Nesta reunião científica da VidaBemVinda, Dr. Oscar Duarte Filho apresentou as evidências mais modernas acerca dos Mosaicismos e das Alterações Genéticas que vemos na prática diária.

1. Reunião Científica: mosaicismos e alterações
genéticas na FIV
Oscar B. Duarte Filho, M.D.
19 de janeiro de 2017

2. 2
Fertility and Sterility® Vol. 101, No. 1,
Jan 2017

3. 3
Fertility and Sterility® Vol. 101, No. 1,
Jan 2017

4. Mosaicismo
 Erros na mitose pós-fertilização (2ª ou 3ª clivagem mais comum)
Genoma inativado Transcriptoma citoplasmático
 Aneuploide-aneuploide ou aneuploide-euploide (75% em
clivagem!!)
 Aneuploide-euploide 50% corrigem em blasto normal
– Divisão + lenta
– Apoptose
– Euploides  ICM

5. Mosaicismo: aCGH
 Estudo comparando FISH x aCGH de todo o blasto
 Detecção depende do grau de mosaicismo
– < 25% células aneuploides não detecta
– 25-40% células aneuploides detecta em 3/5 dos casos
– >40% detecta em todos os casos
 Concordância de 97% entre ICM e TE

6. Mosaicismo: NGS
 + rápido, + barato, várias amostras de DNA ao mesmo tempo
 MiSeq (Illumina):
– >50% de aneuploidia para detectar mosaicismo
– Aneuploidia de cromossomos inteiros + Contagem mitocondrial
 Personal Genome Machine (Thermo-Fischer Sci)
– >20% de aneuploidia para detectar mosaicismo
– Aneuploidia de cromossomos inteiros, deleções e duplicações + Contagem
mitocondrial (+ sensível  800 kb – 1,2 mb)
Aumento a taxa de falso positivo  até 33%

7. Mosaicismo: NGS
 Garisi et al (2016)
43 blastos mosaico descartados  múltiplas biópsias:
11,6% de blastos normais (TE e ICM)
41,8% de blastos normais (ICM)
TE = ICM (83% das vezes)
Taxa global de predição de mosaicismo: 58,2%
 Maxwell et al (2016)
14 blastos mosaico descartados  múltiplas biópsias
Taxa global de predição de mosaicismo: 48,3%
The detection of low-grade mosaicism within an embryo appears to be subject to
some degree of sampling error.

8. Mosaicismo: NGS
 Maxwell et al (2016)
78 blastos euploides com CGH
38 abortos  12 (32%) eram mosaico por NGS
38 NV  5 (16%) eram mosaico por NGS
This suggests that some mosaic embryos result in live birth, but they may also be
at increased risk of early pregnancy loss. The implantation potential of mosaic
embryos has yet to be determined, but data suggest that it may be reduced

9. Mosaicismo: grupos de risco?
 Idade avançada NÃO é fator de risco (alterações pós-zigóticas)
In a study including 192 donor oocyte cycles from nine different
IVF centers, rates of mosaicism detected by NGS performed at a
single genetics laboratory ranged from 17% to 47%

10. Mosaicismo:
aconselhamento pré-teste
 NGS: 1/3 dos embriões são mosaico!!!  aconselhamento pré-
teste sobre:
– falsos positivos
– Rebiópsia
– incertezas sobre repercussão clínica (nascido vivo saudável, abortamento e não
implantação, repercussões neonatais)

11. Mosaicismo: qual transferir?
 Princípios: Guideline (PGDIS)
– Monossomia + euploide > trissomia + euploide
(cuidado trissomia:monossomia for 1:1, um dos dois pode ser subdiagnosticado)
– Sexuais > autossomos
– Mosaico com trissomias 1, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 17, 19, 20, 22, X, Y > 2, 7, 13, 14, 15,
16, 18, and 21
– Mosaicos: + dissomias uniparentais (piores dissomias para o feto: 7, 14 e 15)
– Mosaicismo confinado a placenta (2,7, 16 e 22): RCF e OFIU
REGRAS PARA CROMOSSOMOS INTEIROS

12. Mosaicismo: aneuploidias parciais
 Aneuploidias parciais/segmentares puras: não transferir
 Mosaico euploide + aneuploidia parcial: ?

13. Mosaicismo: pré-natal nos mosaicos
 NIPT: (?) ACMGG  13, 18 e 21; risco de mosaicismo confinado à placenta
 CVS: risco de mosaicismo confinado à placenta
 Amniocentese: pode não representar todos os tecido fetais
 Tipo de estudo genético
– Citogenética convencional
– Microarray
– FISH
– Estudos para dissomias uniparentais

14. Mosaicismo: Conclusão
 Physicians should understand that mosaic embryos may represent a third
category between normal (euploid) and abnormal (aneuploid) embryos
 It can be difficult to determine which mosaic aneuploidies may be the
‘‘safest’’ to transfer. Although counseling patients about the risks associated
with trisomies 13, 18, and 21 and aneuploidies involving chromosomes 2, 7,
14, 15, and 16 may certainly be more straightforward, it is essential to
emphasize that full or partial aneuploidies involving other chromosomes
may not necessarily be safer to transfer; there is simply less known about
the risks.

16. CNVs: copy number variations
 Deleções parciais ou duplicações parciais
 Origem na meiose paterna e materna por igual
 NÃO TEM INFLUÊNCIA DA IDADE MATERNA
 > 50 bp
 Espectral: adaptativas  doença  letalidade
 Como testar: Chomossome microarray (CMA)  aCGH, SNP array
 Quem testar: atrasos de DNPM e intelectual a/e (MM Syndromes)

17. CNVs: copy number variations
 Cariótipo convencional > 5 Mb
 Cariótipo de alta resolução 2-5Mb
 CMA: 100 Kb

18. CMA: Pré-natal
 2,5% dos cariótipos normais em pré-natal tinham CNVs de
significado clínico
 3,2% dos cariótipos normais em pré-natal tinham CNVs de
significado incerto

19. CMA (aCGH, SNP): PGS

20. CNV: PGS
 Resolução atual prejudicada pela necessidade de amplificação de
DNA: as detectadas provavelmente patogênicas porque são
grandes
 Falta de banco de dados para interpretar os resultados
– Benigno
– Patogênico
– VUS