O documento discute espectrofotometria e fornece detalhes sobre os tipos de espectrofotometria, como a espectrofotometria de absorção mede a absorção de luz por amostras. A lei de Lambert-Beer relaciona a concentração de uma substância à quantidade de luz absorvida. Espectrofotometria é usada em análises biológicas e químicas para medir amostras.

1. Espectrofotometria
Docente: Derli Santos
Dicentes: Ana Carla, Antônio Júnior, Alexsandra Pimenta, Bruno Magno, Leonardo José e Luciene Ribeiro.

2. O que é fotometria?
A fotometria estuda a propriedade que diferentes elementos
químicos possuem de absorver radiações eletromagnéticas,
específicas para cada elemento, sendo possível obter valores da
concentração de soluções de interesse.

3. O que é espectrofotometria?
A espectrofotometria é o método de análises óptico mais
utilizado nas investigações biológicas e físico-químicas.
Baseia-se na medida quantitativa da absorção da luz pelas
soluções, onde a concentração na solução da substância
absorvente é proporcional à quantidade de luz absorvida.

4. Tipos de
espectrofotometria.
Espectrofotometria de absorção
Espectrofotometria de emissão
Espectrofotometria de espalhamento
*
*
*

5. Espectrofotometria de absorção.
⬥ Esse tipo de espectrofotometria, relaciona a energia absorvida com o
comprimento de onda da luz incidente.

6. Espectrofotometria de emissão.
⬥ Nela é analisada a quantidade de energia transmitida por um
material com relação ao comprimento de onda da radiação
absorvida.

7. Espectrofotometria de espalhamento
⬥ Determina a energia dispersa em
função do comprimento de onda,
ângulo de incidência e de polarização
da luz incidente.

8. Espectrofotometria de absorção
⬥ . Isto funciona porque todas as proteínas
absorvem a luz em comprimentos de onda
específicos e, através da utilização de
fórmulas exclusivas, a quantidade de luz que
é absorvida pode ser calculada através da
detecção da quantidade de luz que é refletida
a partir da solução, permitindo assim, que os
cientistas determinem a quantidade de
proteína.

9. Absorção de Radiação.
Vários fenômenos podem ocorrer com a
radiação luminosa, como: reflexão,
refração, espalhamento ou absorção.

10. Absorção de Radiação.
Os comprimentos de onda que uma certa
substância absorverá são característicos da
sua estrutura, diferindo de substância para
substância. Exemplos:
DNA e RNA = 260 nm
Proteínas = 280 nm
Células bacterianas = 600 nm
Benzeno = 255 nm ...

11. Lei de Lambert - Beer.
Através dessa lei, intensidades da radiação incidente e
emergente podem ser relacionadas com as concentrações do
material presente na solução
Efeitos de reflexão, refração e espalhamento não são
considerados nessa lei.
A radiação incidente deve ser monocromática

12. Lei de Lambert - Beer.
I0 = intensidade da luz
incidente.
I1 = é a intensidade da luz
uma vez tendo atravessado o
meio.
l = é a distância que a luz
atravessa.
A = - log10 T
T = I1 / I0

13. Absorbância.
•É a capacidade do material em absorver radiações de
comprimento de onda específico.
•0 a 2
Transmitância.
É a intensidade de luz remanescente após passar
por Uma amostra de matéria.
0 a 100%.

14. ENFIM, a lei de
Lambert-Beer permite
determinar a
concentração de uma
substância em função
da absorção de luz.

15. O que é um Espectrofotômetro?

16. É um instrumento que serve para medir a intensidade
da luz em função de um comprimento de onda
específico.
Espectrofotometria de absorção

17. Diagrama de Um espectrofotômetro
Esquema do funcionamento interno de um espectrofotômetro.

18. Fontes luminosas mais comuns.
Luz UV
Lâmpada de gás hidrogênio ou deutério
Mercúrio
Luz Visível
Tungstênio

19. Cubetas.

20.  Espectrofotometria de Luz Visível
Cubeta de Vidro ou Plástico
 Espectrofotometria de Luz
Ultravioleta
 Cubeta de Quartzo

21. Dicas Importantes.
 Localização do espectrofotômetro
- Bancada estável e exclusiva (se possível)
- Longe de fontes eletromagnéticas (rádio, microondas...)
 Ligar 30 mim antes do uso
 Cubetas (tipo e manuseio)
 Calibração

22. ELETROFORESE.
ELETROFORESE.

23. O QUE É A ELETROFORESE?
• A eletroforese é a migração de espécies carregada
eletricamente, que ocorre quando as mesmas são dissolvidas
ou suspensas em um eletrólito, através do qual uma corrente
elétrica é aplicada.

24. COMO É FEITA?
• Para a realização dessa técnica é necessário preparar um gel
de agarose ou poliacrilamida, dependendo do objetivo da
realização da técnica, solução tampão, cuba de eletroforese,
marcador de peso molecular e uma substância capaz de
permitir a visualização das amostras quando expostas à luz UV
ou LED. Depois disso, a técnica pode ser realizada da seguinte
forma:

25. COMO É FEITA?
• Colocar cada amostra em um poço do gel
Misturando uma pequena quantidade de marcador de peso molecular.
• Colocar em um dos poços um controle
positivo, que é a substância que se sabe o que é, e em outro poço, o controle negativo, para garantir a
validade da reação. Em ambos os poços, é necessário haver também o marcador de peso molecular
• Colocar o gel na cuba de eletroforese
caso não esteja, com a solução tampão específica, e ligar o aparelho para que seja gerada corrente
elétrica capaz de gerar de diferença potencial e separação das partículas de acordo com a sua carga e
tamanho. O tempo da corrida eletroforética varia de acordo com o objetivo do procedimento, podendo
durar até 1 hora
• Visualizar o resultado da eletroforese por meio do transiluminador
Quando o gel é colocado sob luz UV ou LED, é possível visualizar o padrão de bandas: quanto maior a
molécula, menor é a sua migração, ficando mais próximo do poço, enquanto que quanto mais leve for
a
molécula, maior é o potencial migratório.

26. SUA UTILIZAÇÃO
• Essa técnica é utilizada em análises clinicas, bioquímica,
genética molecular, pesquisa, entre outros.
• Identificar vírus, fungos, bactérias e parasitas;
• Teste de paternidade;
• Verificar a expressão de proteínas;
• Identificar mutações(diagnóstico de leucemias)
• Analisar os tipos de hemoglobina circulantes(diagnóstico da anemia
falciforme)
• Avaliar a quantidade de proteínas presentes no sangue.

27. TIPOS DE ELETROFORESE.
• Utilizado para proteínas plasmáticas (diagnóstico de doenças).
ELETROFORESE EM ACETATO DE CELULOSE

28. ELETROFORESE EM GEL
• Gel de Poliacrilamida (separação de proteínas)
• Gel de agarose (eletroforese de DNA)

29. TIPOS DE ELETROFORESE.
• Utilizada para sequenciamento do DNA.
ELETROFORESE EM CAPILAR

30. CONSIDERAÇÕES FINAIS.
A eletroforese é uma técnica que fornece
informações importantes, não somente de forma
fisiológica, mas também auxiliando no
diagnóstico e no prognóstico de diferentes
enfermidades e na identificação de processos
inflamatórios e infecciosos.

31. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
• ELETROFORESE: CONCEITOS E APLICAÇÕES. 2015. Disponível em:
http://www.conhecer.org.br/enciclop/2015c/agrarias/Eletroforese.pdf.
Acesso em: 08 jul. 2022.
• Referência: O QUE é eletroforese e qual a sua importância? 2015.
Disponível em: https://kasvi.com.br/o-que-e-eletroforese-e-qual-a-sua-
importancia/. Acesso em: 08 jul. 2022.
• Referência: PRINCÍPIOS da Técnica de Eletroforese. 2016. Disponível em:
https://kasvi.com.br/principios-da-tecnica-de-eletroforese/. Acesso em:
08 jul. 2022.

32. OBRIGADO!