O documento descreve três reações para caracterizar proteínas e aminoácidos: (1) Reação de Biureto identifica proteínas através da formação de um composto violeta com íons de cobre; (2) Reação Xantoproteica identifica aminoácidos fenilalanina, triptofano e tirosina através da formação de um composto amarelo; (3) Reação de Millon identifica tirosina através da formação de um composto avermelhado com mercúrio. Os procedimentos práticos descrevem testar ess

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2. Caracterização de
Amininoácidos e Preteínas
Universidade Federal do Maranhão

3. Introdução
As proteínas são macromoléculas que fornecem peptídeos de
peso molecular variável por hidrólise parcial, e quase sempre
L-aminoácidos por hidrólise total.

4. Introdução
Quase toodas as proteínas existentes nos seres vivos são
constituídas de combinações de apenas 20 L-aminoácidos.
Resíduos de aminoácidos unidos por ligações peptídicas são
capazes da formação de oligopeptídeos (nº<30), polipeptídeos
(30<nº<50) e proteínas (nº>50).
Cada aminoácido possui um N-terminal ou amino-terminal e
um C-terminal ou carbóxi-terminal, diferindo entre si pela
estrutura da cadeia lateral ou grupo R.

5. Introdução
Apolares ou
Hidrofóbicos
Glicina (Gly)
Alanina (Ala)
Valina (Val)
Leucina (Leu)
Isoleucina (Ile)
Metionina (Met)
Prolina (Pro)
Fenilalanina (Phe)
Triptofano (Trp)

6. Introdução
Polares ou
Hidrofílicos
Polares sem
carga
Serina (Ser)
Tirosina (Tyr)
Cistína (Cys)
Asparagina (Asn)
Glutamina (Gln)
Treonina (Tre)
Polares ou
Hidrofílicos Polares com
carga negativa
(ácidos)
Aspartato (Asp)
Glutamato (Glu)
Polares ou
Hidrofílicos
Polares com
carga positiva
(básicos)
Lisina (Lys)
Arginina (Arg)
Histidina (His)

7. Introdução
As proteínas podem ser caracterizadas e diferenciadas por
variações em suas estruturas - determinadasm entre outros,
por tipos de aminoácidos envolvidos e conformação
molecular - e por condições ambientais, como afinidade por
certos compostos, temperatura, pH e força iônica.

8. Reação de Biureto
A reação de biureto serve para a identificação de
susbtâncias que contenham duas carbonilas ligadas
diretamente ou através de um átomo de nitrogênio ou
carbono; de peptídeos que contenham pelo menos duas
ligações peptídicas; e de proteínas em geral.
Reagente de biureto: volumes iguais de NaOH a 12M e
solução de CuSO4 a 0,5% gota a gota.
❖ Fundamento teórico: quando a proteína é colocada na
presença de reagente de biureto, obtém-se um composto de
coloração violeta pela interação dos átomos de nitrogênio
dos resíduos de aminoácidos de proteínas com íons Cu2+
disponibilizados pelo CuSO4 do reagente de biureto.

9. Reação de Biureto
∼ 180ºC
+ Reagente de Biureto
Similaridade
estrutural
Interação biureto-íons Cu2+ Interação proteína-íons Cu2+

10. Reação de Biureto
A cor do produto depende de reação na presença do reagente
de biureto varia substancialmente, dependendo da
complexidade da proteína:
Proteínas: coloração violeta;
Peptídeos: coloração rósea;
Gelatina: coloração azul.

11. Reação Xantoproteica
A reação xantoproteica serve para a identificação dos
aminoácidos fenilalanina (Phe), triptofano (Trp) e
tirosina (Tyr).
Hidróxido de sódio a 2N (ou 2mEq/mL)
Ácido nítrico concentrado
❖ Fundamento teórico: em meio alcalino, o ácido nítrico reage
com os aneis benzênicos dos aminoácidos fenilalanina,
triptofano e tirosina, formando nitrocompostos amarelos.

12. Reação Xantoproteica
Nitrocomposto de
coloração amarelada

13. Reação de Millon
A reação de Millon serve para a identificação do
aminoácido tirosina (Tyr).
Reagente de Millon: ácido nítrico e mercúrio
❖ Fundamento teórico: mediante aquecimento, o grupo
hidroxifenil da tirosina reage com o mercúrio fornecido pelo
reagente de Millon, com subsequente formação de fenolato
de mercúrio, de coloração avermelhada.

14. Procedimentos Práticos
Reação de Biureto
❖ Soluções a serem testadas: água destilada e ovalbumina a 10%
1mL de solução
a ser testada
2mL de reagente
de biureto

15. Procedimentos Práticos
Reação de Biureto
❖ No tubo de ensaio com ovalbumina espera-se a formação de
coloração violeta.
❖ No tubo de ensaio com água destilada espera-se a não
mudança de cor.
A reação de biureto deverá ser positiva para a solução
de ovalbumina, proteína encontrada na clara do ovo;
em contrapartida, não deve haver reação com água
destilada (controle negativo).

16. Procedimentos Práticos
Reação Xantoproteica
1mL de solução
de ovalbumina a 10%
10 gotas de
ácido nítrico
concentrado
!
4mL de solução de
hidróxido de sódio a 2N

17. Procedimentos Práticos
Reação Xantoproteica
❖ Espera-se a formação de composto de coloração amarela no
tubo de ensaio analisado.
❖ A reação xantoproteica deverá ser positiva para a
solução de ovalbumina, proteína que apresenta
resíduos dos aminoácidos fenilalanina (Phe),
triptofano (Trp) e tirosina (Tyr).

18. Procedimentos Práticos
Reação de Millon
5 gotas do
reagente de Millon
1mL de solução de
ovalbumina a 10%

19. Procedimentos Práticos
Reação de Millon
❖ Espera-se a formação de composto de coloração
avermelhada ou arroxeada no tubo de ensaio analisado.
❖ A reação de Millon deverá ser positiva para a solução
de ovalbumina, proteína que apresenta resíduos do
aminoácido tirosina (Tyr).

20. Referências
HIRANO, ZMB et al. Bioquímica - Manual Prático. 1 ed.
Blumenau: Edifurb, 2008.
DOS SANTOS, APSA et al. Bioquímica Prática. Disponível
em: <http://www.repositorio.ufma.br:8080/jspui/handle/
1/445>. Acesso em: 3 set 2013.