O documento discute vários tópicos sobre tecnologia do DNA recombinante, incluindo vetores como plasmídios e fagos lambda para clonagem de DNA, técnicas como PCR e Southern blot, e aplicações como mapeamento de genoma, produção de organismos transgênicos e diagnóstico pré-natal.

1. Tecnologia do DNA Recombinante & Aplicações

2. Identificação Genética - Fingerprinting

3. Complementaridade de Cadeias Tm Estringência

4. Clonagem Inserto

5. Amplicação do Clone em Bactéria

7. Utilizações do DNA Clonado

8. Utilizações do DNA Clonado

9. Retrotranscrição

10. Vetor & Inserto

11. Enzimas de Restrição

12. 4 bases

13. Corte & Ligação

14. Vetores Plasmídios Pequenos fragmentos circulares de DNA Replicação independente do DNA bacteriano Presença ou ausência dentro da bactéria Quantidade variável Resistência a drogas e outras características Bom método para amplificar o DNA clonado Fragmentos clonáveis até 20kb Fragmentos grandes são perdidos Plasmídios clássicos pBR322 pUC18

15. Modos de introdução de DNA recombinante em bactérias.

16. Vetores: pBR322 & pUC18 Seleção de vetores com clone polylinker

17. Vetores Fago Lambda Acomoda um total de 45-50kb Inserto de cerca de 15kb DNA automaticamente embalado em partícula infectante Fagos Unifilamentares DNA unifilamentar é convertido dentro da bactéria para replicação Facilidade para sequênciamento dos clones

18. Fago Lambda

19. Detecção de Gene de Interesse – Plaqueamento de Fagos

20. Uso de sondas de DNA e RNA para identificar o clone portador do gene de interesse.

21. Vetores Cosmídios Híbridos de fago e plasmídio Replicação em bactérias ou embalados como fagos Sequências virais eliminadas permitindo introdução de DNA exógeno de até 45kb entre os sítios cos Partícula viral penetra na bactéria, mas não tem potencial replicativo

22. Vetores de Grande Porte BAC: Bacterial Artificial Chromosome Cromossomo Artificial de Bactéria Inserto médio de 150kb Inserto máximo de 400kb Se replica como um plasmídio dentro da bactéria Utilizado amplamento pelo Projeto Genoma

23. Vetores de Grande Porte Cromossomo Artificial de Levedura Se comporta como um pequeno cromossomo que se replica dentro do eucarionte e carrega seu DNA de interesse Tamanho médio do inserto: 500Kb Tamanho máximo do inserto: 1Mb Contém todas os elementos necessários para se replicar e segregar dentro da levedura

24. Cromossomo Artificial de Levedura

25. Introdução de DNA Exógeno DNA Shotgun

26. Polimerase Chain Reaction - PCR

36. Gel de Agarose

37. Southern e Northern Blots

44. Mapas de Restrição - RFLP

46. Sequenciamento Capilar - Eletroferograma

51. Manipulação em Cultura de Células e Semeadura

53. Produção de Camundongos Transgênicos

57. Transgênico para Hormônio do Crescimento

61. Diagnóstico Pré-Natal