Este documento descreve o cultivo de fibroblastos dérmicos de caprinos adultos em diferentes meios de cultura. Os resultados mostraram que todos os meios testados apoiaram adequadamente o crescimento celular sem contaminação. Não houve diferenças significativas na morfologia, marcadores de superfície ou capacidade proliferativa entre os meios de cultura testados.

1. MEIOS DE CULTURA CELULAR DEPENDENTES DA
DINÂMICA IN VITRO E CARACTERÍSTICAS DE
CULTURA DE CÉLULAS FIBROBLÁSTICAS
DÉRMICAS DE CAPRINOS ADULTOS.
MESTRADO EM BIOTECNOLOGIA
CENTRO UNIVERSITÁRIO INTA - UNINTA

2. INTRODUÇÃO
 Os fibroblastos são as células mais
prevalentes da derme
Associados à manutenção da:
 Homeostase estrutural
 Síntese de fatores de crescimento
Proteínas da matriz extracelular (MEC):
 Colágeno e Elastina

3. INTRODUÇÃO
 Os fibroblastos desempenham um papel
crucial:
 Processo de desenvolvimento normal
 Manutenção de tecidos
 Reparo de feridas
Vários outros processos biológicos:
 Migração celular, diferenciação e apoptose
 Produção de moléculas reguladoras:
citocinas

4. INTRODUÇÃO
 A criação de linhagens celulares de fibroblastos auxiliam no uso de recursos
genéticos;
 O isolamento e cultivo de fibroblastos de inúmeros tecidos animais para o
estabelecimento de linhagens celulares são obrigatórios;
Cultivo de fibroblastos
 Fibroblastos são a escolha ideal para preservar
espécies ameaçadas;
 As células de inúmeras espécies foram cultivadas com
sucesso in vitro.

5. INTRODUÇÃO
 Apesar de compartilharem características comparáveis,
existem linhagens de fibroblastos específicas de tecidos
para apoiar as necessidades de órgãos específicos;
 Devido sua curta vida útil, os fibroblastos também são
um recurso limitado;
 Assim, são necessários meios de cultura adequados para
garantir o seu desempenho de crescimento ideal.

6. INTRODUÇÃO
 A literatura não pode demonstrar o efeito dos meios de
cultura nos fibroblastos através de processos biológicos:
proliferação e migração celular;
 Esta informação é importante porque a proliferação e
migração celular são a base para vários processos
fisiopatológicos: cicatrização de feridas;
 Para aplicações clínicas de fibroblastos dérmicos, é
essencial otimizar as condições de cultura;
 Presença de glicose no meio de cultura celular é
importante para a saúde celular geral.

7. OBJETIVO
 Efeitos da suplementação de glicose nos fibroblastos
cultivados através de localização imunocitoquímica.
 Identificar a condição do meio mais apropriado e os efeitos adicionais da glicose
na proliferação e manutenção das propriedades funcionais dos Fibroblastos;

8. RESULTADOS
Morfologia das células cadfibroblastos:
 Em todos os meios, as células expandiram-se
normalmente e formaram uma monocamada;
 Fibroblasto exibiu uma morfologia fusiforme
clássica com núcleos ovais posicionados no
centro;
 A morfologia celular foi indistinguível em todos
os meios testados.

9. CONTAMINAÇÃO POR MICRORGANISMOS
 A cada 2 dias eram examinados se havia alguma
contaminação microbiana nas culturas;
 A contaminação microbiana poderia levar à falha da
cultura celular;
 Não foi observada nenhuma alteração na turbidez
dos meios;
 Indicando não haver multiplicação microbiana
durante o cultivo.

10. PROLIFERAÇÃO CELULAR E TEMPO DE DUPLICAÇÃO
DA POPULAÇÃO
 O número de fibroblastos viáveis relata que condições ideais de cultura foram
usadas para proliferar as células e todos os meios foram apropriados.

11. CARACTERIZAÇÃO IMUNOCITOQUÍMICA
 Imagens representativas da dupla coloração
de imunofluorescência para marcadores de
fibroblastos (Vimentina e FSP-1- proteína
específica de fibroblastos);
 Não foi observado diferença na expressão
de ambos os marcadores entre os
diferentes meios.

12. UNIDADE FORMADORA DE COLÔNIA (UFC)
 Em baixa densidade, foram
formadas colônias discretas
de Fibroblastos aderentes,
cada colônia individual
surgindo de uma única célula
precursora, conhecida como
UFC.
Imagens representativas do efeito dos meios de cultura na
eficiência da UFC de células fibroblásticas dérmicas adultas
caprinas:

13. MATERIAIS E MÉTODOS
Todos os animais foram alojados em um sistema com ração e água;
Durante o experimento, a faixa de temperatura ambiente (83°F), umidade relativa
(48%) e Índice de Temperatura e Umidade (85%);
O Comitê de Ética Animal do Instituto aprovou a investigação;
Os métodos do estudo estavam de acordo com as diretrizes da Supervisão de
Experimentos em Animais (SEA).
Coleta das amostras

14. COLHEITA DE CÉLULAS
 As amostras de pele foram embebidas em etanol a 70% e depois lavadas em um
recipiente contendo 10 µg/ml de gentamicina e 10 µl/ml de antibiótico;
 As amostras de tecido foram transferidas assepticamente para uma placa de Petri
estéril de 90 mm usando uma pinça estéril;
 A camada epidérmica das amostras de pele excisadas foram arranhadas com um
bisturi descartável estéril e a amostra foi novamente enxaguada com etanol a 70%.

15. MONITORAMENTO DE CONTAMINAÇÃO
 Um microscópio foi usado para examinar
as culturas em dias alternados para avaliar
a expansão das células primárias de
fibroblastos;
 A cultura também foi examinada quanto a
quaisquer indicações de contaminação
microbiana ou fúngica.