O documento descreve técnicas de manipulação de DNA, incluindo desnaturação e renaturação de DNA, utilização de enzimas de restrição para cortar DNA em locais específicos, e uso de vetores como plasmídeos e fagos para clonagem de DNA estrangeiro. Vetores como pUC18, BACs e YACs são discutidos como opções para clonagem de fragmentos grandes de DNA.
Este documento discute a engenharia genética e as técnicas de DNA recombinante. Descreve como as enzimas de restrição cortam o DNA em locais específicos e como os genes podem ser isolados e inseridos em plasmídeos de bactérias para produzir proteínas recombinantes. Também explica como a reação em cadeia da polimerase é usada para amplificar segmentos de DNA.
O documento discute a engenharia genética, que envolve técnicas para identificar, isolar e manipular genes de organismos vivos. Isso permite aplicações como produzir plantas e alimentos resistentes, diagnosticar e tratar doenças, e identificar suspeitos criminosos. No entanto, também levanta questões éticas sobre a segurança e consequências destas manipulações.
O documento discute os fundamentos da engenharia genética, incluindo a clonagem molecular, vetores, enzimas e células hospedeiras usadas. Ele explica como os genes podem ser isolados, copiados e transferidos entre espécies usando estas ferramentas da biotecnologia, com aplicações como a produção de proteínas e organismos transgênicos.
Fundamentos De Engenharia GenéTica (Parte Iii)Nuno Correia
O documento discute a produção de DNA complementar (cDNA) a partir de mRNA. Explica que a transcriptase reversa converte o mRNA em DNA simples fita e a DNA polimerase em seguida produz a fita complementar de DNA. O cDNA difere do DNA original por não conter intrões, já que é produzido a partir do mRNA maduro. A produção de cDNA desafia o "dogma central da bioquímica" ao permitir que a informação flua de RNA para DNA.
7 1 2 RevisãO Fundamentos De Engenharia GenéTicaCidalia Aguiar
1) O documento discute os fundamentos da engenharia genética, incluindo o uso de enzimas de restrição e ligases de DNA para combinar genes de diferentes fontes em um vetor.
2) Vetores como bacteriófagos e plasmídeos são usados para transferir DNA recombinante para células receptoras.
3) cDNA é usado para ultrapassar o problema de intrões em procariotas, sintetizando DNA complementar a partir de mRNA.
Class about genetic engineering of microrganisms. Important concepts in molecular biology, classical molecular methods, recombinant DNA technology, OGMs
O documento descreve os diferentes tipos de clonagem, incluindo a clonagem reprodutiva, terapêutica e molecular. A clonagem molecular envolve a construção de moléculas de DNA recombinante usando vetores e células hospedeiras para gerar cópias do DNA de interesse.
Este documento discute a engenharia genética e as técnicas de DNA recombinante. Descreve como as enzimas de restrição cortam o DNA em locais específicos e como os genes podem ser isolados e inseridos em plasmídeos de bactérias para produzir proteínas recombinantes. Também explica como a reação em cadeia da polimerase é usada para amplificar segmentos de DNA.
O documento discute a engenharia genética, que envolve técnicas para identificar, isolar e manipular genes de organismos vivos. Isso permite aplicações como produzir plantas e alimentos resistentes, diagnosticar e tratar doenças, e identificar suspeitos criminosos. No entanto, também levanta questões éticas sobre a segurança e consequências destas manipulações.
O documento discute os fundamentos da engenharia genética, incluindo a clonagem molecular, vetores, enzimas e células hospedeiras usadas. Ele explica como os genes podem ser isolados, copiados e transferidos entre espécies usando estas ferramentas da biotecnologia, com aplicações como a produção de proteínas e organismos transgênicos.
Fundamentos De Engenharia GenéTica (Parte Iii)Nuno Correia
O documento discute a produção de DNA complementar (cDNA) a partir de mRNA. Explica que a transcriptase reversa converte o mRNA em DNA simples fita e a DNA polimerase em seguida produz a fita complementar de DNA. O cDNA difere do DNA original por não conter intrões, já que é produzido a partir do mRNA maduro. A produção de cDNA desafia o "dogma central da bioquímica" ao permitir que a informação flua de RNA para DNA.
7 1 2 RevisãO Fundamentos De Engenharia GenéTicaCidalia Aguiar
1) O documento discute os fundamentos da engenharia genética, incluindo o uso de enzimas de restrição e ligases de DNA para combinar genes de diferentes fontes em um vetor.
2) Vetores como bacteriófagos e plasmídeos são usados para transferir DNA recombinante para células receptoras.
3) cDNA é usado para ultrapassar o problema de intrões em procariotas, sintetizando DNA complementar a partir de mRNA.
Class about genetic engineering of microrganisms. Important concepts in molecular biology, classical molecular methods, recombinant DNA technology, OGMs
O documento descreve os diferentes tipos de clonagem, incluindo a clonagem reprodutiva, terapêutica e molecular. A clonagem molecular envolve a construção de moléculas de DNA recombinante usando vetores e células hospedeiras para gerar cópias do DNA de interesse.
Tecnologia do DNA recombinante e aplicaçõesaivilsilveira
O documento discute vários tópicos sobre tecnologia do DNA recombinante, incluindo vetores como plasmídios e fagos lambda para clonagem de DNA, técnicas como PCR e Southern blot, e aplicações como mapeamento de genoma, produção de organismos transgênicos e diagnóstico pré-natal.
O documento descreve os conceitos básicos da tecnologia do DNA recombinante, incluindo o uso de enzimas de restrição para cortar o DNA em locais específicos, vetores de clonagem para inserir fragmentos de DNA, e a transformação de células hospedeiras para replicar o DNA recombinante. A clonagem molecular permite isolar e propagar moléculas idênticas de DNA e tem aplicações importantes na medicina, agricultura e pesquisa.
O documento explica o que é DNA recombinante, como as bactérias desenvolveram enzimas de restrição e modificação para se defender de DNA invasor de fagos, e como estas enzimas são usadas junto com vetores para construir DNA recombinante através de técnicas como clonagem molecular e PCR.
O documento discute a expressão heteróloga de proteínas, incluindo: 1) A importância das proteínas e da expressão heteróloga para estudos funcionais e produção; 2) Os principais sistemas de expressão como bactérias, leveduras e células de insetos; 3) O processo de escolher o vetor correto, preparar o inserto, transformar as células, induzir a expressão e purificar a proteína.
Aula de Engenharia Genética sobre Enzimas de restriçãoJaqueline Almeida
O documento discute sobre enzimas de restrição, incluindo: 1) Enzimas de restrição são proteínas que reconhecem e cortam DNA em sequências específicas; 2) Existem três tipos principais de enzimas de restrição; 3) As enzimas de restrição tipo II são as mais comumente usadas e reconhecem e cortam dentro de sequências de 4-8 pares de bases.
O documento descreve diferentes tipos de vetores de clonagem para eucariotas, incluindo leveduras, plantas e animais. Detalha vetores comuns como plasmídeos 2μm para leveduras e o plasmídeo Ti de Agrobacterium para plantas. Também discute o uso de retrovírus e microinjeção para clonagem em mamíferos.
O documento descreve a história da tecnologia do DNA recombinante. Resume que estudiosos demonstraram que o DNA serve de molde para o RNA e que endonucleases de restrição foram descobertas em 1970 permitindo cortar e recombinar DNA. Também discute plasmídeos e como Boyer e Cohen uniram esforços em 1972 para criar o primeiro DNA recombinante.
O documento discute a recombinação em vírus, especificamente em bacteriófagos. Apresenta as descobertas iniciais de Twort e D'Herelle sobre bacteriófagos e descreve o ciclo de vida dos fagos, incluindo adsorção, penetração do DNA, síntese de novos vírus e liberação. Também discute a descoberta da recombinação em fagos através de experimentos com mutantes de fagos T2 que mostram a segregação de classes recombinantes.
O documento discute os fundamentos da engenharia genética, incluindo o que é engenharia genética, clonagem molecular, isolamento de DNA, vetores e células hospedeiras. A engenharia genética envolve a manipulação do material genético através de técnicas como isolamento, cópia e recombinação de genes.
Este documento discute os fundamentos da engenharia genética, resumindo três técnicas principais: 1) Enzimas de restrição cortam DNA em locais específicos; 2) DNA recombinante é usado para transferir genes entre organismos; 3) Reações em cadeia da polimerase (PCR) multiplicam rapidamente fragmentos de DNA.
O documento discute a produção de proteínas recombinantes, descrevendo:
1) O que são proteínas recombinantes e como são produzidas através da técnica de DNA recombinante.
2) Algumas aplicações das proteínas recombinantes nas áreas da saúde, biologia, agricultura e biotecnologia.
3) O processo geral de produção de proteínas recombinantes utilizando vetores, células hospedeiras e purificação.
Técnicas básicas de biologia molecularThuane Sales
O documento discute técnicas básicas de biologia molecular, incluindo PCR, clonagem molecular, sequenciamento e eletroforese. Também aborda enzimas de restrição, vetores e sequenciamento de DNA.
1) A engenharia genética permite a manipulação de genes para clonagem, criação de seres geneticamente modificados e produção de compostos orgânicos.
2) A tecnologia do DNA recombinante usa enzimas de restrição para juntar genes de diferentes organismos em um único ser.
3) A clonagem molecular e a produção de seres transgênicos permitem a produção industrial de insumos humanos e o desenvolvimento de plantas mais resistentes.
O documento descreve a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), incluindo sua história, aplicações e processos. A PCR permite a amplificação seletiva de fragmentos de DNA e é amplamente utilizada em diagnósticos médicos, testes de paternidade e análises forenses.
O documento discute conceitos fundamentais de genética bacteriana, incluindo genótipo e fenótipo, plasmídeos, mutações, agentes mutagênicos, transformação, conjugação e transdução. Plasmídeos são elementos genéticos que conferem propriedades importantes às bactérias, como resistência a antibióticos. Mutações, transferência de DNA e recombinação genética podem ocorrer por diferentes mecanismos.
1. O documento lista os nomes e números de alunos matriculados em uma disciplina de biotecnologia no Colégio Espaço. 2. A disciplina trata da tecnologia do DNA recombinante e será ministrada pela professora Karla Samire na cidade de Atibaia, São Paulo, em outubro de 2013. 3. O documento também inclui um plano de aula com introdução, desenvolvimento e conclusão sobre o tema do DNA recombinante.
Este documento descreve a engenharia genética, que envolve a manipulação artificial de genes de organismos para produzir organismos geneticamente melhorados. Isso inclui duplicar, transferir e isolar genes com o objetivo de melhorar as funções dos organismos e produzir substâncias úteis.
O documento descreve onde se encontra o material genético em diferentes organismos, incluindo procariotas e eucariotas. Nos procariotas como a E. coli, o DNA está localizado no citoplasma em um único cromossoma circular. Nos eucariotas, o DNA está organizado em cromossomas lineares no núcleo e também em DNA mitocondrial e cloroplastidial. O documento também discute a regulação gênica, incluindo os operões lac e trp em bactérias como a E. coli.
O documento discute a tecnologia do DNA recombinante, incluindo o dogma central da biologia molecular, técnicas como enzimas de restrição e eletroforese em gel, e como a clonagem molecular é usada para estudar genes. A tecnologia do DNA recombinante tem importantes aplicações na farmacologia, produção de bactérias especializadas e no setor agropecuário.
Engenharia genética é o conjunto de técnicas que permitem identificar, manipular e multiplicar genes em organismos vivos. Aplicações incluem produção de insulina, hemoglobina humana em porcos e terapia genética para leucemia linfóide crônica.
O documento discute a história e aplicações da engenharia genética, incluindo a produção da insulina, organismos geneticamente modificados, e debates éticos sobre a manipulação genética em seres humanos e agricultura.
Tecnologia do DNA recombinante e aplicaçõesaivilsilveira
O documento discute vários tópicos sobre tecnologia do DNA recombinante, incluindo vetores como plasmídios e fagos lambda para clonagem de DNA, técnicas como PCR e Southern blot, e aplicações como mapeamento de genoma, produção de organismos transgênicos e diagnóstico pré-natal.
O documento descreve os conceitos básicos da tecnologia do DNA recombinante, incluindo o uso de enzimas de restrição para cortar o DNA em locais específicos, vetores de clonagem para inserir fragmentos de DNA, e a transformação de células hospedeiras para replicar o DNA recombinante. A clonagem molecular permite isolar e propagar moléculas idênticas de DNA e tem aplicações importantes na medicina, agricultura e pesquisa.
O documento explica o que é DNA recombinante, como as bactérias desenvolveram enzimas de restrição e modificação para se defender de DNA invasor de fagos, e como estas enzimas são usadas junto com vetores para construir DNA recombinante através de técnicas como clonagem molecular e PCR.
O documento discute a expressão heteróloga de proteínas, incluindo: 1) A importância das proteínas e da expressão heteróloga para estudos funcionais e produção; 2) Os principais sistemas de expressão como bactérias, leveduras e células de insetos; 3) O processo de escolher o vetor correto, preparar o inserto, transformar as células, induzir a expressão e purificar a proteína.
Aula de Engenharia Genética sobre Enzimas de restriçãoJaqueline Almeida
O documento discute sobre enzimas de restrição, incluindo: 1) Enzimas de restrição são proteínas que reconhecem e cortam DNA em sequências específicas; 2) Existem três tipos principais de enzimas de restrição; 3) As enzimas de restrição tipo II são as mais comumente usadas e reconhecem e cortam dentro de sequências de 4-8 pares de bases.
O documento descreve diferentes tipos de vetores de clonagem para eucariotas, incluindo leveduras, plantas e animais. Detalha vetores comuns como plasmídeos 2μm para leveduras e o plasmídeo Ti de Agrobacterium para plantas. Também discute o uso de retrovírus e microinjeção para clonagem em mamíferos.
O documento descreve a história da tecnologia do DNA recombinante. Resume que estudiosos demonstraram que o DNA serve de molde para o RNA e que endonucleases de restrição foram descobertas em 1970 permitindo cortar e recombinar DNA. Também discute plasmídeos e como Boyer e Cohen uniram esforços em 1972 para criar o primeiro DNA recombinante.
O documento discute a recombinação em vírus, especificamente em bacteriófagos. Apresenta as descobertas iniciais de Twort e D'Herelle sobre bacteriófagos e descreve o ciclo de vida dos fagos, incluindo adsorção, penetração do DNA, síntese de novos vírus e liberação. Também discute a descoberta da recombinação em fagos através de experimentos com mutantes de fagos T2 que mostram a segregação de classes recombinantes.
O documento discute os fundamentos da engenharia genética, incluindo o que é engenharia genética, clonagem molecular, isolamento de DNA, vetores e células hospedeiras. A engenharia genética envolve a manipulação do material genético através de técnicas como isolamento, cópia e recombinação de genes.
Este documento discute os fundamentos da engenharia genética, resumindo três técnicas principais: 1) Enzimas de restrição cortam DNA em locais específicos; 2) DNA recombinante é usado para transferir genes entre organismos; 3) Reações em cadeia da polimerase (PCR) multiplicam rapidamente fragmentos de DNA.
O documento discute a produção de proteínas recombinantes, descrevendo:
1) O que são proteínas recombinantes e como são produzidas através da técnica de DNA recombinante.
2) Algumas aplicações das proteínas recombinantes nas áreas da saúde, biologia, agricultura e biotecnologia.
3) O processo geral de produção de proteínas recombinantes utilizando vetores, células hospedeiras e purificação.
Técnicas básicas de biologia molecularThuane Sales
O documento discute técnicas básicas de biologia molecular, incluindo PCR, clonagem molecular, sequenciamento e eletroforese. Também aborda enzimas de restrição, vetores e sequenciamento de DNA.
1) A engenharia genética permite a manipulação de genes para clonagem, criação de seres geneticamente modificados e produção de compostos orgânicos.
2) A tecnologia do DNA recombinante usa enzimas de restrição para juntar genes de diferentes organismos em um único ser.
3) A clonagem molecular e a produção de seres transgênicos permitem a produção industrial de insumos humanos e o desenvolvimento de plantas mais resistentes.
O documento descreve a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), incluindo sua história, aplicações e processos. A PCR permite a amplificação seletiva de fragmentos de DNA e é amplamente utilizada em diagnósticos médicos, testes de paternidade e análises forenses.
O documento discute conceitos fundamentais de genética bacteriana, incluindo genótipo e fenótipo, plasmídeos, mutações, agentes mutagênicos, transformação, conjugação e transdução. Plasmídeos são elementos genéticos que conferem propriedades importantes às bactérias, como resistência a antibióticos. Mutações, transferência de DNA e recombinação genética podem ocorrer por diferentes mecanismos.
1. O documento lista os nomes e números de alunos matriculados em uma disciplina de biotecnologia no Colégio Espaço. 2. A disciplina trata da tecnologia do DNA recombinante e será ministrada pela professora Karla Samire na cidade de Atibaia, São Paulo, em outubro de 2013. 3. O documento também inclui um plano de aula com introdução, desenvolvimento e conclusão sobre o tema do DNA recombinante.
Este documento descreve a engenharia genética, que envolve a manipulação artificial de genes de organismos para produzir organismos geneticamente melhorados. Isso inclui duplicar, transferir e isolar genes com o objetivo de melhorar as funções dos organismos e produzir substâncias úteis.
O documento descreve onde se encontra o material genético em diferentes organismos, incluindo procariotas e eucariotas. Nos procariotas como a E. coli, o DNA está localizado no citoplasma em um único cromossoma circular. Nos eucariotas, o DNA está organizado em cromossomas lineares no núcleo e também em DNA mitocondrial e cloroplastidial. O documento também discute a regulação gênica, incluindo os operões lac e trp em bactérias como a E. coli.
O documento discute a tecnologia do DNA recombinante, incluindo o dogma central da biologia molecular, técnicas como enzimas de restrição e eletroforese em gel, e como a clonagem molecular é usada para estudar genes. A tecnologia do DNA recombinante tem importantes aplicações na farmacologia, produção de bactérias especializadas e no setor agropecuário.
Engenharia genética é o conjunto de técnicas que permitem identificar, manipular e multiplicar genes em organismos vivos. Aplicações incluem produção de insulina, hemoglobina humana em porcos e terapia genética para leucemia linfóide crônica.
O documento discute a história e aplicações da engenharia genética, incluindo a produção da insulina, organismos geneticamente modificados, e debates éticos sobre a manipulação genética em seres humanos e agricultura.
A replicação do DNA é o processo pelo qual uma molécula de DNA de dupla hélice é duplicada, resultando em duas moléculas idênticas. Isso ocorre através da ação de enzimas como a DNA polimerase, que separam as fitas de DNA e incorporam novos nucleotídeos para formar novas fitas complementares, de modo semi-conservativo - cada nova molécula contém uma fita da molécula original e uma fita recém-sintetizada. Esse processo é essencial para a divisão celular e herança genética
O documento discute a engenharia genética e suas técnicas, como a recombinação de DNA e PCR, que permitem manipular genes entre espécies. Essas técnicas trouxeram aplicações na agricultura, saúde e meio ambiente, mas também levantam questões bioéticas sobre a manipulação genética e seus impactos.
Slide higienização e manipulação dos alimentosMírian de Moura
O documento discute a importância da higiene pessoal, dos utensílios e dos alimentos na prevenção da contaminação. Ele explica que a contaminação pode ser física, química ou biológica e destaca a necessidade de seguir normas de higiene durante a manipulação dos alimentos para evitar doenças transmitidas por alimentos. Ele também fornece orientações sobre higiene pessoal, utensílios, esponjas e lixo.
1. O documento discute os conceitos fundamentais da biotecnologia e biologia molecular, incluindo a estrutura e função das células, DNA, RNA e síntese de proteínas.
2. A biologia molecular teve início na década de 1940 com o estudo da estrutura e função das moléculas biológicas, culminando na descoberta da estrutura de dupla hélice do DNA por Watson e Crick em 1953.
3. A engenharia genética revolucionou o campo ao permitir a manipulação do material genético at
O documento discute os conceitos fundamentais da genética molecular, incluindo a estrutura do DNA e RNA, o código genético, a transcrição, tradução e replicação do DNA. Explica como os genes armazenam e transmitem informações para a produção de proteínas através do código genético universal.
O documento discute conceitos de genética microbiológica e biotecnologia, incluindo estrutura e função do material genético, fluxo da informação genética, regulação da expressão gênica bacteriana, mutação, transferência genética, tecnologia do DNA recombinante e suas ferramentas como enzimas de restrição, vetores e reação em cadeia da polimerase.
O documento descreve 1) fagos lambda que carregam DNA e infectam bactérias, 2) técnicas de criação de bibliotecas genômicas usando fragmentação de DNA e fagos, e 3) mecanismos de replicação fiel e reparo do DNA em bactérias.
Sim, é correto afirmar que a pessoa que recebe um transplante de medula óssea passa a ter o DNA do sangue igual ao do doador e diferente do restante do corpo. Isso ocorre porque as células-tronco presentes na medula óssea são as responsáveis por gerar as células sanguíneas, como hemácias, leucócitos e plaquetas. Portanto, quando a medula do receptor é substituída pela do doador, as novas células sanguíneas passam a ser produzidas a partir das células-tronco doador, cont
As enzimas de restrição são enzimas produzidas por bactérias que cortam o DNA em locais específicos. Existem três tipos de enzimas de restrição, sendo que as do tipo II são as mais utilizadas em biotecnologia, pois cortam o DNA de forma previsível e não precisam de ATP. Essas enzimas reconhecem sequências curtas de pares de bases no DNA e cortam dentro ou próximo a essas sequências.
1) O documento discute a estrutura e função das células, DNA, RNA e síntese de proteínas.
2) O DNA contém os genes e é replicado durante a divisão celular para transmitir o material genético.
3) Existem quatro tipos de RNA - mensageiro, transportador, ribossômico e heterogêneo - que auxiliam na transferência da informação genética e síntese de proteínas.
O documento discute impressões digitais de DNA e técnicas como RFLP e PCR usadas para gerar perfis genéticos únicos de indivíduos. Isso é feito analisando microssatélites, sequências repetitivas de DNA, que variam entre pessoas. Esses perfis de DNA podem ser usados para identificar criminosos, vítimas e resolver casos de paternidade.
O documento descreve as endonucleases de restrição, enzimas produzidas por bactérias que cortam o DNA viral em fragmentos para proteger a bactéria contra infecções. As enzimas reconhecem sequências específicas de DNA e geram fragmentos com extremidades que podem ser usados em técnicas moleculares. As enzimas de restrição são amplamente utilizadas em biologia molecular para estudar variações genéticas e construir DNA recombinante.
O documento descreve as relações entre DNA, RNA e proteínas no código genético. O DNA é transcrito em RNA mensageiro que é traduzido em proteínas. Existem três tipos de RNA - mensageiro, transportador e ribossômico - que participam da síntese de proteínas. As informações para fabricar proteínas estão codificadas no DNA através do código genético.
O documento descreve as principais estruturas e funções do núcleo celular, incluindo o envoltório nuclear, cromatina, nucleoplasma, nucléolo e os processos de duplicação do DNA, transcrição, tradução e síntese de proteínas.
O documento descreve a estrutura e replicação do DNA, incluindo sua compactação em cromatina e nucleossomos, a composição de nucleotídeos e ácidos nucleicos, o pareamento de bases, a estrutura em dupla hélice, e os componentes e processo de replicação semiconservativa.
O documento descreve as fases do ciclo celular e da mitose. (1) Descreve as fases da interfase - G1, S e G2 - onde ocorre a duplicação do DNA e das organelas. (2) Detalha as etapas da prófase e metáfase da mitose, onde ocorre a condensação dos cromossomos e sua ligação ao fuso mitótico. (3) Menciona que na anáfase ocorre a separação dos cromossomos que migram para os pólos da célula.
O documento discute as técnicas de manipulação do DNA, incluindo o sequenciamento, a amplificação e a clonagem de genes. Essas técnicas permitem a análise detalhada do material genético e identificação de genes relacionados a doenças, com potencial para diagnóstico e tratamento. No entanto, a clonagem humana apresenta riscos éticos que devem ser considerados.
O documento fornece uma introdução à biologia molecular, descrevendo: 1) A estrutura do DNA e como ele armazena e transmite informações genéticas; 2) Os principais eventos históricos que levaram à compreensão da estrutura do DNA e de como ele controla as células e organismos; 3) Os processos de replicação do DNA, transcrição e tradução que permitem a expressão dos genes.
Iv sinteseproteica-111013090643-phpapp02Éricka Rocha
O documento discute a síntese de proteínas nas células, incluindo o código genético, transcrição, tradução e funções de proteínas. Explica que a informação genética no DNA é transcrita em mRNA que é traduzido em proteínas usando o código genético de três nucleotídeos. As proteínas têm muitas funções importantes como estruturais, enzimáticas e de transporte.
Este documento descreve a estrutura e função do núcleo celular e o processo de mitose. Ele começa explicando as características e componentes do núcleo celular durante a interfase, incluindo a carioteca, nucleoplasma, nucléolo e cromatina. Em seguida, descreve as etapas do ciclo celular, com foco na mitose, explicando cada uma das fases - prófase, metáfase, anáfase e telófase. Por fim, discute brevemente a importância do estudo do carió
The document discusses 3D bioprinting techniques for tissue engineering applications. It describes inkjet, extrusion, and laser-assisted bioprinting methods. For each method, it outlines the advantages such as high resolution and cell viability, as well as disadvantages such as potential mechanical stress to cells. Case studies examine how bioprinting parameters like pressure and nozzle diameter affect cell viability, and how acoustic droplet ejection can be used to pattern cocultures of cells. Another case study demonstrates how extrusion bioprinting can be used to generate a human bilayer skin construct for wound healing applications.
This document discusses the microbial production of 1,3-propanediol (1,3-PD) from glycerol, a byproduct of biodiesel production. Various microorganisms like Klebsiella pneumoniae and Clostridium butyricum can ferment glycerol into 1,3-PD. The metabolic pathway and fermentation conditions for high 1,3-PD yields are described. Downstream processing for 1,3-PD recovery involves pretreatment, primary recovery using methods like evaporation and ion exchange chromatography, and final purification with vacuum distillation or liquid chromatography. Producing 1,3-PD microbiologically from glycerol generates less greenhouse gases and uses less nonrenewable
Regiões repetitivas do DNA: regiões TANDEM, formação de microssatélites e minissatélites, análise de minissatélites (multilocus probe e single locus probe), análise de STRs,DNA nuclear em comparação com DNA mitocondrial e do cromossoma Y, técnica RAPD.
I. O documento discute a produção de óleos e gorduras por via microbiana utilizando microrganismos oleaginosos.
II. Aborda os conceitos-chave de microrganismos oleaginosos e "óleos de célula única", as vantagens da via microbiana, diversidade de microrganismos e processos de cultivo e extração de lípidos.
III. Inclui informações sobre o metabolismo lipídico destes microrganismos e fatores que influenciam a acumulação de lípidos.
I. O documento discute várias doenças autoimunes, incluindo lúpus, artrite reumatoide, diabetes e esclerose múltipla. II. Cada doença é explicada em termos dos sintomas, causas e tratamentos. III. O documento fornece também referências adicionais sobre cada tópico discutido.
Este documento aborda três modalidades: basquetebol, badminton e atletismo. Resume a origem histórica, identificação e alguns fundamentos técnicos de cada modalidade, incluindo regras e equipamentos específicos.
1. O documento apresenta um excerto da obra épica "Os Lusíadas" de Camões, no qual o poeta reflete sobre o que caracteriza um herói e como se conquistam honras de verdade.
2. Camões descreve que os heróis evitam comportamentos ociosos e se apoiarem em honras de ancestrais, buscando por si mesmos grandes feitos que ultrapassam dificuldades e perigos.
3. A honra só é conquistada através do esforço pessoal e da virtude comprovada em
Este documento descreve os principais heterónimos de Fernando Pessoa: Alberto Caeiro, Ricardo Reis e Álvaro de Campos. Caeiro é apresentado como o "Mestre", poeta da natureza que sente sem pensar. Reis busca a serenidade através da filosofia estoica e epicurista. Campos passa por fases decadentista, futurista e intimista, sempre em busca de novas sensações.
O poema descreve a morte trágica de um jovem soldado em um campo abandonado. Apesar de ter sido atingido por duas balas, ele ainda segura a cigarreira que sua mãe lhe deu. O lenço branco sob seu corpo representa sua inocência perdida. A mãe espera em casa pela volta de seu "menino", sem saber que ele já morreu longe dela.
O documento discute a obra do poeta português Fernando Pessoa. Apresenta alguns dos principais temas em sua poesia como o fingimento artístico, a dor de pensar, a nostalgia da infância e a fragmentação do eu. Explora também dicotomias como consciência/inconsciência e realidade/sonho que estão presentes em sua obra. Resume brevemente o conteúdo de alguns de seus poemas mais conhecidos.
O documento discute recursos geológicos e sua exploração sustentável. Aborda conceitos como recursos renováveis e não renováveis, e exemplos de cada um, incluindo combustíveis fósseis. Explora também as vantagens e desvantagens do uso de gás natural e petróleo.
Este documento discute a evolução da ciência ao longo do tempo, desde os primeiros tempos em que a religião dominava até a era moderna da experimentação. Também aborda os limites éticos da ciência e a necessidade de uma "ciência com consciência".
O documento descreve a evolução histórica da compreensão dos conceitos de ácido e base, desde a antiguidade até teorias modernas. Inicialmente, ácidos eram considerados substâncias "azedas" e bases substâncias alcalinas, mas conceitos foram sendo aperfeiçoados. A teoria de Arrhenius definiu ácidos como produtores de íons hidrogênio e bases de íons hidróxido, mas tinha limitações. A teoria de Brønsted-Lowry definiu ácidos e bases em termos de doação e
O documento descreve o processo de Haber-Bosch para a síntese de amoníaco a partir do nitrogênio do ar e hidrogênio. Explica que o nitrogênio é retirado do ar através de liquefação e destilação fracionada e que o hidrogênio é obtido principalmente através da eletrólise da água.
1) O documento analisa o papel do tempo e espaço na obra Frei Luís de Sousa de Almeida Garrett.
2) O tempo e espaço constituem elementos fundamentais para o desenvolvimento psicológico da trama e personagens.
3) Ao longo da obra, o espaço físico vai afunilando para representar o crescendo da tragédia, enquanto o tempo também é condensado para reforçar a tensão dramática.
Este documento descreve o movimento literário conhecido como Realismo em Portugal no século XIX, que surgiu como uma reação contra o Ultra-romantismo. A Geração de 70, liderada por intelectuais como Antero de Quental, foi fundamental para esta mudança, promovendo novas ideias através do Cenáculo e das Conferências do Casino. O Realismo passou a enfatizar a observação da realidade em vez do sentimentalismo.
Este documento fornece informações sobre três modalidades esportivas: ginástica, voleibol e andebol. Resume a origem histórica de cada modalidade, identificando alguns de seus fundamentos técnicos e regras principais.
O sermão foi pregado em 1646 no Maranhão e usa os peixes como alegoria para os homens. Nele, Padre António Vieira elogia algumas virtudes humanas, mas critica severamente os vícios dos colonos. Ele também diz que a irracionalidade dos peixes é melhor que a racionalidade humana, pois os homens chegam mortos em espírito ao altar de Deus.
Este documento apresenta um trabalho realizado por três alunos sobre Luís de Camões e a "Medida Nova". Aborda a vida e obra de Camões, o Renascimento, o Classicismo e a estrutura da "Medida Nova". Os alunos concluem que Camões enriqueceu a literatura portuguesa e personificou bem o uso da "Medida Nova".
Taxonomia: é a ciência que classifica os seres vivos, estabelecendo critérios...jenneferbarbosa21
Taxonomia: é a ciência que classifica os seres vivos, estabelecendo critérios para classificar todos os seres vivos em grupos, de acordo com as características fisiológicas, evolutivas, anatômicas e ecológicas.
Cards das Espécies da Coleção-Carpoteca Temática Itinerante sediada no Labora...jenneferbarbosa21
JENNEFER AGUIAR BARBOSA e LÚCIA FILGUEIRAS BRAGA
Trabalho de Conclusão de Curso de Graduação em Ciências Biológicas “Recursos didáticos para o ensino de Ciências da natureza, utilizando uma Carpoteca temática e itinerante com Espécies fornecedoras de Produtos Florestais Não Madeireiros” - Universidade do Estado de Mato Grosso -Campus de Alta Floresta.
EVOLUÇÃO-EVOLUÇÃO- A evolução pode ser definida como a mudança na forma e no ...jenneferbarbosa21
JENNEFER AGUIAR BARBOSA e LÚCIA FILGUEIRAS BRAGA
Trabalho de Conclusão de Curso de Graduação em Ciências Biológicas “Recursos didáticos para o ensino de Ciências da natureza, utilizando uma Carpoteca temática e itinerante com Espécies fornecedoras de Produtos Florestais Não Madeireiros” - Universidade do Estado de Mato Grosso.
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Apontamentos de Biotecnlogia Alimentar II : manipulação DNA
Manipulação de DNA
O DNA pode ser desnaturado, quebra de pontes de H, por alteração dos valores pH,
temperatura que suporta. Mas também pode ser renaturado, se eu tiver as duas cadeias
completamente separadas entre si, a renaturação ocorre em dois passos: primeiro as cadeias
encontram-se, por colisões, e formam um pequeno sitio de complementariedade entre bases.
(first step, relatively slow- nucleation). Numa segunda fase mais rápida, há emparelhamento e
as duas cadeias ‘’zippper’’ between them.
A interacção entre nucleótidos da cadeia dupla, diminui a absorção de luz UV.
É a maior a absorção numa solução com nucleótidos livres.
Efeito hipocrómico: quando tens a cadeia dupla que tem menor capacidade de
absorção
Efeito hipercrómico: fala-se deste quando há desnaturação da dupla-hélice: os
nucleótidos livres tem maior absortividade.
Cada espécie de DNA tem uma temperatura característica de desnaturação ( melting
point).G---C qt maior for o conteúdo destas bases como estão fortemente ligadas =>
maior é Tm (melting temperature)
A concentração de sal também influencia: quanto maior a concentração de sal, maior a
força iónica, o que acontece é que a concentração de iões mascara as cargas
diminuindo as repulsões, estabilizando a estrutura. ‘’Daí, ser necessário ceder mais
energia para desnaturar a cadeia. ‘’
Hibridização : desnaturo as cadeias de DNA por aquecimento, misturo as cadeias soltas (tinhas
DNA de espécies diferentes) arrefeço a temperatura tal que as cadeias vão emparelhar, com
base na complementariedade entre si. Posso formar híbridos.
Quero incorporar DNA estrangeiro no genoma de um hospedeiro.
1. Cortar o DNA em locais bem definidos
Usas endonucleases de restrinção que reconhecem e cortam o DNA em sequências específicas
Type II restriction endonuclease é um grupo muito usado de endonucleases, a este pertence
EcoRI, HindIII (…)
As enzimas de restrição (ou endonucleases de restrição) são enzimas que cortam o
DNA em locais específicos. As enzimas reconhecem determinadas sequencias
nucleotídicas do DNA e fragmentam a molécula sempre que identificam essa
sequência, produzindo extremidades coesivas ou cegas : muitas enzimas de restrinção
cortam em ziguezague e ficamos com uma cauda. Estas caudas são complementares a
outras bases. No caso das extremidades cegas, algumas enzimas clivam ambas as
cadeias de DNA no mesmo ponto, e não obtenho caudas.
Margarida Rodrigues
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Apontamentos de Biotecnlogia Alimentar II : manipulação DNA
Repara que, se obténs caudas o processo é muito mais especifico, pois a sequência de DNA
clivada para emparelhar de novo tem que encontrar similitude para a cauda proeminente
Há menos erros, pois há maior especificidade.
Nas cegas, a complementariedade a garantir é muito menor : todos os nucleótidos das
extremidades estão já emparelhados.
a. Extremidades coesivas : EcoRI ; BamHI ; HindIII;
b. Extremidades cegas: SmaI ; Atu I
Os operadores podem inserir sequências especificas num vector, fragmentos sintéticos de DNA
(linkers) entre as pontas que estão a ser ligadas. Estes fragmentos tem múltiplos locais de
reconhecimento para endonucleases- polylinkers.
Polylinkers são importantes : são marcos para a seguir se poder adicionar DNA por quebra e
ligação. É um sitio de interacção com enzimas de restrinção, adicionado por engenharia
genética. Para clonar, escolhe-se uma enzima que corte em um ou dois destes locais. Facilita a
linearização da cadeia ( o vector é circular) para depois se poder clonar. Daí polylinker ou
multiple-cloning-site.
Clonagem direccional : clonagem direccional significa que o fragmento de DNA será
inserido no plasmídio em apenas um sentido.
2. Selecção do Vetor
Plasmideos como vectores de clonagem, pela replicação independente, tamanho
pequeno, numero múltiplo de cópias, presença de marcas de seleção
Plasmídeos são moléculas circulares duplas de DNA capazes de se reproduzir
independentemente do DNA cromossómico. Ocorrem geralmente em bactérias e por
vezes também em organismos eucarióticos unicelulares (ex: o anel de 2-micra em
Saccharomyces cerevisiae).
Os plasmídeos contém geralmente um ou dois marcadores seleccionáveis que conferem
uma vantagem selectiva à bactéria que os abriga, por exemplo, a capacidade de construir
uma resistência a antibióticos. A resistência advém da presença de pelo menos um gene
que codifique uma enzima capaz de neutralizar um determinado antibiótico.
Todos os plasmídeos contém pelo menos uma sequência de DNA que serve como uma
"origem de replicação" ou ori (um ponto inicial para a replicação de DNA), e que permite
ao DNA do plasmídeo replicar-se independentemente do DNA cromossómico. A ori é uma
Margarida Rodrigues
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Apontamentos de Biotecnlogia Alimentar II : manipulação DNA
sequência específica de cinquenta a cem pares de bases e a sua presença é obrigatória
para que ocorra a replicação do plasmídeo.
Os epissomas são plasmídeos que se conseguem integrar no DNA cromossómico do
hospedeiro. Por esta razão, podem permanecer intactos durante muito tempo, ser
duplicados em cada divisão celular do hospedeiro, e transformar-se numa parte básica
da sua constituição genética.
I. Pbr322
Tem locais importantes de restrinção: diferentes locais de reconhecimento que
são alvos para para endonucleases de restrinção, contribuindo com sítios onde o
plasmídeo pode mais tarde ser cortado p inserir o DNA estranho.
Tem resistência à ampicilina e à tetraciclina: ele tem genes que conferem
resistência a estes dois diferentes antibióticos, por isso, serve como marca de
seleção
Ori
4363 pares de bases.. facilita a entrada do plasmídeo nas células e a manipulação
bioquímica. ( pois é pequeno)
II. pAT153
conseguido por melhoramento do plasmídeo anterior : por remoção, e cortes.
É mais pequeno;
Perdeu ainda mais a capacidade de se transferir por conjugação : o que é positivo,
pois assim o operador tem o controlo pleno, evitando a disseminação do
plasmídeo com o DNA transferido.
III. Puc18 e puc19 são muito pequenos, 2686pb, são idênticos, contêm polilynkers em
sítios diferentes.
Rep: responsável pela replicação do plasmídeo-este plasmídeo foi aqui modificado
também para conseguirem maiores números de cópias
Bla gene: coding for beta lactamases, também foi modificado relativamente ao
pBR32
“It has one ampR gene (ampicillin resistance gene), and an N-terminal fragment of
β-galactosidase (lac Z) gene of E. coli. The multiple cloning site (MCS) region is split
into the lac Z gene (codons 6–7 of lac Z are replaced by MCS), where various
restriction sites for many restriction endonucleases are present.
The ori site or replicon, rep is derived from pMB1 vector. pUC vector is small but
has a high copy number. The high copy number of pUC plasmids is a result of the
lack of the rop gene and a single point mutation in rep of pMB1. The lac Z gene
codes for α-galactosidase. The recognition sites for HindIII, SphI, PstI, SalI, XbaI,
BamHI, SmaI, KpnI, SacI and EcoRI restriction enzymes have been derived from the
vector M13mp19.”
Margarida Rodrigues
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Apontamentos de Biotecnlogia Alimentar II : manipulação DNA
LacI gene : lac repressor protein [na aula : gene que permite a regulação do lacZ? ]
É importante as marcas de selecção: tem de ser possível distinguir entre as células
que recebem o plasmídeo das que não recebem. Toma um exemplo da aula:
Por exemplo vou usar o puk18 para transferir DNA estranho, este plasmídeo contêm
uma resistência à ampicilina, e lacZ –codifica para β-galactosidase .
Ao inserir o gene no plasmídeo entre o lacZ a célula deixa de ser capaz de degradar a
lactose. Porque não consegue produzir a β-galactosidase. Trato a célula com um
composto semelhante à lac. O X-gal que quando está hidrolisado cora de azul, e é
incolor quando não está hidrolisado. Num meio de cultura as células que estiverem
azuis degradaram o composto, isto é, conseguiram hidrolisar o X-Gal. Logo como se
pretende as células cujo o processo de incorporação do plasmídeo recombinante foi
eficaz, essas serão as que permanecem incolor (incapazes de degradar o X-Gal).
Fazes distinção entre três vectores:
Vetores de clonagem
Típico ( o que foi visto até aqui)
Vectores vai-vem
Vectores de clonagem capazes de replicar em organismos geneticamente distintos.
Margarida Rodrigues
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Apontamentos de Biotecnlogia Alimentar II : manipulação DNA
São escolhidos porque conseguem ser incorporados em células procariontes( E.coli)
mas também são , ao mesmo tempo, usados para infetar células eucariontes, usa-se
em leveduras.
Encontras marcas de selecção para eucariotas, e (e.g.) t/pa : transcrição de sinais para
terminação/poli-adenilação.
E duas ori : oriY e oriC
CEN- sequencia do centrómero
Vectores de expressão
Plasmídeo desenhado para expressão proteica na célula. O vetor é usado para
introduzir um gene numa célula alvo, tal que, consiga controlar o mecanismo para a
síntese proteica da proteína codificada pelo gene. O plasmídeo é desenhado para
conter uma sequência regulatória que actue como potenciador, promotor.. O
objectivo é produzir mRNA estável, e depois proteínas.
Superprodução de uma proteína recombinada (proteína-r) de forma
controlada
Margarida Rodrigues
Origem de replicação + marcas genéticas de selecção
Região promotora reconhecida pelo hospedeiro
Codão de iniciação ATG
Terminador de transcrição, a jusante da sequência codificante para
evitar a formação de m RNA longo
Uma região ( Shine-Dalgarno) que garante uma ligação efectiva do m
RNA ao ribo
Um ou mais codões STOP p a terminação da tradução
Expressão de proteínas recombinantes:
Expressão em E. coli:
Vantagem: simplicidade e baixo custo
Expressão em células eucariotas
Vantagens: quase sempre as proteínas são expressas no compartimento subcelular correto e
corretamente processadas.
Desvantagem: difícil produzir em larga escala (células de mamíferos, por ex.)Produção em
levedura é eficiente
O gene para ser expresso é inserido numa zona de restrinção do polylinker, perta do promotor.
Ocorre a transcrição do gene inserido. O operador permite a regulação por meio de
repressores. E encontra-se no mRNA uma sequência Shine-Delgarno que favorece a actividade
óptima dos ribo. : eles ligam-se a esta sequência, geralmente está localizada até ~8bases antes
do codão iniciação. Ajuda a recrutar o ribossoma p iniciar a síntese proteica
pSE420- vetor de expressão controlada
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Apontamentos de Biotecnlogia Alimentar II : manipulação DNA
Trc promotor: strong E.coli promotor
T1 e T2- terminadores da transcrição
Outros vectores de clonagem
Bacteriofagos
Um fago (também chamado bacteriófago) é um tipo de vírus que infecta apenas bactérias.
Muito usado pois, ~1/3 do seu genoma codifica para DNA não essencial, pelo que, pode
ser substituído por DNA estranho.
Os vectores desenvolvidos podem ser separados em três partes, 2 que contêm partes
essenciais e uma não. Qd o vetor é usado para clonagem, a terceira parte é descartada e
DNA essencial é colocado. O objectivo é que seja possível produzir fagos viáveis. Nota na
imagem:
Margarida Rodrigues
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Apontamentos de Biotecnlogia Alimentar II : manipulação DNA
In vitro packaging in phage
coats ~~ empacotado se o
seu comprimento for 40000 e
53000 pares de bases
Nota que: aqui fala-se muito em vectores de substituição porque como tens uma parte
de DNA q não é essencial, essa porção é removida em detrimento do DNA que se quer
incorporar. Assim, aumento as possibilidades de inserir seções de DNA no fago
***Charon 40 ; EMBL 4
Existem vectores de inserção : o DNA é inserido sem ocorrer remoção de DNA que já
estava presente. Sempre obedecendo aos limites.
BAC (bacterial artificial cromossome)
Vetores de clonagem com origem bacteriana, foram desenhados para a clonagem de grandes
segmentos de bases. Geralmente incluem resistências ao antibiótico clorofenicol, tal como
uma origem de replicação muito estável. Que mantêm o plasmídeo entre uma a duas cópias
por célula.Isto é importante, porque limita a oportunidade de combinações indesejadas que
poderiam alterar o DNAclonado. O DNA é introduzido na bactérias por eletroporação.
YAC(yeast artificial cromossome)
Contêm todos os elementos para manter o cromossoma eucariótico no núcleo da
levedura : uma origem, duas marcas de selecção(X, e Y) um centromere (CEN), two
telomeres (TEL)
Don’t Forget: é um processo artificial.
Margarida Rodrigues
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Apontamentos de Biotecnlogia Alimentar II : manipulação DNA
Usas o gene URA3 como marca de selecção : URA3 encodes Orotidine 5'-phosphate
decarboxylase (ODCase), which is an enzyme that catalyzes one reaction in the
synthesis of pyrimidine ribonucleotides (a component of RNA). O hospedeiro tem uma
mutação neste gene e não sintetiza o uracilo, tem de ser implementado, quando
transfiro o YAC que leva o gene URA3 o organism deixa de ter q ser implementado com
uracilo e passa a ser Ura+ !!!!!!!!!
3. Ligação DNA estrangeiro ao vector
Usamos a ligase para ligar o fragmento estrangeiro ao vector, liga um pedaço de DNA digerido
por uma dada endonuclease e ligamos ao vector que também foi digerido pela mesma
endonuclease. A DNA ligase catalisa a formação de novas ligações fosfodiester numa reacção
em que usa ATP como cofactor( também pode usar NAD+) (ligações covalentes) .As sticky ends
facilitam este processo.
T4 DNA ligase: produzida pelo bacteriófago T4 liga quer extremidades coesivas, quer
cegas.
DNA ligase E.Coli: liga apenas extremidades coesivas
O DNA a ser inserido deve ser cortado com as mesmas duas enzimas, para ter extremidades
compatíveis com o vetor.
4. Transferência do DNAr para célula hospedeira
Amplificação
Transformação: as células e os plasmideos são incubados juntos numa temperatura
0ºC numa solução de cloreto de cálcio, e depois submetidas a um choque térmico até
37/43ºC , nestas condições algumas bactérias acolhem o plasmídeo. Há transferência
de informação genética a partir de moléculas de DNA livres. Nem todas as bactérias
são consideradas competentes de incorporar o DNA livre no seu interior.
Neste método, recorre-se a uma alternativa: aumenta-se a permeabilidade celular por pulso
eléctrico- Eletrotransformação
A transferência torna-se cada vez mais difícil se for usar um plasmídeo grande !!!!
Transdução: transferência de genes de um hospedeiro para uma outra célula, mediada
por um vírus. Ao fim do fago infectar, se entrar em ciclo lítico vai se proliferar dentro
da célula levando à lise celular. E espalha os fagos contendo a partícula dadora.
Conjugação: processo de transferência de genes de uma célula proc. Para outra, por
um mecanismo que envolve o contacto físico entre os participantes.
Margarida Rodrigues
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Apontamentos de Biotecnlogia Alimentar II : manipulação DNA
I. Plasmídeo conjugativo (P) : P+ dadora, e P- receptora
Útil, mais à frente, para a técnica de
Northern Blot
Margarida Rodrigues
Ao fim da emissão do pilis sexual, e haver transferência para a célula
receptora de uma cadeia simples de P , ambas as células se tornam P :
potencialmente dadoras.
Metodos alternativas para inserir rDNA na célula ( eucarióticas)
Transfeção : introdução de material genético para a célula hospedeira
Eletroporação /protoplastos: para tratar uma célula vegetal tenho que passar a parede
celular, e penetrar na membrana : trabalhar no protoplasto.
Micro-injeção: introdução do material DNA dentro do núcleo da célula hospedeira,
usando micro-pipetas…
Biobalística: micropartículas recobertas c o gene q se pretende difundir. Há um gás
comprimido, é solto e projecta as micropipetas a altas velocidades que penetram na
célula. Pode ter ou não sucesso
5. Seleção das células hospedeiras que contêm o DNA r
Foste vendo ao longo.
*Purificar DNA, quebro o compartimento (detergentes…), desproteinização, separação entre
os ácidos nucleicos, medição absorbância UV (260 vs 280). P fazer o DNA precipitar podes usar
álcool
*como isolar mRNA fazendo uma cromo. Em coluna em que usas cromatografia de
afinidade,usas uma matriz de celulose com desoxitimidinas covalentemente ligadas, o que vai
acontecer é que quando colocas a solução de RNA o mRNA c a sua ponta 3’ poli-adenilada vai
interagir com as timidinas , colocas ainda NaCl para mascarar o efeito das cargas e intensificar
o processo da ligação do mRNA à matriz. Voltas a eluir com NaCl e desprende-se o r RNA t
RNA. Para separar o mRNA da matriz, elui-se com água: a agua vai formar pontes de
hidrogénio mais fortes. O mRNA solta-se.
Detetar e quantificar fragmentos de DNA ou RNA
*hibridação de Southern blot
Quero saber se o DNA em estudo tem uma sequencia especifica X, vou hibridá-lo com outros
fragmentos complementares a essa sequência, e esperar que ocorra ligação.
Digestão do DNA com enzimas de restrinção
Fragmentos separados por tamanho numa eletroforese
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Apontamentos de Biotecnlogia Alimentar II : manipulação DNA
Uso na electroforese gel de agarose , como é Termo reversível não posso desnaturar a
cadeia com base em aumento de T ( sabendo que tenho que desnaturar a cadeia, pois
se pretendo hibridar assim o obriga) uso uma técnica de tratamento alcalino, adiciono
OH aumento o pH e quebro pontes de hidrogénio
Passagem para uma membrane de nylon : the membrane is immersed in a solution
containing a radioactive DNA probe. O probe é complementar à sequência que ando à
procura, se ela existe na amostra ligar-se-á ao probe.
Northern Blot ‘’o se existe e quanto ? ‘’
Estudo RNAm, quero saber se um dado gene é muito ou pouco expresso, não há melhor
maneira de o fazer a não ser estudar o RNAm. O RNAm produzido há de ser complementar
ao gene em questão!! Então aqui estudo o RNAm e depois coloco-o juntamente com o
probe , se houver ligação quer dizer que no RNAm está a sequencia génica expressa.
o O processo de desnaturação também é levado a cabo, para hibridizações perfeitas.
o Separo os mRNA na electroforese em função de tamanho.
o Hibridização com probes, numa membrana de nylon
o Pretendo quantificar nives de transcrição: consigo c isto estimar a quantidade e o
tamanho do transcrito ( analise das bandas)
Se quero clonar um gene de uma célula eucariótica tenho que usar o seu mRNA já processado,
porque ao inserir num vetor um típico DNA a cel. Proc. Não consegue processor o mRNA e o
processo não tinha efeito. O que acontece então é a partir do mRNA processado obter DNA, ao
qual chamo de DNA complementar.
Purifico o RNA, fazendo o processo que já vimos: cromatografia de coluna por afinidade.
Usa-se uma transcriptase reversa para produzir DNA a partir de mRNA .
Como primer, sei que o RNA processado tem uma cauda adenilada, logo faz sentido que o
primer seja complementar a cauda poly (dT) adiciona-se transcriptase reversa, e inicia-se a
síntese de uma cadeia de DNAc obtem-se um ‘’hairspin?’’ uma redonda lá no fundo em 3’,
chama-se Klenow fragment e é o primer para a outra cadeia de cDNA . Basta DNA poli para
sintetizar esta última cadeia. No final o Klenow fragment é removido por nucleases.
Margarida Rodrigues
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Apontamentos de Biotecnlogia Alimentar II : manipulação DNA
PCR
Técnica em cadeia da polimerase, a ideia é fazer em poucas horas muitas cópias de um gene.
o Sequência de DNA p amplificar
o Primers adequados
o DNApolimerase termoestável
o Nucléotidos disponíveis
A partir da dupla cadeia, é separada por aquecimento. Adição de primers que se ligam à
zona a amplificar. Novo DNA é sintetizado por polimerização, usamos uma DNA poli- TaqI
que é estável a elevadas T, e não é desnaturada
Margarida Rodrigues