1) O documento discute os fundamentos da engenharia genética, incluindo o uso de enzimas de restrição e ligases de DNA para combinar genes de diferentes fontes em um vetor. 2) Vetores como bacteriófagos e plasmídeos são usados para transferir DNA recombinante para células receptoras. 3) cDNA é usado para ultrapassar o problema de intrões em procariotas, sintetizando DNA complementar a partir de mRNA.

1. Fundamentos de Engenharia Genética REVISÕES

2. Fundamentos de Engenharia Genética Tecnologia do DNA recombinante

3. Tecnologia do DNA recombinante O que permite fazer? Em que “ferramentas” se baseia? Combinar na mesma molécula de DNA genes provenientes de fontes diferentes Enzimas de restrição Ligases de DNA vectores

5. GAATTC CTTAAG ? Sequência de restrição As enzimas de restrição cortam o DNA da célula dadora e o DNA do vector na mesma sequência de restrição

6. GAATTC CTTAAG ? Extremidades coesivas – de cadeia simples G CTTAA AATTC G G CTTAA Fragmento de restrição

7. ? As Extremidades coesivas podem ligar-se pela actividade de ligases de DNA G CTTAA AATTC G G CTTAA Fragmento de restrição Como podem ligar-se as extremidades coesivas de 2 fragmentos de restrição? Há complementaridade entre as bases das extremidades coesivas dos fragmentos de restrição do DNA dador e vector

8. Como se transfere DNA de uma célula ou organismo dador para uma célula ou organismo receptor? vectores Que vectores são utilizados? bacteriófagos plasmídeos Pequenas moléculas circulares de DNA que ocorrem naturalmente em algumas bactérias, leveduras e células vegetais

9. Molécula de DNA dadora seleccionada Gene com interesse Vector adequado Tratamento com a mesma enzima de restrição AATTC G G CTTAA Fragmento de restrição

10. Vector adequado AATTC G G CTTAA Fragmento de restrição As ligases estabelecem a ligação entre os fragmentos de restrição e o vector As extremidades coesivas são complementares e estabelecem a ligação

11. Vector com DNA dador Transferido para célula ou organismo receptor O organismo receptor passa a ter DNA recombinante!

12. Fundamentos de Engenharia Genética C DNA – DNA complementar