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Os neutrófilos polimorfonucleares são leucócitos  derivados da medula óssea , com tempo de sobrevida determinado, que dese...
Leucograma A avaliação inicial das deficiências de fagócitos inclui a contagem total e diferencial de leucócitos . Leucope...
Avaliação da capacidade de migração A migração espontânea e a quimiotaxia podem ser estudadas pela técnica da câmara de Bo...
Câmara de Boyden Sangue heparinizado Membrana filtrante Fator quimiotático Incuba-se por 1 hora, a 37 C
Neutrófilos Avaliação da migração dos neutrófilos no filtro:
Avaliação do metabolismo oxidativo. O metabolismo  oxidativo é um evento peculiar dos fagócitos quando expostos a estímulo...
Produção de O 2 -  / H 2 O 2 + LPS de bactérias Adiciona NBT Teste do NBT neutrófilo Cristais de formazan ...fagocitados p...
Avaliação da capacidade de aderência O método  de imunofluorescência direta , que utiliza anticorpos monoclonais para iden...
Atividade fagocitária e microbicida Bactérias ou partículas marcadas, são colocadas em contato com fagócitos em suspensão ...
1) Método convencional células fagocitárias  +  bactérias opsonizadas incubação 37 C   lise dos fagócitos diluições cultur...
2) Método de coloração com fluorocromo vital células fagocitárias  +  bactérias opsonizadas lavagem coloração com alaranja...
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Ap13 - Teste de atividades de neutrófilo

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Ap13 - Teste de atividades de neutrófilo

  1. 1. TESTES DE ATIVIDADE DE NEUTRÓFILOS Trabalho realizado pelos acadêmicos de Medicina da UFBA Adriana Campos, Nivaldo Cardozo Filho, Sabrina Oliveira e Silvana Asfora, sob orientação dos Professores Roberto Meyer, Ivana Nascimento, Robert Schaer, Cláudia Brodskyn, Songelí Freire e Denise Lemaire, do Laboratório de Imunologia do Instituto de Ciências da Saúde da UFBA. Atualizado em outubro de 2003
  2. 2. Os neutrófilos polimorfonucleares são leucócitos derivados da medula óssea , com tempo de sobrevida determinado, que desempenham um papel central na defesa do hospedeiro contra a infecção.
  3. 3. Leucograma A avaliação inicial das deficiências de fagócitos inclui a contagem total e diferencial de leucócitos . Leucopenia ou leucocitose persistentes podem requerer um estudo da medula óssea. A presença de grânulos gigantes em leucócitos, por sua vez, estabelece o diagnóstico de síndrome de Chediak- Higashi. Veja:
  4. 4. Avaliação da capacidade de migração A migração espontânea e a quimiotaxia podem ser estudadas pela técnica da câmara de Boyden. Consiste no uso de um filtro, membrana com microporos , colocado entre dois compartimentos de uma câmara , através do qual os leucócitos migram em direção ao compartimento contendo uma substância quimiotática. A migração celular é avaliada medindo-se a distância percorrida pelas células através do filtro, por observação microscópica, anotando–se as variações micrométricas.
  5. 5. Câmara de Boyden Sangue heparinizado Membrana filtrante Fator quimiotático Incuba-se por 1 hora, a 37 C
  6. 6. Neutrófilos Avaliação da migração dos neutrófilos no filtro:
  7. 7. Avaliação do metabolismo oxidativo. O metabolismo oxidativo é um evento peculiar dos fagócitos quando expostos a estímulos apropriados que resultam em aumento repentino do consumo de oxigênio, fenômeno descrito como “respiratory burst”. Assim eles produzem ânions superóxido, peróxido de hidrogênio, radicais hidroxil e oxigênio “singlete”, que compõem o mais importante sistema microbicida dessas células. O teste de redução de NBT detecta esses produtos. O “nitro blue tetrazolium” (NBT), é um corante solúvel amarelo , que serve como receptor de elétrons. Quando reduzido pela ativação do metabolismo oxidativo, forma um produto azul escuro insolúvel denominado formazan.
  8. 8. Produção de O 2 - / H 2 O 2 + LPS de bactérias Adiciona NBT Teste do NBT neutrófilo Cristais de formazan ...fagocitados pelo neutrófilo
  9. 9. Avaliação da capacidade de aderência O método de imunofluorescência direta , que utiliza anticorpos monoclonais para identificação de moléculas na superfície de neutrófilos , é considerado mais sensível e específico para a confirmação de deficiências de moléculas de adesão como as glicoproteínas CD11/ CD18. anticorpos monoclonais fluoresceinados contra marcadores de neutrófilos. CD11/CD18
  10. 10. Atividade fagocitária e microbicida Bactérias ou partículas marcadas, são colocadas em contato com fagócitos em suspensão em meio líquido ou aderidos a uma lamínula de vidro. Após um período de incubação, as células são fixadas e analisadas quanto ao número de partículas. Permite a avaliação simultânea das atividades fagocitária e microbicida dos fagócitos.
  11. 11. 1) Método convencional células fagocitárias + bactérias opsonizadas incubação 37 C lise dos fagócitos diluições cultura bacteriana bactérias viáveis . sobrenadante lavagem
  12. 12. 2) Método de coloração com fluorocromo vital células fagocitárias + bactérias opsonizadas lavagem coloração com alaranjado de acridina lavage m microscópio de luz U.V. bactérias viáveis(pretas) bactérias mortas(vermelhas) sobrenadante

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