Trabalho sobre a técnica direta de contagem rápida de micro-organismos.

1. Técnica fluorogênica
Os testes baseados na adição de MUG (4-metil-umbeliferil-β-D-glicuronideo)
a um caldo de cultura para detecção de Escherichia coli., são exemplos desta
técnica. A enzima β-glicuronidase produzida pela grande maioria das cepas
desse microrganismo transforma o MUG em umbeliferona, que é fluorescente
quando observado sob luz ultravioleta de onda longa. A observação do número
de tubos turvos, com gás e fluorescentes após 24 ou 48h, permite o cálculo do
número mais provável de E. coli por grama (ou mL) do produto (MACHADO,
2007).
A constatação da presença da Escherichia coli é obtida através da ação da
enzima β-glucoronidase, que é caracteristicamente produzida por cepas de
Escherichia coli, sobre o substrato 4-metilumbeliferil-β-D-glucoronídeo (MUG);
quando o MUG é degradado, o produto resultante 4-metilumbeliferona (Figura 1)
apresenta fluorescência azul sob luz ultravioleta (360nm) (Figura 2) (COVERT et
al., 1989 ; SILVA et al., 2000). Nesta técnica, a presença de coliformes totais é
confirmada pela alteração da coloração do meio, de incolor para amarelo (Figura
2).
Figura 1 – Esquema da reação enzimática do substrato MUG (IDEXX, 2005)

2. Figura 2 – Mudança de coloração na reação enzimática ONPG/ MUG (IDEXX,
2005)
Incolor = negativo (ausência coliforme)
Amarelos = coliformes totais
Fluorescência = E. coli
Este método oferece como vantagens:
- Rapidez e facilidade de usar;
- Identificação direta e enumeração de Escherichia coli ou Enterococos em 36
horas (em comparação com 3 ou 4 dias usando métodos tradicionais);
- Dispensa a preparação de meio de cultura;
- Emprega microplacas estéreis e prontas para uso;
- Padronização do preparo, incubação e técnica de leitura para E. coli e
Enterococcus;
- Detecção da atividade de uma enzima específica de cada bactéria por
microplaca;
- Resultados confiáveis;
- Economia de tempo e material.

3. A Fig. 3 representa ilustrativamente um microscópio fluorogênico, usado nesta
técnica para enumerar as células viáveis e não viáveis.
Figura 3 – Microscópio fluorogênico, usado para contagem de microrganismos.
Fonte: Google imagens (Epifluorescência direta), 2008.
BIBLIOGRAFIA
GOLDBECK, Júlia C. Métodos rápidos de análise microbiológica. 2008.
Trabalho acadêmico. Bacharelado em Química de Alimentos. Universidade
Federal de Pelotas.
GEGHI, Simone de Queiróz. Avaliação da Eficiência dos Métodos Rápidos
Usados Para a Detecção de Coliformes Fecais em Amostras de Água, em
Comparação com a Técnica de Fermentação em Tubos Múltiplos. 2005. 36 f.
Trabalho Acadêmico. Bacharelado em Ciências Farmacêuticas. Universidade
Estadual Paulista Júlio Mesquita Filho – UNESP – Campus Araraquara.