O documento descreve diferentes tipos de detectores utilizados em cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), como detectores espectrofotométricos UV-Visível e eletroquímicos. Detectores espectrofotométricos medem a absorção de radiação eletromagnética por amostras, enquanto detectores eletroquímicos medem correntes geradas por reações de oxidação ou redução de compostos. Vários fatores como pureza da fase móvel, potenciais elé

1. Detector Espectrofotometrico UV-Visível
Nos detectores espectrofotométricos o seu funcionamento baseia-se na absorbância
de luz por parte da amostra ao passar através dela qualquer radiação
eletromagnética; normalmente isto ocorre no ultravioleta até o infravermelho, em
um dado comprimento de onda.
Trabalhando-se com detectores espectrofotométricos (UV-VIS), deve-se conhecer as
regiões de absorção da fase móvel utilizada. Uma indicação melhor é obtida pela análise
do espectro do solvente; em caso de presença de impurezas, as regiões em que o mesmo
absorve podem ser alteradas.
É um detector seletivo, pois só detecta os compostos que absorvem no comprimento
de ondaem que o detector for ajustado.É o detector mais utilizado em HPLC, pois
grande maioria das substâncias absorvem radiaçãoUV.
Tipos de detectores UV-VIS:
Existem dois tipos de detectores de luz ultravioleta: o de comprimento de onda
variável (espectrofotômetros), que não só é de aplicação mais variada e sensível,
mas também é mais caro, e o chamado fotométrico que funciona com um ou dois
comprimentos de onda fixos.
Espectrofotométricos:
a. O comprimento de onda é variável entre 190nm e 800nm selecionado através do
monocromador (UV = lâmpada de deutério e VIS = lâmpada de tungstênio).
b. Possui maior aplicação, pois permite selecionar o comprimento de onda mais
adequado para os componentes a serem analisados.
c. Maior sensibilidade: escolha do comprimento de onda de maior absorbância.
d. Maior seletividade: escolha do comprimento de onda onde o soluto de interesse
absorve e outros não.
e. Permite a utilização de análise por gradiente: escolha do comprimento de onda onde
os constituintes da fase móvel não apresentam variação de absorbância.
f. Permite obter o espectro de absorbância de cada componente
separadointerrompendo o fluxo da fase móvel e assim selecionar o melhor
comprimento de onda.

2. g. Promove eficiência em eluição por gradiente através da habilidade de selecionar um
comprimento de onda onde os componentes da fase móvel não apresentam uma
variação de absorbância para diferentes concentrações.
Figura 1: Célula do detector de ultravioleta para CLAE
Considerações importantes:
i. A fase móvel utilizada não pode absorver no comprimento de onda selecionado
ii. A pureza da fase móvel é extremamente importante (traços de impurezas podem
absorver intensamente no comprimento de onda utilizado): Utilizar solventes grau
HPLC.
Fotométricos:
a. É sensível, econômico e mais que suficiente para se conseguir bons resultados com
todos os compostos que absorvem luz no comprimento de onda em que ele
funciona.
b. É normalmente insensível a variações de vazão e temperatura. A maioria dos
detectores de comprimento de onda fixo, oferecidos no mercado, operam em um
comprimento de onda de 254 nm e um de 280 nm, resultado da absorbância de luz
em 254 nm e da emissão de luz em 280 nm por uma substância fosforescente.
c. Em ótimas condições, pode-se atingir sensibilidades de até 0,001 unidades de
absorbância e, se o composto absorve intensamente na faixa de UV, é possível
detectar quantidades de amostras da ordem de nanogramas (10-9 g).
d. Quando se aplica gradiente na fase móvel e ela apresenta variação significativa de
absorbância para o UV, é necessário utilizar a cela de referência para compensar

3. esta variação. Se a fase móvel não absorve ou se a absorbância é constante, pode-se
deixar a cela de referência vazia ou cheia com um dos componentes da fase móvel.
Denomina-se de “cutoff” o comprimento de onda abaixo do qual o solvente absorve
mais de 1,0 unidade de absorbância numa célula de 1 cm de comprimento. Tabelas
apresentando os valores de “cutoff” podem ser úteis para a escolha da fase móvel
adequada. Esses dados são importantes, uma vez que a resposta do detector depende da
diferença entre a absorbância do solvente e a do composto analisado.
Detector Eletroquímico
O detector eletroquímico baseia-se na possibilidade de muitos compostos serem
oxidados ou reduzidos quando seaplica um potencial elétrico.Em um processo
eletroquímico, um par de eletrodos é colocado na cela e um potencial
suficientemente elevado é aplicado provocando uma reação de oxidação ou
reduçãogerando uma corrente que é medida em um detector eletroquímico. A
corrente gerada éproporcional a concentração do composto.
Métodos eletroquímicos de detecção oferecem a mais promissora solução para o
problema de desenvolvimento de um detector para CLAE suficientemente sensível
e não baseado em absorbância de luz. Eles oferecem vantagens de alta seletividade,
alta sensibilidade e serem muito bons para as análises de traços.
É importante destacar que, neste tipo de detecção, a amostra tem que ser constituída
de íons ou compostos que sofram ou oxidação ou redução (detectores
polarográficos). Este detector é seletivo, porque detecta somente as espécies que se
oxidam (ou reduzem) em um potencial inferior ou igua1 ao fixado. Os detectores
eletroquímicos são bons para as modalidades de cromatografia que usam fases
móveis aquosas, tais como a cromatografia por troca iônica, por exclusão ou com
fase reversa por pares de íons ou ate com fase reversa com compostos oxidáveis na
fase água-álcool.
Tipos de detectores eletroquímicos:
Amperométrico
O elemento flui pela superfície do eletrodo onde uma fração das
espécieseletroativas é oxidada ou reduzida (15-20%).

4. Coulométrico
O elemento flui através de um eletrodo de grafite poroso onde praticamente100%
das espécies eletroativas são oxidadas ou reduzidas e portanto a sensibilidade
émuito maior (10-15 mol = fentomol).
http://www.crq4.org.br/sms/files/file/conceitos_hplc_2010.pdf
http://www.ebah.com.br/content/ABAAAAUVwAC/apostila-hplc