facilmente alimentos como vegetais,
cereais, condimentos, dentre outros. A bactéria é
também encontrada na superfície de carne bovina,
suína e de frango, certamente devido à
contaminação com o solo. Bacillus cereus é um
problema sério também em laticínios (queijos e
sorvetes), sendo seus esporos muito comuns em
leite em pó. No Brasil, B. cereus tem sido isolado de
vários tipos de alimentos: queijos, farinhas, amidos,
alimentos desidratados, carne moída, com índices
de positividade entre 18% e 97%. Vários estudos
têm demonstrado que B. cereus faz parte da
microbiota fecal de indivíduos normais, havendo
algumas indicações que sua presença é mais
comum nos meses de verão, e dependente dos
hábitos alimentares. Entretanto, B. cereus não
coloniza o intestino, não persistindo por longos
períodos (FRANCO e LANDGRAF, 2002).
A ocorrência, no intestino, de esporos ou
células vegetativas de Bacillus spp. pode ser
proveniente de alimentos contendo o microrganismo
ou ingeridos como probióticos. Em humanos,
espécies de Bacillus são freqüentemente
identificadas em grandes números no intestino,
muito superior do que seria esperado se essas
espécies fossem derivadas de matéria vegetal
ingerida, indicando ser ele um membro transitório da
microbiota intestinal. Há muitos relatos de espécies
de Bacillus sendo isoladas de peixes e crustáceos,
assim como em camarão (GATESOUPE, 1999). É
importante lembrar que Bacillus spp. pode ser
encontrado na superfície de piscinas, lagos e rios, e
muitos peixes, crustáceos e moluscos ingerem
Bacillus spp. dessa matéria orgânica. Muitos
membros de espécies do grupo B. cereus sensu lato
são freqüentemente encontrados em invertebrados.
Bacillus cereus tem sido identificado no intestino de
numerosos insetos, incluindo pulgões, larvas de
mosquitos e baratas (JENSEN et al., 2003;
FEINBERG et al., 1999).
1.2 Bacillus como probiótico
Apesar das informações apresentadas
acima, dentro dos produtos probióticos em uso
atualmente, há as bactérias formadoras de esporos,
a maioria do gênero Bacillus. Usados primariamente
na forma de esporos, esses produtos têm sido úteis
na prevenção de desordens intestinais, e a
diversidade de espécies utilizadas e suas
aplicações é surpreendente. As preparações
contendo esporos da bactéria possuem a vantagem
de que o esporo pode sobreviver intacto à
passagem pelo estômago, além do aumento do
tempo de vida útil do produto. Os probióticos
contendo B. cereus que são comercializados estão
listados no quadro 1. Alguns deles foram estudados
e testados em ensaios clínicos. O mais conhecido é
comercializado com o nome Bactisubtil (Merell) e
contém uma linhagem proveniente do Instituto
Pasteur de Paris (IP 5832). O produto foi testado há
bastante tempo em ensaios clínicos com recém-
nascidos (GANCZARSKI et al., 1960;
VANDEKERKOVE, 1979). Mais recentemente,
outras linhagens de Bacillus foram utilizadas para
reduzir os efeitos secundários dos tratamentos
antimicrobianos contra Helicobacter pylori (NISTA et
al., 2004) e para tratamento antitumoral (MALKOV
et al., 2005). Além do B. cereus, outras espécies
têm sido utilizadas como probióticos, como Bacillus
licheniformis, B. pumilus, B. clausii, B. coagulans, B.
thuringiensis, dentre outras (HONG et al., 2004).
Os produtos utilizados para seres humanos
enquadram-se dentro de dois grandes grupos:
comercializados como medicamentos ou
comercializados como suplementos alimentares. Os
medicamentos são utilizados no tratamento das
16

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2
disfunções intestinais, particularmente diarréias em
crianças (principalmente infecções por rotavírus) ou
como complementos no uso de antimicrobianos.
Além do Bactisubtil® (B. cereus IP5832), podemos
citar Biosporin® (B. subtilis e B. licheniformis),
Biosubtyl `Nha Trang´ (B. pumilus), Biosubtyl `Da
Lat´(B. cereus), Subtyl (B. cereus) e Bibactyl (B.
subtilis) (HUYNH et al., 2004). As espécies
utilizadas como suplementos alimentares têm o
objetivo de aumentar o bem-estar do usuário,
restituir a microbiota natural intestinal, dentre outras
funções. Como exemplo podemos citar o produto
comercial Natto, que constitui-se de soja fermentada
pelo B. subtilis var. natto. Este produto tem
propriedades probióticas, como estimulação do
sistema imune, produção de vitamina K2 e atividade
anti-cancerígena (INOOKA et al., 1986;
TSUKAMOTO et al., 2001; HOSOI et al., 1999;
HOSOI et al., 2000 apud HONG et al., 2004).
Os esporos da bactéria, uma vez no
estômago, sofrem transformações assim como os
alimentos. Eles devem ser ativados no estômago e
no intestino através da ação de enzimas (HONG et
al., 2004).
Experimentalmente, é possível examinar o
destino dos esporos através da ingestão. Em seres
humanos esse estudo foi realizado com quatro
voluntários, aos quais foi dada uma dose fixa de 10
5
esporos de Bacillus stearothermophilus (KLIJN et
al., 1995 apud HONG et al., 2004). Nos primeiros
quatro dias após a ingestão, o número de UFC/g de
fezes de B. stearothermophilus foi mantido em nível
constante, após o qual as contagens diminuíram
significativamente pelo oitavo dia. Em um estudo
preliminar, B. stearothermophilus foi encontrado
presente nas fezes por dias seguidos após a dose
inicial (VESA et al., 2000 apud HONG et al., 2004).
De maneira interessante, neste estudo a cinética de
trânsito de B. stearothermophilus foi similar ao
probiótico Lactobacillus plantarum, o qual mostrou
evidência de colonização ou, pelo menos, retenção
no trato gastrointestinal. Esses estudos revelaram
que o tempo de trânsito (ou longevidade) do B.
stearothermophilus no trato gastrointestinal humano
foi de 8 a 10 dias, algo maior que o tempo de
trânsito calculado experimentalmente de um
marcador sólido no intestino (GRAFF et al., 2001
apud HONG et al., 2004).
Em outro estudo com humanos, 10
voluntários receberam duas pastilhas contendo 1,67
x 10
10
esporos de Bacillus polyfermenticus SCD
uma vez por dia durante 14 dias (KYU-YONG et al.,
2002 apud HONG et al., 2004). Neste trabalho
contagens de B. polyfermenticus SCD ainda eram
detectadas 4 semanas após a última dose. Esses
resultados diferem substancialmente daqueles de B.
stearothermophilus, uma vez que se os esporos não
têm interação com o trato gastrointestinal e
simplesmente passam através dele, era de se
esperar que não fossem observadas contagens de
B. polyfermenticus SCD após 22 a 24 dias. Embora
o modo como a dose foi administrada seja diferente,
duas explicações podem ser propostas. Primeiro, a
diferença pode ser espécie-específica e talvez os
esporos de B. polyfermenticus SCD sejam capazes
de aderir ao epitélio intestinal retardando seu
trânsito. Alternativamente, os esporos podem estar
proliferando dentro do trato gastrointestinal e aptos
a colonizar temporariamente. Para proliferar, os
esporos devem ter capacidade de germinação e
multiplicação. A passagem do produto probiótico
Paciflor
®
C10 (B. cereus CIP 5832) foi também
determinada em cães recebendo 10
6
esporos por
grama de refeição (BIOURGE et al., 1998 apud
HONG et al., 2004). Esporos e células vegetativas
foram primariamente detectadas em fezes 24hs
após ingestão e poderia não ser detectada após 3
dias, mostrando nenhuma evidência de colonização
(HONG et al., 2004).
Os primeiros estudos indicando que os
esporos podem germinar no trato gastrointestinal
vieram de experimentos usando alças ilíacas de
coelhos. Estudos mais completos in vivo têm usado
modelos murinos. Diferentes doses de esporos (de
10
8
a 10
10
) de B. subtilis linhagem PY79, foram
administradas a grupos de camundongos (Balb/c).
Em cada caso, os camundongos foram abrigados
individualmente e, usando gaiolas com grades no
fundo, as fezes totais puderam ser coletadas em
intervalos de 1-2 dias. Estes estudos mostraram que
as primeiras contagens de esporos foram
detectadas 3hs pós-dose e ainda, mais importante,
após 18hs o número de esporos excretados foi
maior do que administrado. Por volta de 5 a 7 dias
nenhuma contagem significativa de esporos pode
ser detectada, ainda que contagens cumulativas
mostraram um aumento no total de UFC. Uma vez
que as contagens totais foram maiores que a dose
administrada, a única explicação é de que os
esporos germinaram, multiplicaram e novamente
esporularam (HONG et al., 2004).
Primeiramente, o esporo é uma forma de
vida dormente e, presumivelmente, a região
superior do intestino delgado seria rica em
nutrientes que poderiam induzir a germinação, um
processo que não requer a síntese de proteínas de
novo. Além disso, como já foi mencionado, sabe-se
que esporos de algumas espécies de Bacillus são
reconhecidas como sendo capazes de germinarem
e multiplicarem no trato gastrointestinal, mais
notavelmente B. cereus. Estudos recentes em aves
domésticas e suínos têm demonstrado a
capacidade germinativa de B.cereus var toyoi, a
linhagem comercial presente no produto
Toyocerin®. Nestes estudos uma rápida germinação
no intestino superior dos animais foi observada,
atingindo níveis de 90% da dose de esporos
administrada. Interessantemente, nestes estudos
nem sempre foi possível observar um aumento no
número de esporos excretados nas fezes, indicando
que as condições fisiológicas do hospedeiro (por
exemplo, dieta) podem afetar a germinação e/ou a
multiplicação dos esporos (HONG et al., 2004).
17

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3
Estudos in vitro demonstraram a resistência
dos esporos aos fluidos intestinais, revelando que
nem todos os esporos são resistentes à simulação
do suco gástrico e aos biliares. Especificamente,
esporos de uma linhagem de B. cereus utilizada no
produto Biosubtyl®, mostraram-se extremamente
sensíveis ao suco gástrico simulado e aos sais
biliares, considerando que esporos de outras
linhagens de B. cereus apresentaram-se
completamente resistentes (DUC et al., 2004 apud
HONG et al., 2004). Uma explicação para esses
resultados inesperados é que os esporos podem
estar sujeitos à ativação da germinação induzida por
ácido (FAILLE et al., 2002; KEYNAN et al., 1969
apud HONG et al., 2004). A germinação dos
esporos é um processo extremamente rápido, de
modo que a germinação ácido-induzida poderia
produzir uma grande quantidade de células
vegetativas, as quais podem ser mortas pelo suco
gástrico. Há vários estudos revelando que as
células vegetativas do gênero Bacillus são sensíveis
às condições do trato gastrointestinal e o estômago,
em particular, representa uma grande barreira. Os
esporos, por outro lado, são resistentes a tais
condições. Se os esporos germinarem,
sobreviverem e multiplicarem, a bactéria deve
encontrar uma maneira de escapar da toxicidade
dos fluidos presentes no lúmen do trato
gastrointestinal. A passagem através do trato
gastrointestinal até o intestino delgado poderia diluir
os efeitos tóxicos dos sais biliares, mas em
contrapartida, poderia liberar as células num
ambiente anaeróbico do cólon. Possivelmente, o
alimento é suficiente para conferir alguma proteção.
Alternativamente, a adesão à mucosa intestinal e a
formação de biofilmes com a microbiota intestinal
poderia proporcionar um nicho temporário (HONG et
al., 2004).
Com relação à colonização das bactérias do
gênero Bacillus no intestino, vários estudos
mostraram que todos os probióticos compostos de
espécies de Bacillus mostraram grande retenção no
intestino de camundongos, sugerindo que eles
poderiam persistir por longo período. Como isto
poderia ocorrer ainda não está muito claro, mas
talvez resulte da adesão das células vegetativas ao
epitélio da mucosa, assim como em linhagens
patogênicas de B. cereus. No caso desta espécie,
alguns elementos poderiam estar envolvidos na
adesão da bactéria ao epitélio intestinal. Na célula
vegetativa, a camada S presente na parte mais
externa da célula, tem sido implicada na adesão,
assim como na resistência à fagocitose
(KOTIRANTA et al., 2000; SLEYTER, et al., 1993
apud HONG et al., 2004). No esporo, estruturas
como exosporium e pilus são responsáveis pela
adesão ao epitélio intestinal. No caso de B. cereus,
esporos de diferentes linhagens demonstraram
aderirem-se a muitos tipos de superfícies. Além
disso, linhagens desta espécie mostraram-se mais
hidrofóbicas que outras espécies de Bacillus
(RONNER et al., 1990 apud HONG et al., 2004).
Quanto maior a hidrofobicidade do esporo, maior
sua aderência ao epitélio (ANDERSON et al., 1998
apud HONG et al., 2004).
Quadro 1. Os probióticos contendo B. cereus que são comercializados atualmente.
Produto Alvo Produtor Comentários
Bactisubtil® Humanos Originalmente produzido por
Marion Merrell Dow Laboratories
Cápsula contendo
1x10
9
esporos de B.
cereus IP 5832
Biosubtyl Humanos Biophar Company, Da Lat, Vietnam Sachê (1g) contendo
10
6
– 10
7
esporos de
B. cereus adicionado
de tapioca
Biovicerin® Humanos Geyer Medicamentos S. A. Porto
Alegre, R. S.
B. cereus linhagem
GM em suspensão de
10
6
esporos/mL
Esporafeed Plus® Suínos Norel, S. A. Madrid, Espanha 1x10
9
esporos de B.
cereus (CECT 953)
Paciflor® C10 Bezerros, aves
domésticas, coelhos e
suínos
Intervet International B. V. Wim de
Körverstraat 35 NL-5831 AN
Boxmeer (Holanda)
2x10
8
– 5x10
9
esporos
de B. cereus CIP5832
(ATTC 14893)
Subtyl Humanos Mekophar, Pharmaceutical Factory,
Ho Chi Minh, Vietnam
Cápsula contendo 10
6
– 10
7
esporos de B.
cereus var vietnami
Toyocerin® Bezerros, aves
domésticas, coelhos e
suínos. Possível uso
em aquacultura
Asahi Vet S. A., Tokyo (Head Off.),
Japão
B. cereus var toyoi
(NCIMB-
40112/CNCM-1012)
HONG et al., 2004.
18

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2
2 CONSIDERAÇÕES FINAIS
No Brasil é comercializado um probiótico
denominado BIOVICERIN® que, segundo a bula do
produto “é constituído exclusivamente por cultura
viva de B. cereus esporulados na proporção de 5
milhões de endósporos por flaconete. “O
BIOVICERIN® atuaria através do mecanismo de
antagonismo bacteriano, produzindo substância
antimicrobiana (biocerina), competindo por
nutrientes com os microrganismos patogênicos
causadores da diarréia, competindo por sítios de
adesão na mucosa intestinal e modificando os
receptores de toxinas. Através da produção de
vitaminas do complexo B e enzimas, BIOVICERIN®
favoreceria a reconstituição da microbiota
necessária para o normal desempenho das funções
intestinais.
Os trabalhos de Goodlow, Johnson e outros,
sobre o poder antagônico do B. cereus, revelado in
vitro pela produção de uma substância antibiótica, a
biocerina, que atua sobre diversas bactérias
patogênicas do intestino humano, levaram a
experimentar a administração de B. cereus in vivo.
Nesse sentido, os trabalhos de Guida,
demonstraram que o B. cereus atua como agente
terapêutico nas enterocolites crônicas e agudas,
provocadas por infecção de origem endógena (E.
coli puro ou associado a antígenos somáticos,
semelhantes aos de Salmonella e Shigella) e de
origem exógena (como Salmonella, Shigella e
outros)”.
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__________________________________________
1 – Dra. Ariane Katiúscia dos Santos Martins,
Bióloga – Microbiologista, Departamento de
Microbiologia, ICB, Universidade Federal de Minas
Gerais.
2 – Dr. Flaviano dos Santos Martins, Professor
Doutor Adjunto II / Biólogo – Microbiologista,
Departamento de Microbiologia, ICB, Universidade
Federal de Minas Gerais.
3 – Dr. Flávio Henrique Ferreira Barbosa, Professor
Doutor Adjunto II / Biólogo – Microbiologista,
Colegiado de Farmácia, PPG Ciências da Saúde e
Ciências Farmacêuticas, Laboratório de
Bromatologia e Microbiologia de Alimentos,
Fundação Universidade Federal do Amapá –
UNIFAP, flavio.barbosa@unifap.br
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