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1. 1
Prof. Marcos R. dos Santos
CENTRO UNIVERSITÁRIO FRANCISCANO – UNIFRA
CURSO DE FARMÁCIA
CONTROLE BIOLÓGICO DA QUALIDADE DE MEDICAMENTOS
AA necessidadenecessidade dede confirmaçãoconfirmação dada IDENTIDADE,IDENTIDADE,
PUREZA,PUREZA, POTÊNCIA,POTÊNCIA, INOCUIDADEINOCUIDADE ee EFICÁCIAEFICÁCIA
terapêuticaterapêutica dede medicamentosmedicamentos envolveenvolve váriosvários aspectosaspectos
analíticos,analíticos, principalmenteprincipalmente quandoquando oo medicamentomedicamento nãonão
consisteconsiste dede substânciasubstância queque possapossa serser completamentecompletamente
caracterizadacaracterizada pelaspelas propriedadespropriedades químicasquímicas ee físicofísico--
químicasquímicas..
DiferemDiferem dasdas demaisdemais drogasdrogas dede baixobaixo pesopeso molecularmolecular (convencionais)(convencionais)
porpor apresentaremapresentarem::
-- EstruturaEstrutura geralmentegeralmente complexacomplexa
-- DerivadosDerivados dede organismosorganismos vivosvivos (hormônios,peptídeos,(hormônios,peptídeos, proteínas)proteínas)
-- RequeremRequerem procedimentosprocedimentos especiaisespeciais dede produçãoprodução ee controlecontrole dede
qualidadequalidade devidodevido::
-- àà naturezanatureza biológicabiológica dodo materialmaterial dede partidapartida
-- àà basesbases biológicasbiológicas dodo processoprocesso dede produçãoprodução
-- necessidadenecessidade dede MétodosMétodos BiológicosBiológicos parapara caracterizaçãocaracterização dosdos
loteslotes..
São procedimentos destinados a avaliar aSão procedimentos destinados a avaliar a potênciapotência dede
princípios ativosprincípios ativos contidos nascontidos nas matériasmatérias--primasprimas ee
preparaçõespreparações farmacopéicasfarmacopéicas..
AtravésAtravés dodo usouso dede reagentesreagentes biológicosbiológicos taistais comocomo::
-- MicroMicro--organismosorganismos;;
-- animaisanimais;;
-- fluidosfluidos ee órgãosórgãos isoladosisolados dede animaisanimais..

2. 2
UtilizadosUtilizados parapara detectardetectar ee medirmedir aa concentraçãoconcentração dede
substâncias,substâncias, observandoobservando seusseus efeitosefeitos farmacológicosfarmacológicos
sobresobre animaisanimais vivos,vivos, tecidostecidos ouou célulascélulas..
EmEm geralgeral sãosão maismais complexoscomplexos ee menosmenos
precisosprecisos dodo queque osos ensaiosensaios físicofísico--químicosquímicos..
Uma importante característica dos reativos biológicos é aUma importante característica dos reativos biológicos é a
variabilidadevariabilidade enquanto os reativos físicoenquanto os reativos físico--químicos podemquímicos podem
ser definidos e padronizados para fornecerem resultadosser definidos e padronizados para fornecerem resultados
“idênticos” em todos os laboratórios.“idênticos” em todos os laboratórios.
DevidoDevido aa estaesta variabilidadevariabilidade tornatorna--sese imprescindívelimprescindível::
1)1) OO empregoemprego dede padrõespadrões dede referênciareferência adequadosadequados parapara sese obterobter
potênciaspotências relativasrelativas..
2)2) OO empregoemprego dede métodosmétodos estatísticosestatísticos parapara osos delineamentosdelineamentos
experimentaisexperimentais ee análiseanálise dosdos resultadosresultados..
Possibilita assegurar a compatibilidade e equivalência dePossibilita assegurar a compatibilidade e equivalência de
potência de lotes de produtos farmacêuticos produzidos porpotência de lotes de produtos farmacêuticos produzidos por
diferentes indústriasdiferentes indústrias NacionaisNacionais ee InternacionaisInternacionais..
Importante também para padronizar a avaliação de:Importante também para padronizar a avaliação de:
-- PurezaPureza
-- Impurezas relacionadas aoImpurezas relacionadas ao ProdutoProduto ee ProcessoProcesso..
Padrão Internacional é uma preparação para a qual foi definida umaPadrão Internacional é uma preparação para a qual foi definida uma
unidade Internacional (UI) de atividade, geralmente com base emunidade Internacional (UI) de atividade, geralmente com base em
estudo colaborativo internacional.estudo colaborativo internacional.
CompreendeCompreende::
a)a) SeleçãoSeleção dodo conjuntoconjunto dede dosesdoses dodo padrãopadrão (P)(P) ee dasdas
amostrasamostras dodo desconhecidodesconhecido (A)(A) queque serãoserão ensaiadasensaiadas;;
b)b) EspecificaçãoEspecificação dasdas unidadesunidades experimentaisexperimentais (animais(animais ,,
micromicro--organismos,organismos, antianti--soros,soros, sanguesangue etcetc....));;
c)c) RegrasRegras pelaspelas quaisquais sese distribuirãodistribuirão asas dosesdoses parapara asas
unidadesunidades experimentaisexperimentais;;
d)d) EspecificaçõesEspecificações dasdas medidasmedidas ouou outrosoutros registrosregistros queque
devamdevam serser procedidosprocedidos emem cadacada unidadeunidade experimentalexperimental..

3. 3
- Aleatório
Unidades experimentais homogêneas.
- Blocos ao acaso
Segrega fonte de variação.
- Quadrado latino
Duas fontes de variação.
- Cruzado
O mesmo bloco recebe os dois tratamentos.
É o procedimento matemático aplicado aos resultados
experimentais para estimar a potência da amostra e
avaliar a validade e precisão do ensaio.
Os métodos devem se relacionar com o delineamento
experimental utilizado.
ExpressarExpressar osos resultadosresultados dede avaliaçãoavaliação biológicabiológica comocomo
estimativaestimativa dada potênciapotência relativarelativa (impossível(impossível dede serser
calculadacalculada comcom certezacerteza –– variabilidadevariabilidade dosdos reativosreativos
biológicos)biológicos)..
DeveDeve serser acompanhadaacompanhada porpor limiteslimites dede confiançaconfiança
inferiorinferior ee superiorsuperior (Li,(Li, LS)LS)..
EstesEstes limiteslimites definemdefinem oo intervalointervalo dede modomodo queque sejaseja prépré--
determinadadeterminada aa probabilidadeprobabilidade (p)(p) dede aa verdadeiraverdadeira potênciapotência
relativarelativa (p)(p) estarestar forafora dodo intervalointervalo..
ProbabilidadeProbabilidade dede erroserros maismais utilizadasutilizadas::
pp == 55%% ee pp == 11%%,, tambémtambém expressasexpressas comocomo pp == 00,,0505 ee pp == 00,,0101..
AsAs monografiasmonografias estabelecemestabelecem especificaçõesespecificações parapara aa
amplitudeamplitude aceitávelaceitável dessesdesses intervalosintervalos emem relaçãorelação àà
potênciapotência estimadaestimada..
LevamLevam emem contaconta aa dificuldadedificuldade dosdos métodosmétodos ee aa
necessidadenecessidade práticaprática dede sese estimarestimar aa verdadeiraverdadeira potênciapotência
comcom determinadadeterminada precisãoprecisão..

4. 4
PáginaPágina:: 204204
55..55..22 ENSAIOSENSAIOS BIOLÓGICOSBIOLÓGICOS –– págpág:: 226226
55..55..22..11 PIROGÊNIOSPIROGÊNIOS
55..55..22..22 ENDOTOXINASENDOTOXINAS BACTERIANASBACTERIANAS
55..55..22..33 TOXICIDADETOXICIDADE
55..55..22..44 SUBSTÂNCIASSUBSTÂNCIAS VASOPRESSORASVASOPRESSORAS
55..55..22..55 HISTAMINAHISTAMINA
55..55..22..66 SUBSTÂNCIASSUBSTÂNCIAS VASODEPRESSORASVASODEPRESSORAS
11-- QualitativosQualitativos
SãoSão testestestes realizadosrealizados comcom aa finalidadefinalidade dede identificaridentificar oo produtoproduto ee
avaliaravaliar asas característicascaracterísticas dede inocuidadeinocuidade ouou toxicidadetoxicidade devidodevido àà
presençapresença dede contaminantescontaminantes dede diferentesdiferentes origensorigens..
ExEx::
-- EsterilidadeEsterilidade;;
-- PirogêniosPirogênios;;
-- ToxicidadeToxicidade;;
-- SubstânciasSubstâncias vasopressorasvasopressoras;;
-- PesquisaPesquisa ee identificaçãoidentificação dede patógenospatógenos..
22.. QUANTITATIVOSQUANTITATIVOS
DIRETODIRETO
MedeMede--sese diretamentediretamente asas dosesdoses dede cadacada preparaçãopreparação
(padrão(padrão ee amostra)amostra) necessáriasnecessárias parapara produzirproduzir respostasrespostas
prépré--determinadasdeterminadas emem cadacada unidadeunidade experimentalexperimental dede doisdois
gruposgrupos equivalentesequivalentes dede animaisanimais ouou outrosoutros reativosreativos
biológicosbiológicos..
ExEx.:.: EnsaioEnsaio biológicobiológico dede DigitalDigital..

5. 5
MÉTODOMÉTODO BIOLÓGICOBIOLÓGICO QUANTITATIVOQUANTITATIVO
INDIRETOINDIRETO
ComparamComparam--sese níveisníveis dede respostaresposta produzidasproduzidas porpor dosesdoses dodo
padrão,padrão, emem escalaescala quantitativa,quantitativa, comcom aquelasaquelas produzidasproduzidas
porpor umauma ouou maismais dosesdoses dada amostraamostra..
ExEx.:.: EnsaioEnsaio dede potênciapotência dada OxitocinaOxitocina..
OsOs procedimentosprocedimentos dede padronizaçãopadronização biológicabiológica sãosão geralmentegeralmente
menosmenos precisos,precisos, consomemconsomem maismais tempotempo ee sãosão maismais dispendiososdispendiosos
dede realizarrealizar queque osos métodosmétodos químicosquímicos.. SãoSão realizadosrealizados quandoquando::
1.1. AA identidadeidentidade químicaquímica dada substânciasubstância ativaativa nãonão foifoi totalmentetotalmente
elucidadaelucidada;;
2.2. NãoNão foifoi desenvolvidodesenvolvido ensaioensaio químicoquímico adequadoadequado parapara medirmedir aa
substânciasubstância química,química, aindaainda queque suasua estruturaestrutura químicaquímica sejaseja
estabelecidaestabelecida.. ExEx.:.: InsulinaInsulina..
3.3. SeSe oo fármacofármaco compõecompõe--sese dede umauma misturamistura complexacomplexa dede substânciassubstâncias
dede estruturaestrutura variadavariada.. ExEx.:.: DigitalDigital..
44.. SeSe oo ensaioensaio químicoquímico nãonão éé umauma indicaçãoindicação válidaválida dede atividadeatividade
farmacológica,farmacológica, devido,devido, porpor exemploexemplo aa faltafalta dede diferenciaçãodiferenciação entreentre
isômerosisômeros ativosativos ee inativosinativos;;
UmUm ensaioensaio biológicobiológico medemede aa atividadeatividade biológicabiológica realreal dede umauma
determinadadeterminada amostra,amostra, queque podepode representarrepresentar aa somasoma algébricaalgébrica dada
interaçãointeração dede numerososnumerosos fatoresfatores químicosquímicos ee físicofísico--químicosquímicos..
httphttp:://www//www..anvisaanvisa..govgov..br/cosmeticos/guia/html/apresentacaobr/cosmeticos/guia/html/apresentacao..htmhtm

6. 6
Os 3 R's
A idéia de ensaios alternativos é muito mais abrangente do que a
substituição do uso de animais, incluindo também a questão da redução e
refinamento na utilização dos mesmos.
Este princípio está baseado no conceito dos 3R's (Three
R's), o qual foi definido por William Russell e Rex Burch, em
1959, no livro Principles of Human Experimental Technique.
Os 3 R's que representam o refinamento, redução e
substituição (Refine, Reduction e Replacement).
Refinamento
O Termo refinamento significa a modificação de algum procedimento operacional
com animais, objetivando minimizar a diminuição da dor e o estresse. A experiência
da dor e do estresse tem, como resultado, mudanças psicológicas que aumentam a
variabilidade experimental dos resultados.
Redução
A concepção de redução como alternativa estratégica, resulta em menor número
de animais sendo utilizados para obter a mesma informação, ou maximização da
informação obtida por animal. Existem várias possibilidades para redução do uso
de animais.
Substituição
Um sistema experimental que esteja vinculado à totalidade da condição de vida
animal, pode ser considerado como substituto alternativo. Pode-se citar a proposta
de obtenção de células, tecidos ou organismos para subseqüentes estudos in vitro
ao invés da matança de animais.
33 RR’s’s
ToxicidadeToxicidade:: Capacidade de certas substâncias
causarem danos a seres vivos.
MateriaisMateriais aa seremserem testadostestados::
• Matérias-primas de fonte natural: devido a complexidade e
processos de purificação, como no caso de antibióticos e
hormônios.
• Produtos terminados: aqueles contendo matérias-primas
de fonte natural, ou nos demais casos como mecanismo
de verificação de pureza do processo de produção.
MateriaisMateriais aa seremserem testadostestados::
• Material plástico de correlatos e de acondicionamento
de produtos parenterais: devido a presença de
monômeros e oligômeros ou de aditivos incorporados
em seu processamento (plastificantes, antioxidantes,
lubrificantes) entre outros.
EmpregoEmprego dede espéciesespécies dede animaisanimais parapara avaliaravaliar oo riscorisco
toxicológicotoxicológico nono serser humanohumano..
ProblemasProblemas:: extrapolarextrapolar resultadosresultados obtidosobtidos emem animaisanimais aa
humanoshumanos (diferentes(diferentes dosagens,dosagens, espéciesespécies dede animais)animais)..

7. 7
-- estudarestudar aa naturezanatureza dosdos efeitosefeitos tóxicostóxicos aoao nívelnível celular,celular, tecidostecidos ee dede
órgãosórgãos;;
-- avaliaravaliar aa variaçãovariação dada respostaresposta ,, porpor diferentesdiferentes espécies,espécies, durantedurante
exposiçãoexposição repetitivarepetitiva aoao agenteagente;;
-- identificaridentificar dosesdoses nasnas quaisquais possampossam ocorrerocorrer alteraçõesalterações fisiológicas,fisiológicas,
bioquímicasbioquímicas ee morfológicasmorfológicas;;
-- conhecerconhecer possíveispossíveis efeitosefeitos cumulativoscumulativos dodo agenteagente ee dede seusseus produtosprodutos
dede biotransformaçãobiotransformação;;
-- PredizerPredizer efeitosefeitos adversosadversos àà saúdesaúde decorrentesdecorrentes dede exposiçãoexposição
intermitente,intermitente, repetidarepetida ouou crônicacrônica aoao agenteagente emem questãoquestão
TestesTestes comcom produtosprodutos dada áreaárea dada saúdesaúde::
-- ObterObter dadosdados parapara estimarestimar oo potencialpotencial dede danodano aoao usuáriousuário (DL(DL5050));;
-- ObterObter informaçõesinformações sobresobre oo mecanismomecanismo pelopelo qualqual sese manifestamanifesta aa
toxicidadetoxicidade;;
-- EstabelecerEstabelecer dosedose parapara testestestes subseqüentessubseqüentes dede toxicidadetoxicidade aa longolongo
prazo,prazo, casocaso sese façamfaçam necessáriosnecessários;;
-- GarantirGarantir aa segurançasegurança dodo consumidor,consumidor, emem ensaiosensaios lotelote--aa--lotelote ouou
periódicosperiódicos..
AplicaçõesAplicações tópicastópicas ,, ocularocular (mais(mais comunscomuns parapara produtosprodutos cosméticos),cosméticos),
injeçãoinjeção intradérmicaintradérmica ouou subcutânea,subcutânea, aplicaçõesaplicações intraintra--vaginalvaginal ee intraintra--
nasal,nasal, assimassim comocomo diretadireta aa superfíciessuperfícies internasinternas dada cavidadecavidade oraloral sãosão porpor
vezesvezes requeridasrequeridas parapara osos medicamentosmedicamentos,, correlatoscorrelatos ee
cosméticoscosméticos..
TiposTipos dede testestestes::
TesteTeste dede irritaçãoirritação primáriaprimária dede pelepele:: PRODUTOSPRODUTOS DEDE
HIGIENE,HIGIENE, COSMÉTICOS,COSMÉTICOS, EE PERFUMES,PERFUMES, alémalém dede certoscertos
correlatoscorrelatos (FDA)(FDA)..
IrritaçãoIrritação emem pelepele dede coelhoscoelhos -- AvaliadaAvaliada atravésatravés dede escalasescalas ee
fórmulasfórmulas dede cálculocálculo dede acordoacordo comcom asas respostasrespostas dada
pelepele (eritema,(eritema, edema)edema)..
TesteTeste dede sensibilizaçãosensibilização dada pelepele:: Primeira exposição a
uma substância química provoca pequena reação,
tornando-se severa e persistente após exposições
subsequentes (semanas ou anos).

8. 8
TesteTeste dede irritaçãoirritação ocularocular:: Inicialmente avaliações
fisiológicas observadas na córnea, conjuntiva e íris de
coelhos albinos. A partir de 1962, inclusão de parâmetros
como eritema, espessura das pálpebras e membranas,
abrangendo edema, lacrimejamento, opacidade, danos
capilares e neovascularização (pannus) da córnea.
AvaliaçãoAvaliação atravésatravés dede valoresvalores dede graduaçãograduação parapara lesõeslesões ocularesoculares..
AplicaçõesAplicações:: sabonetessabonetes levementelevemente ácidosácidos ouou básicos,básicos, xampus,xampus,
soluçõessoluções dede limpeza,limpeza, cremescremes ee loções,loções, delineadores,delineadores, máscaras,máscaras,
desinfetantes,desinfetantes, líquidoslíquidos dede enxágüeenxágüe bucalbucal entreentre outrosoutros..
Outros tipos de testes:
- Fototoxicidade;
- Teste de implante intramuscular;
- Avaliação de toxidade aguda com efeito sistêmico;
- Teste de administração oral;
- Teste de aplicação dérmica ou percutânea;
- Teste com inalação.
Ensaios em que animais são tratados com material teste
de 5 – 7 dias por semana num período mínimo de 20 dias
e máximo de 1 ano.
AdiçãoAdição dede outrosoutros testestestes (ex(ex:: bioquímicos,bioquímicos, hematológicos)hematológicos)
parapara avaliaçãoavaliação dosdos efeitosefeitos sobresobre asas cobaias,cobaias, alémalém dasdas
observaçõesobservações listadaslistadas parapara estudosestudos agudos,agudos, servindoservindo parapara
estudoestudo crônicocrônico subseqüentesubseqüente..
Estudos de longo prazo ou tempo de vida (meses, anos),
são planejados para durar durante a maior parte da vida
dos animais.
EstudosEstudos dede oncogenicidade,oncogenicidade, teratogenicidadeteratogenicidade
(anormalidades(anormalidades ouou deformidadesdeformidades nono desenvolvimentodesenvolvimento
fetal),fetal), toxicidadetoxicidade sobresobre aa reproduçãoreprodução (interferem(interferem comcom
acasalamento,acasalamento, gestação,gestação, nascimentonascimento ee desenvolvimentodesenvolvimento
dodo feto)feto)..

9. 9
AlternativasAlternativas cientificamentecientificamente comprovadas,comprovadas, evitandoevitando oo usouso
dede animaisanimais..
UsoUso dede órgãosórgãos isolados,isolados, culturasculturas dede célulascélulas ee dede tecidos,tecidos,
ensaiosensaios químicosquímicos ee físicos,físicos, tecidostecidos simuladossimulados ee fluídosfluídos
corpóreos,corpóreos, modelosmodelos mecânicos,mecânicos, matemáticosmatemáticos ee
simulaçõessimulações emem computadorcomputador..
ParaPara medicamentosmedicamentos (hormônios,(hormônios, sorossoros ee vacinasvacinas dede usouso
humano),humano), nosnos quaisquais hajahaja exigênciasexigências sobsob toxicidadetoxicidade nana
monografiamonografia dada FarmacopéiaFarmacopéia BrasileiraBrasileira 55ºº ediçãoedição..
ProcedimentoProcedimento:: UtilizarUtilizar 55 camundongoscamundongos comcom pesopeso entreentre 1717 gg ee 2222 gg e,e,
pelopelo menos,menos, doisdois cobaioscobaios sadiossadios comcom pesopeso entreentre 250250 gg ee 350350 gg..
ViasVias dede administraçãoadministração:: VerVer métodométodo ouou monografiamonografia específicaespecífica
Intravenosa,Intravenosa, intraperitonealintraperitoneal,, SubcutâneaSubcutânea ouou OralOral..
InterpretaçãoInterpretação::
PorPor umum períodoperíodo de,de, nono mínimo,mínimo, 77 dias,dias, observarobservar osos animaisanimais quantoquanto aa
sinaissinais dede enfermidade,enfermidade, perdaperda dede peso,peso, anormalidadesanormalidades ouou mortemorte..
SeSe,, durantedurante oo períodoperíodo dede observaçãoobservação,, todostodos osos animaisanimais sobrevivem,sobrevivem, nãonão
manifestammanifestam respostasrespostas queque nãonão sãosão específicasespecíficas ouou esperadasesperadas parapara oo
produtoproduto ee nãonão sofremsofrem reduçãoredução dede peso,peso, aa preparaçãopreparação cumprecumpre oo testeteste..
CasoCaso contrário,contrário, realizarrealizar novonovo testeteste ee retestereteste (dobro(dobro dede animais)animais)
TESTETESTE PARAPARA PRODUTOSPRODUTOS BIOLÓGICOS,BIOLÓGICOS, SOROSSOROS EE VACINASVACINAS

10. 10
RegistroRegistro dede ProdutosProdutos BiológicosBiológicos ee HemoterápicosHemoterápicos