Este documento descreve um estudo sobre a etiologia de um surto de síndrome febril neurológica em bovinos na Ilha do Marajó, Pará. Foram coletadas amostras de sangue de 24 bovinos e realizada PCR para detectar Babesia bovis e Babesia bigemina. Os resultados mostraram que 14 amostras eram positivas para Babesia, sendo 12 para B. bovis e 2 para B. bigemina, indicando altas taxas de infecção nesta região.

1. UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ
INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
PROGARMA DE PÓS-GRADUAÇÃO LATO SENSU
ESPECIALIZAÇÃO EM MICROBIOLOGIA
ETIOLOGIA DA BABESIOSE BOVINA NA ILHA DO MARAJÓ, PARÁ
Discentes
Kácio Lenon Silva Braga
Maurício Oliveira Coelho Marques
Thais Nascimento Kimmemgs
Orientador
Prof. Dr. Evonnildo Costa Gonçalves
BELÉM
2016

2. INTRODUÇÃO
• Hemoparasitose – Protozoários do filo Protozoa, subfilo Apicomplexa
(GUGLIELMONE, 1995; SEQUEIRA & AMARANTE, 2001; BROWMAN, 2006).
• Em todo mundo, sete espécies são capazes de infectar bovinos
(UILENBERG, 2006).
– Babesia bigemina e Babesia bovis
• A transmissão da doença no Brasil é dada pelo carrapato da espécie
Boophilus microplus (FARIAS, 2007).
Boophilus microplus
Fonte: http://www.uniprot.org/taxonomy/6941

3. INTRODUÇÃO
- Anemia hemolítica intravascular;
- Febre;
- Hemoglobinemia;
- Hemoglobinúria;
- Morte do hospedeiro.
(EVERITT et al., 1986).
PRINCIPAIS SINTOMAS
Fonte: http://www.revistaveterinaria.com.br/2012/04/24/

4. INTRODUÇÃO
• Babesiose + Anaplasmose (Anaplasma marginale)
– Tristeza Parasitária Bovina (TPB)
• Distribuição em áreas de ocorrência:
– Áreas livres;
– Áreas de estabilidade enzoótica;
– Áreas de instabilidade enzoótica (GONÇALVES, 2000).

5. INTRODUÇÃO
• Babesiose cerebral – B. bovis
– Incoordenação motora;
– Hiperexcitabilidade;
– Cegueira;
– Tremores musculares
(ANTONIASSI et al., 2009).
• Brasil - babesiose bovina bezerros
– Queda da imunidade ao nascer (MADRUGA et al., 1984).
– Infecções assintomátias – reinfecções (GONÇALVEZ, 2000).
Opistótono
Fonte: http://www.pvb.com.br/pdf_artigos

6. INTRODUÇÃO
• Estudos apontam o Brasil como país enzoótico;
• Altas taxas de transmissão dos agentes;
– Região Sul e Sertão Nordestino;
(GONZALES, 1995; LIMA et al., 1999; SANTOS et al., 2001).
• Região Norte
– Clima altamente favorável;
– Poucos estudos.

7. OBJETIVO
• Assim, considerando, a carência de estudos, em
especial no Estado do Pará, este trabalho objetivou
identificar a etiologia de um surto de síndrome
febril neurológica, característico de babesiose, em
bovinos de uma fazenda da Ilha do Marajó, Pará.

8. MATERIAIS E MÉTODOS
Amostragem
• 24 animais da raça Nelore;
– Maio de 2015.
– Fazenda Menino Deus, Ilha do Marajó, Pará.
• Rebanho de aproximadamente 3.100 bovinos
– 80% Bos indicus e 20% Bos taurus.
– 100 vieram a óbito.

9. MATERIAIS E MÉTODOS
• 3 mL de sangue;
– Auxílio de tubos vacutainer.
– Ácido etilenodiaminotetracético - E.D.T.A.
• Laboratório de Tecnologia Biomolecular -
LTB/UFPA;
– Sambrook et al. (1989).

10. Diagnóstico Molecular
• Detecção de Babesia;
– Nested PCR
– ApiF e ApiR (CACCIÒ et al., 2002)
– BabF (MARTIN et al., 2006) e Babesia common (KORDICK et al., 1999)
• Realizadas em volumes de 25 µL;
• 10-20 ng DNA genômico; 2,5 mM MgCl2; 125 mM de
cada dNTPs; 10 mM Tris-HCl; 50 mM KCl; 5 µM de cada
iniciador (ApiF e ApiR) e 1 U Taq DNA polimerase.
• Segunda reação:
– 1µL do produto da primeira reação e 5 µM de
cada iniciador BabF e Babesia common.

11. • Termociclagem;
– 35 ciclos de 1 minuto a 94oC, 1 minuto a 58ºC e 1
minuto a 72ºC, precedida por 5 minutos a 94ºC e
seguido de 5 minutos a 72ºC.
– T. de associação dos iniciadores: 65ºC.
• Controle positivo;
– Babesia vogeli (LTB)
• Controle negativo
– água bidestilada estéril
• Produtos visualizados por eletroforese
– gel de agarose 1% em Tris-Acetato-EDTA (TAE)
– Reagente fluorescente DNA - GelRed™
– transiluminador UV

12. • Amplicons
– BabF e Babesia common
– 3500XL Genetic Analyzer (Applied Biosystems)
• BioEdit (HALL, 1999)
– Alinhar sequências direta e reversa.
• National Center for Biotechnology Information
(NCBI).
• Sensibilidades dos protocolos de PCR simples
e nested PCR
– McNemar
– BioEstat 5.3 software (AYRES et al., 2007)

13. • Todas as amostras de DNA mostraram graus de pureza e integridade
satisfatórios para a realização dos testes. Assim, das 24 amostras
analisadas, 14 foram consideradas positivas, dada a produção de
amplicons de ~350 pares de bases na segunda reação da nested PCR.
As sequências obtidas resultaram em dois haplótipos distintos, sendo
que duas sequências apresentaram o haplótipo com 322
nucleotídeos, enquanto 12 sequências apresentaram o haplótipo que
contém 339 nucleotídeos;
• NCBI: < sequência = B. bovis;
> sequência = B. bigemina;
• PCR simples x nested PCR.
RESULTADOS E DISCUSSÃO

14. Prevalência (%) Método Local Referência
B. bovis B. bigemina
19,04 12,87 RIFI MS Madruga et al. (1983)
82,53 79,09 ELISA MG Patarroyo et al. (1987)
- 87,90 ELISA PE Alves et al. (1987)
- 97,50 ELISA GO Linhares et al. (1992)
88,00 94,00 RIFI SP Barci et al. (1994)
41,01 4,09 Análise de dados RS Almeida et al. (2006)
7,20 0,89 nested PCR AC Embrapa (2007)
9,00 3,09 nested PCR RO Embrapa (2007)
15,00 16,00 PCR PA Silva et al. (2013)
24,87 20,75 ELISA PA Silva et al. (2013)
Tabela 1 – Prevalência de Babesia bovis e Babesia bigemina no território brasileiro.
De acordo com a população estudada e o método de detecção utilizado, a prevalência
de B. bovis e B. bigemina, no Brasil, é amplamente variável. Esses dados sugerem que a
prevalência no norte brasileiro seja menor que aquela das regiões mais ao sul

15. CONCLUSÃO
• Apesar do Estado do Pará possuir estabilidade enzoótica,
ainda há a precariedade de estudos na área. Os
resultados deste trabalho apontam altas taxas de
hospedeiros infectados por Babesia bovis e Babesia
bigemina.