Este documento descreve protocolos para identificar aminoácidos e proteínas através de reações químicas específicas. A reação de Biureto é usada para detectar ligações peptídicas através da formação de uma cor violeta ou rosa. A reação de ninhidrina produz uma cor púrpura ou amarela ao reagir com grupos amina livres. A reação xantoproteica gera compostos coloridos ao reagir proteínas contendo grupos fenil com ácido nítrico.

1. UFMS
LABORATÓRIO DE BIOQUÍMICA
AULA PRÁRICA
REAÇÕES QUALITATIVAS PARA AMINOÁCIDOS E PROTEÍNAS
Profa. Dra. Giovana Cristina Giannesi
Objetivo: Identificar e caracterizar diferentes aminoácidos e proteínas através de reações
específicas.
1 – REAÇÃO COM BIURETO
Fundamento teórico: O Biureto é um reagente analítico, composto de Hidróxido de
Sódio (NaOH 2,5N) e sulfato de cobre 1% (CuSO4).
A reação do Biureto é detectar a presença de ligações peptídicas, dando positiva
para proteínas e peptídeos com três ou mais resíduos de aminoácidos. A reação é
também positiva para substâncias que contêm 2 carbonilas (-CONH2) ligadas
diretamente ou através de um único átomo de carbono ou nitrogênio.
Os compostos com duas ou mais ligações peptídicas atingem uma coloração
violeta quando submetidos a uma solução diluída de sulfato de cobre em meio alcalino.
A intensidade da cor varia com a concentração de proteínas. Nesse exercício, o tubo de
ensaio com água destilada foi utilizado como tubo controle, uma vez que a água não
contém proteínas.
Uma ligação peptídica ocorre entre duas moléculas quando o
grupo carboxilo de uma molécula reage com o grupo amina de outra molécula,
liberando uma molécula de água ( H2O ). Isto é uma reação de síntese
por desidratação que ocorre entre moléculas de aminoácidos.
Dependendo da complexidade da proteína ou do peptídeo em questão, a cor do
produto de reação a presença do Biureto varia substancialmente: proteínas dão
coloração violeta, peptídeos dão coloração rosa.
Para que a reação ao Biureto seja positiva há necessidade da presença de pelo
menos duas ligações peptídicas na molécula, portanto, aminoácidos e dipeptídeos não
apresentam reação positiva ao Biureto.
O tubo contendo água destilada no qual não ocorreu reação (resultado
negativo), serve de referência para os tubos restantes, concluindo-se que os tubos cuja
reação foi semelhante à do biureto com a água destilada, e teve resultado final negativo.
Por outro lado, nos tubos que ocorreram reações diferentes à da água destilada
quando se adicionou biureto, ou seja, apresentara uma coloração violeta ou bem mais
escura que o azul pálido apresentado na reação com a água destilada, considerou-se
resultado final positivo.
Objetivo : Esta prática teve como objetivos detectar a presença de ligações
peptídicas.
Reativos: Foram utilizados:
- Biureto (1mL de NaOH 2,5 + 1mL de Sulfato de Cobre);
- água destilada;
- leite;
- clara de ovo;
- glicina ;
- triptofano e
- albumina.

2. Técnica : (5 tubos)
 Tubo 1: 1mL de água destilada;
 Tubo 2: 1mL de glicína 1%;
 Tubo 3: 1mL de leite;
 Tubo 4: 1mL de clara de ovo;
 Tubo 5: 1mL de albumina 1%.
Foi adicionado em cada tubo, aproximadamente 1mL do reagente de biureto,
agitando-se continuamente.
Resultados:
Tubo 1: Resultado NEGATIVO  Coloração azul muito pálida.  A água não
tem componentes de proteínas em sua composição.
Tubo 2: Resultado NEGATIVO  Coloração azul um pouco mais escura que
no tubo 1  Glicina é um aminoácido portanto, sem ligações peptídicas.
Tubo 3: Resultado POSITIVO  Coloração púrpura.  O leite apresenta
várias proteínas em sua composição.
Tubo 4: Resultado POSITIVO  Coloração púrpura  A Clara de ovo
contém proteínas (albumina, inclusive) que apresentam ligações peptídicas.
Tubo 5: Resultado POSITIVO  Coloração púrpura  A albumina é uma
proteína cujos aminoácidos formam uma cadeia por ligações peptídicas.
2 – REAÇÃO DE NINHIDRINA
Fundamento teórico: A ninhidrina (2,2-diidroxi-hidrindeno-1,3-diona) é um poderoso
agente oxidante que reage com grupo de amino livres de aminoácidos, peptídeos e
proteínas desde que o pH da solução esteja entre 4 e 8. A reação dos aminoácidos com a
ninhidrina origina um composto de cor púrpura de Ruherman no geral, e amarelo para a
prolina, não apresentando sempre a mesma intensidade de coloração.
A ninhidrina é comumente usada para detectar impressões digitais, já que, graças
a sua reação com os aminogrupos terminais das moléculas de lisina incorporadas nas
proteínas ou peptídeos, é suficientemente sensível para revelar resíduos de pele.
Objetivo : Esta prática teve como objetivos caracterizar a presença de aminas livres.
Reativos: Foram utilizados:
- Ninhidrina;
- leite;
- clara de ovo diluída;
- albumina 1%;
- prolina 1%;
- glicina 1%;
- fenilanina 1%.

3. Técnica : (6 tubos) Em cada tubo de ensaio foi pipetado 1mL da solução de ninhidrina e
adicionado 1mL de cada um dos reagentes descritos abaixo:
 Tubo 1: 1mL de água destilada;
 Tubo 2: 1mL de leite;
 Tubo 3: 1mL de clara de ovo diluída;
 Tubo 4: 1mL de prolina 1%;
 Tubo 5: 1mL de glicina 1%;
 Tubo 6: 1mL de albumina 1%.
Foi adicionado em cada tubo, aproximadamente 1mL do reagente de nihidrina,
agitando-se continuamente e fervendo em seguida por alguns minutos em
banho-maria, até o aparecimento da cor.
Resultados:
Tubo 1: Resultado NEGATIVO  A água não apresenta aminoácidos em sua
composição.
Tubo 2: Resultado POSITIVO  Coloração roxo  O leite apresenta aminas
livres em sua composição proteica. Aquecendo-se uma proteína e depois adicionando-se
a nihidrina forma-se uma coloração azul por causa da reação desse reagente com os
aminoácidos presentes na proteína.
Tubo 3: Resultado POSITIVO  Coloração liláz.  Como o leite, a clara de
ovo apresenta várias proteínas em sua composição, inclusive albumina.
Tubo 4: Resultado POSITIVO  Coloração amarela  A prolina é um
dos aminoácidos codificados pelo código genético, sendo portanto um dos componentes
das proteínas dos seres vivos. Diferencia-se dos demais aminoácidos devido ao fato de
possuir uma estrutura quimicamente coesa e rígida, sendo mesmo o aminoácido mais
rígido dos vinte que são codificados geneticamente. A sua estrutura anelar confere-lhe
ainda a classificação de iminoácido, já que a sua estrutura resulta da ligação do terminal
alfa-amina (NH2) à cadeia variável alifática e forma um produto amarelo na reação com
a ninhidrina.
Tubo 5: Resultado POSITIVO  Coloração púrpura  A Glicina é um
aminoácido portanto apresenta aminas livres.
Tubo 6: Resultado POSITIVO  Coloração amarelo escuro  No caso da
albumina, que é uma proteína hidrossolúvel do tipo globular cuja função é armazenar
nutrientes, não reagiu instantaneamente com a ninhidrina. Sendo a albumina uma
proteína, os aminoácidos que a constituem estão unidos por ligações peptídicas e não no
estado livre motivo pelo qual não reagiu imediatamente com a ninhidrina, que esta
apenas detecta os aminoácidos livres. No entanto, depois de aquecida, a albumina reagiu
com a ninhidrina porque suas ligações peptídicas foram quebradas, devido ao aumento
da vibração das partículas em consequência do aumento da temperatura, alterando assim
a conformação desta proteína, expondo os aminoácidos livres de sua composição à
ninhidrina.
3 – REAÇÃO XANTOPROTEICA

4. Fundamento teórico: As proteínas que possuem grupamento fenil (-C6H5); reagem
com HNO3 formando compostos fortemente coloridos.
Objetivo : Esta prática teve como objetivos identificar aminoácidos com grupo
aromático (cadeias laterai).
Bibliografia:
- http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S0100-
46702002000200006&script=sci_abstract&tlng=pt
- http://www.nupel.uem.br/pasteurizacao.pdf