O documento discute fatores que afetam o crescimento microbiano, incluindo temperatura, pH, pressão hidrostática e osmótica, e fontes de nutrientes. Fatores como temperatura, pH e pressão afetam a taxa e capacidade de crescimento, enquanto fontes adequadas de carbono, nitrogênio, fósforo e outros nutrientes são necessárias para o crescimento. O documento também descreve diferentes tipos de meios de cultura usados para cultivar microrganismos em laboratório.
2. • Crescimento microbiano: aumento do número
de Microrganismos (MO) e não do tamanho das
células;
• Colônias: grupo de células que podem ser
visualizadas sem o microscópio;
Porque estudar?
• Controlar o crescimento de microrganismos
patogênicos ou daqueles que degradam os
alimentos;
• Entender como estimular o crescimento de MO
que estamos interessados em estudar.
3. Fatores necessários ao
crescimento
Fatores físicos: pH, temperatura, pressão
hidrostática e pressão osmótica.
Fatores químicos: fontes de carbono, nitrogênio,
fósforo, enxofre, oligoelementos, oxigênio e
fatores orgânicos de crescimento.
4. Fatores físicos : TEMPERATURA
Maioria dos MO: crescem em temperaturas ideais para o
homem
Temperatura mínima de crescimento: menor
temperatura em que a espécie é capaz de crescer
Temperatura ótima: é aquela em que a espécie
apresenta melhor crescimento
Temperatura máxima de crescimento: é a temperatura
mais alta em que ainda pode haver crescimento.
5. Temperatura ótima: temperatura na qual o MO cresce
mais rapidamente. Fica geralmente apenas alguns graus
abaixo da temperatura máxima.
6. Termófilos:
- MO que crescem em temperaturas altas.
- Crescem em T acima de 50ºC.
Termófilos facultativos: Conseguem crescer
abaixo de 37ºC (Solo).
Estenotermófilos: Não conseguem crescer
abaixo de 37ºC. Compostagem.
Termófilos extremos: Crescem acima de
80ºC. Hidrotermais. Pyrolobus fumarii pode
crescer a 113ºC.
7. Mesófilos:
- MO que crescem em temperaturas
moderadas.
- Crescem em T próximas a 37ºC, temperatura
do corpo humano
Ambiente típico: animais.
Escherichia coli, assim como a maioria das
bactérias causadoras de doenças, são
mesófilas.
8. Psicrófilos:
- MO que crescem em temperaturas baixas.
- Crescem a taxas apreciáveis abaixo de 5ºC.
Psicrófilos estritos: Não conseguem crescer
acima de 20ºC (Água fria do oceano).
Psicrófilos facultativos: Conseguem crescer
acima de 20ºC (Solo e água).
9.
10. O que determina a temperatura máxima ou
mínima na qual um microrganimo pode
crescer???
Termoestabilidade das proteínas do microrganismo
Proteínas: são as macromoléculas mais sensíveis
ao calor em uma célula, e o crescimento não pode
acontecer em temperaturas que desnaturam as
proteínas.
11.
12. Refrigeração: método mais comum na preservação
de alimentos – a velocidade de reprodução diminui em
baixas temperaturas
MO podem sobreviver em temperaturas próximas ao
congelamento – forma dormente – e podem diminuir o
número
Em refrigeradores, MO patogênicos não crescem
Binômio: TEMPO X TEMPERATURA
Grandes quantidades de alimentos refrigerados:
considerar que são refrigerados a uma velocidade
bastante lenta
13. Fatores físicos: pH
Bactérias: crescem melhor em
uma faixa estreita de pH perto
da neutralidade, entre 6,5 e 7,5
(ligeiramente básico)
Fungos: crescem melhor em pH
ligeiramente ácido
Protozoários e algas: crescem
melhor em pH neutro
14. Acidez: utilizada na conservação de alimentos:
chucrute, picles, queijos, conservas....
-Acidófilas: crescem em ambientes com pH
extremamente baixos. Lixiviações de ácido dos
resíduos de minas – pH: 1,0;
- Basófilas: prosperam em ambientes com pH
extremamente alto. Lagos salgados alcalinos, comuns
nos desertos do oeste norte-americano – pH:12;
- Escherichia coli: pode crescer entre pH 5,0 até 8,0.
pH interno mantido próximo a 7,6 (valor ótimo para
seu metabolismo) = mecanismos que bombeiam íons
hidrogênio para fora ou para dentro da célula.
15. Fatores Físicos: PRESSÃO HIDROSTÁTICA
- É a pressão aplicada a um líquido. Comumente
medida em atmosferas;
-Escherichia coli: crescem em pressões de até 300
atm.
- Procariontes encontrados no fundo do oceano:
toleram até 1500 atm (o suficiente para esmagar
tudo, menos as embarações de aço mais resistentes)
- Pressão elevada não esmaga uma célula microbiana:
a água passa imediatamente pela membrana da célula,
igualando a pressão de fora e de dentro.
16. Fatores físicos: PRESSÃO OSMÓTICA
-A força osmótica é uma medida de quanto a água está disponível.
-MO necessitam de água para o seu crescimento
-A célula contém de 80 a 90% de água
-Pressão osmótica elevada têm o efeito de remover água da
célula
Solução HipotônicaSolução Hipertônica
plasmólise
17. Importância:
Inibição do crescimento no momento em que a
membrana plasmática se separa da parede celular
(célula murcha, meio hipertônico)
Adição de sais em uma solução (aumento da pressão
osmótica): preserva alimentos
EX: mel, peixe, leite condensado – alta concentração de
sal ou açúcar remove a água do interior da célula do
MO, impedindo o crescimento
18. Fatores químicos (nutricionais)
-Escherichia coli cresce até dez vezes mais rápido em
um meio rico. O meio pobre satisfaz todas as
necessidades essenciais dela, mas a célula deve
sintetizar mais moléculas pequenas. Resultado:
crescimento mais lento.
-Taxa de crescimento: depende da qualidade do meio
- Produto do crescimento (biomassa): quantidade de
nutrientes no meio.
19. Elementos principais:
Carbono: carbono, lipídeos, proteínas e CO2
Oxigênio: parte de muitos compostos orgânicos
Hidrogênio: parte de muitos compostos orgânicos
Nitrogênio: aminoácidos, nitrato, nitrito, sais de amônia
Enxofre: biossíntese de aa cisteína, cistina, metionina
Fósforo: síntese de ácidos nucléicos e ATP
20. Oligoelementos
• Ferro, cobre, molibdênio, zinco, potássio, magnésio,
cálcio, manganês, cobalto.
• Elementos necessários em quantidades pequenas
• São requeridos para ativar enzimas – cofatores –
íons que uma enzima precisa para ser ativa
• São componentes de coenzimas – moléculas
orgânicas que uma enzima precisa para ser ativa.
• Presentes na água, constituintes do meio de cultura
ou adicionados ao mesmo
21. Fatores de crescimento
Compostos essenciais que os microrganismos não
conseguem sintetizar, devendo obtê-los do ambiente.
-Leuconostoc citrovorum: precisa dos 20 aa.
Se os fatores de crescimento estiverem presentes no
meio, até as bactérias que não precisam os utilizam =
crescimento acelerado.
Meio Composição T duplicação (min) Nº ribossomos por
célula
Lisina mínima Aa + sais 97 7.000
Glicose mínima Glicose + sais 50 17.000
20 aa 20 aa + sais 32 42.000
Cérebro-coração Extrato 21 83.000
22. 1. Aeróbico obrigatório: Utilizam oxigênio
molecular para produzir energia.
2. Anaeróbicos obrigatórios: não há
crescimento na presença de oxigênio.
3. Anaeróbicos facultativos: crescimento
aeróbico e anaeróbico. Cresce mais na
presença de oxigênio.
4. Microaerófilo: crescimento somente
aeróbico, mas o oxigênio é requerido em
baixa concentração
5. Anaeróbicos aerotolerantes: crescimento
somente anaeróbico, mas continua na
presença de oxigênio
Oxigênio
23. Oxigênio
-Anaeróbicos são sensíveis ao oxigênio.
-Normalmente não produzem enzimas
antioxidantes para combater as Espécies
reativas de oxigênio (EROs)
As EROs incluem:
ânion superóxido (O2
•–)
oxigênio singleto (1O2)
peróxido de hidrogênio (H2O2)
radical hidroxila (OH•)
24. Biofilmes
• Falhas no processo de higienização: resíduos aderidos em
equipamentos e superfícies – potencial fonte de
contaminação.
• Os MO se aderem, interagem com as superfícies e iniciam
crescimento celular. Multiplicação: origem das colônias.
• Quando a massa celular é suficiente para agregar
nutrientes, resíduos e outros microrganismos - biofilme
• Contém partículas de proteínas, lipídeos, fosfolipídeos,
carboidratos, sais minerais e vitaminas - formam uma
crosta, debaixo da qual, os MO continuam a crescer.
25. • No biofilme: os MO estão mais resistentes à ação de
agentes químicos e físicos.
• Três etapas: fixação (adesão), colonização e crescimento.
• MO envolvidos no processo de fixação:
- Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fragi,
Pseudomonas fluorescens, Micrococcus sp e Enterococcus
faecium.
- Patogênicos: Listeria monocytogenes, Yersinia
enterocolitica, Salmonella thyphimurium, Escherichia coli
O157:H7, Staphylococcus aureus e Bacillus cereus
26.
27. MEIOS DE CULTURA: Material nutriente preparado
em laboratório para o crescimento de MO
- Inóculo: quando MO são colocados em um meio de
cultura para início do crescimento.
- Cultura: crescimento e multiplicação dos MOs em um
meio de cultura
28. Critérios utilizados para crescimento de
MO em meio de cultura
1. Conter nutrientes corretos para que o MO possa crescer;
2. Conter quantidade de água necessária;
3. Ter o pH ajustado;
4. Conter quantidade específica de oxigênio;
5. Ser estéril;
6. Ser incubado na temperatura ideal de crescimento da
cultura.
29. Meios utilizados para o cultivo de
microrganismos
Quanto à consistência ou estado físico do meio de cultura
Quanto à natureza do meio de cultura
Quanto a composição ou função do meio de cultura
30. Quanto à consistência ou estado físico do meio
de cultura
Meios Líquidos: São aqueles em que
os nutrientes acham-se dissolvidos
em solução aquosa.
Podem ser esterilizados em tubos de
ensaio, balões, Erlenmeyers ou outros
tipos de frascos.
31. Meios sólidos: Estes meios possuem na sua composição,
nutrientes e ágar na concentração de 1,0 a 2,0 %.
Ágar é uma substância de
natureza polissacarídica
extraída de algas
marinhas. Possui a
propriedade de se fundir
a 96 ºC e solidificar a
45ºC; não é degradado
pelos MO
32. Meios Semi-sólidos: Possuem em sua composição, além
dos nutrientes, ágar em uma pequena porcentagem (0,5%
a 0,8%). Certos isolamentos de microrganismos têm mais
sucesso com o emprego de tais meios. São úteis para
comprovar a motilidade bacteriana.
Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa
33. Quanto à natureza do meio de cultura
Meio animado: É constituído de células vivas (animais
de laboratório, tecidos vivos ou ovo embrionário). Útil
principalmente para o cultivo de vírus.
Meio inanimado: Meio que não possui células vivas.
Meios naturais: São aqueles que contém substâncias
provenientes da natureza (ex. leite)
Meios sintéticos: são aqueles formados por
substâncias químicas preparadas em laboratório (ex.
ágar EMB - eosine methilene blue).
34. Meio Rico: Meio que permite o cultivo de quase todos os
microrganismos. Permite o crescimento de microrganismos
exigentes que necessitam de fatores de crescimento, mas
não inibem o crescimento daqueles pouco exigentes. Este
meio, além das fontes nutritivas usuais pode possuir
sangue, soro ou extratos de tecidos (meio complexo).
O meio quimicamente definido (conheço todos os
nutrientes)
Quanto à composição ou função
35. Meio Enriquecedor ou meio enriquecido
Favorece o crescimento de uma dada espécie
bacteriana que se deseja isolar, mas não favorece o
crescimento de outras espécies bacterianas presentes
em uma população mista.
Estimula o crescimento do organismo de interesse que
está em baixo n°, tornando possível a detecção
Após alguns sub-cultivos nesse meio, a espécie
desejada emerge como uma população predominante ou
enriquecida.
36. Meio Enriquecedor ou meio enriquecido
Ex.: as bactérias que oxidam o fenol podem ser
isoladas a partir de amostras do solo, utilizando um
meio de cultura constituído de sais de amônia, com o
fenol como a única fonte de carbono e energia. Após
alguns cultivos seriados, somente os microrganismos
capazes de oxidar o fenol estarão presentes em
grande número.
37. Meio seletivo : Contém substâncias que inibem o
crescimento de certos microrganismos, porém
permitem o crescimento de outros.
Ágar Columbia CNA (Columbia
Naladixic Acid): seletivo para
bactérias Gram-positivas
O ácido nalidíxico é um antibiótico sintético derivado da
quinolona. Inibe a síntese de DNA em várias bactérias
Gram-negativas. Especificamente, inibe a DNA girase.
38. Meio Diferencial: contêm substâncias que permitem
diferenciar grupos de microrganismos.
CHROMagarTM
Substâncias cromogênicas
específicas são incluídas
no meio de cultura
39. Ex.: Meio Diferencial: ágar sangue
As bactérias hemolíticas produzem hemolisinas
(enzimas) que lisam as células vermelhas do sangue
Elas podem ser diferenciadas pela região de lise ao
redor da colônia
- hemólise em Staphylococcus aureus
bactérias não hemoliticas
40. Meio seletivo e diferencial: reúne as propriedades
dos meios seletivos e dos meios diferenciais.
Seletivo: contêm sais
biliares e o corante
cristal violeta que inibe o
crescimento de bactérias
Gram-positivas.
Staphylococcus aureus
Ex: o meio de cultura ágar MacConkey
41. • - Lactose está presente no
meio.
• - Bactérias (gram negativas)
que utilizam lactose
(fermentadoras) irão produzir
ácido. Na presença do indicador
de ph, vermelho neutro, ficam
com a cor vermelha
As bactérias (Gram negativas)
que não utilizam lactose ficam
incolores (opacas)
Salmonella typhimurium
Escherichia coli
ágar MacConkey também é diferencial
42. Meio seletivo e diferencial: Ágar manitol salgado
Diferencial: A bactéria
Staphylococcus aureus utiliza
o manitol como fonte de
carboidrato e produz ácido.
Esse reage com fenol
alterando a cor da colônia
para amarela.
As colônias brancas de
Staphylococcus epidermidis
não utilizam manitol
Seletivo: A alta concentração de sal (7,5%) seleciona
bactérias tolerantes, como Staphylococcus spp.
S. aureus
S. epidermidis
43. Técnicas especiais de cultivo
• Estufas de dióxido de carbono: crescimento de
bactérias anaeróbicas que necessitam de concentrações
de CO2 superiores ou inferiores àquelas encontradas na
atmosfera
• Jarras contendo uma vela no seu interior: jarra grande,
fechada hermeticamente, contendo uma vela acesa que
consome o oxigênio
44. Jarra de anaerobiose: sistema GaspaK
A água é adicionada ao envelope gerador de gás (GasPak),
promovendo uma liberação de H2 e CO2
O H2 reage como o O2 na superfície do catalisador de
paládio, formando água e estabelecendo a anaerobiose
46. Cultivo de microrganismos aeróbios
O agitador Orbital expõe
maiores superfícies da
cultura de microrganismos
aeróbios ao oxigênio
47. Obtenção de culturas puras
• Maioria dos materiais infecciosos, solo, água e alimentos:
apresentam uma grande variedade de bactérias
• Origem de uma colônia visível: um único esporo, célula
vegetativa ou um grupo de MO em grumos ou cadeia
• Normalmente apresentam características morfológicas
diferentes que permitem a diferenciação
• Necessidade de culturas puras
• Método de semeadura por esgotamento
48.
49.
50. Preservando culturas bacterianas
Mantidas em refrigeração por curtos períodos
Congelamento em baixas temperaturas: Culturas puras
colocadas em um líquido e congeladas rapidamente entre
-50oC a -95oC;
Liofilização: suspensão microbiana é congelada
rapidamente entre -54oC a -72oC e imediatamente ocorre
a remoção da água utilizando alto vácuo. Recuperação:
adição de meio líquido nutriente.
53. Tipos de reprodução assexuada
• Fissão binária transversal (mais comum)
• Brotamento
• Fragmentação
• Formação de exósporo
54. Etapas da Fissão Binária Transversal
1- Elongação da célula
parental
2- duplicação do cromossomo
3 - Distribuição do
cromossomo e material
celular. Formação do septo
4- Separação das células
1
2
3
4
59. Crescimento de uma cultura bacteriana
por divisão binária (ou fissão binária)
As células aumentam de volume(alongamento) e se dividem
Tempo de geração tempo necessário p/ dividir e dobrar a
população
O crescimento ocorre em progressão geométrica
1 ==> 2 ==> 4 ==> 8 ==> 16 ==> ...
n= número de gerações (expoente)
20 ==> 21 ==> 22 ==23 ==> 24 ==> 2n
60. O intervalo entre as divisões celulares (duplicação
da população) é chamado tempo de geração
O tempo de geração depende da espécie
bacteriana e, também, das condições nutricionais
e físicas de cultivo (E. coli = 20-30’)
61.
62. Com a
transformação
logarítmica, você
consegue acomodar
mais valores (uma
maior população)
no mesmo gráfico.
Com os valores
aritméticos não
são detectados
alterações nas
gerações iniciais!
63. Expressões matemáticas do crescimento
Para calcular a concentração total de células = n°inicial de
células x 2n° de gerações.
N= n° total de células na cultura com crescimento ativo
n = número de gerações
N0 = número inicial de células
N= N0 X 2n
Qual o número total de células quando se tem 5 células
bacterianas que se dividiram 9 vezes?
N?
N0 = 5
n = 9
N = 5 x 29 = 2.560 células
64. Expressões matemáticas do crescimento
N= N0 X 2n
Transformação logarítimica
log10N = log10 N0 + n log10 2
n = (log10 N - log10 N0) / (log10 2)
n = 3,3 (log10 N - log10 N0)
65. A partir de uma população contendo 103 células foram
produzidas 108 células.
Qual o número de gerações ?
N0= 103 = 1.000
N= 108 = 100.000.000
? ==> n
n = 3,3 (log10 N - log10 N0)
n = 3,3 (log10 108 - log10 103)
n = 3,3 (8-3)
n=16,5 gerações
66. O tempo de geração (g)
é o tempo gasto para a
população duplicar
g = t/ n
g = tempo de geração
t= intervalo de tempo em minutos
n= número de gerações
67. n = 3,3 (log10 N - log10 N0)
n = 3,3 (log10 107 - log10 104)
n= 9,9 (número de gerações).
g = t/n
g= (4 h x 60’) / 9,9
g= 24,24 minutos
Qual o tempo de geração (g) de uma colônia de Staphylococcus aureus com
104 células que gerou no final de 4 horas um número de 107 células?
Primeiro encontrar o número de gerações (n) devido a fórmula do tempo de
geração (g)
68. Curva padrão de crescimento
Sistema fechado
• Nenhum nutriente é adicionado ao meio
• Nenhum produto de excreção é removido
• As células se dividem por fissão binária
• Número de células aumenta por um período de tempo, até
que os nutrientes cessem ou até que o produto de
excreção se acumulem em quantidades suficientes para que
o crescimento posterior seja interrompido.
69. CURVA DE CRESCIMENTO BACTERIANO
Demonstra o crescimento das células durante um período de
tempo
Log do n° de células viáveis x Tempo
70. Imediatamente após a inoculação da bactéria no meio
de cultura “novo” (meio rico para o pobre tb!!!!!)
Ocorre síntese de proteínas, enzimas, RNA, e outras
substâncias e, também, aumento da atividade
metabólica.
O tempo da fase depende da quantidade de inóculo
usada; do tempo necessário para recuperação pela
transferência e síntese de co-enzimas e enzimas
A taxa de crescimento é nula
LAG OU DE FASE DE ADAPTAÇÃO
71. Condições de crescimento balanceado
As células se dividem a uma taxa constante, em
progressão geométrica, dependendo das condições de
incubação e composição do meio de cultura
A taxa de crescimento é máxima e constante.
As células são uniformes em composição química e
atividades metabólicas e fisiológicas
Pico da atividade e eficiência fisiológica
FASE LOG OU EXPONENCIAL
72. FASE ESTACIONÁRIA
O crescimento da população bacteriana é limitado pela
exaustão dos nutrientes, intoxicação pelos produtos
de excreção mudança de pH e falta de espaço
Algumas células ainda se dividem e outras morrem
Começa a diminuir o número de células viáveis. A taxa
de crescimento é zero (número de células novas =
número de células mortas).
Interessante que caso o crescimento microbiano não
cessasse: uma bactéria com peso de 9,5 x 10-13 g,
dividindo-se a cada 20 min durante somente 25,5 horas
produziria, teoricamente, uma população igual ao peso
de um avião de transporte (80 mil toneladas).
73. FASE DE MORTE OU SENESCÊNCIA
Acúmulo adicional de produtos metabólicos inibitórios
e depleção dos nutrientes essenciais
A taxa de crescimento é zero e a de morte é
acelerada
O número de células viáveis diminui de forma
exponencial
74. Métodos para quantificar o
crescimento bacteriano
DIRETOS INDIRETOS
contagem em placa;
filtração;
NMP;
contagem no microscópio
turbidimetria;
atividade metabólica;
peso seco
75. DIRETOS
1. Contagem em placa e diluição em série
Considera que uma única célula bacteriana formará
uma colônia!
Mas nem sempre temos uma única célula, pois
existem os arranjos (estrepto.....).
Assim as contagens em placas são frequentemente
chamadas de unidades formadoras de colônia (UFC)
76. DIRETOS
1. Contagem em placa e diluição em série
Considera que uma única célula bacteriana formará
uma colônia!
Mas nem sempre temos uma única célula, pois
existem os arranjos (estrepto.....).
Assim as contagens em placas são frequentemente
chamadas de unidades formadoras de colônia (UFC)
78. As vantagens da contagem padrão em placa são:
•Somente células viáveis são contadas;
•Permite o isolamento das colônias, que podem ser sub-
cultivadas em culturas puras, as quais podem ser facilmente
estudadas e identificadas.
No entanto, algumas desvantagens são apresentadas:
•Não existe um meio que permita o crescimento de todos os
microrganismos;
•É necessária a incubação apropriada para permitir o
desenvolvimento das colônias (pode demorar);
•Usa-se muita vidraria e é relativamente trabalhoso;
•A necessidade de muita manipulação pode originar erros nas
contagens devido a erros de diluição e/ou plaqueamento
80. 2. Contagem em placa: “pour plate”
Principal desvantagem ágar a 50 °C pode eliminar
microrganismos!
O método por espalhamento não possui esta
desvantagem.
81. 3. Filtração
Utilizado para concentrar os microrganismos em uma
membrana de filtro (porosa). Poros pequenos
impedem a passagem de microrganismos!
-Amostras de água em riachos, lagos, pois possuem
pouca quantidade de células (poluição fecal –
coliformes fecais)
-Procedimento: Filtro 100 mL de água em seguida
coloco a membrana em meio de cultura (incubação)
contagem UFC
83. 4. Método do número mais provável (MNP)
-É uma técnica estatística baseada: quanto maior o
número de bactérias, maior será o número de
diluições necessárias para eliminar totalmente o
crescimento em tubos contendo meio de cultura.
-Técnica utilizada quando as bactérias não crescem
em meio sólido
-Fornece apenas uma estimativa
84.
85. 5. Contagem direta ao microscópio
Um volume conhecido de uma suspensão bacteriana é
colocado em uma área definida da lâmina de microscópio
Uma amostra de 0,01 mL é espalhada na superfície de 1
cm da lâmina e um corante é adicionado
Após a contagem de diferentes regiões da lâmina a
média do número de bactérias pode ser determinado –
multiplicado por 100 (para se determinar em mL)
86. Vantagem: não precisa de incubação (resultado imediato)
Desvantagens:
-Não é bom para contagem de bactérias móveis.
-As células mortas tb são contadas junto com as vivas
-Uma contagem satisfatória necessita de um grande número
de células
87. INDIRETOS
1. Turbidimetria
• Quando uma bactéria de multiplica em meio líquido, esse
meio fica turvo ou com alta densidade de células
• Utilização do espectrofotômetro
88.
89. INDIRETOS
2. Atividade metabólica
• Assume que a quantidade de um produto metabólico
determinado (ácido ou CO2) é diretamente proporcional
ao número de bactérias presentes
90. 3. Peso seco
• Usado pra medir a quantidade de microrganismo
• O Microrganismo é removido do meio de crescimento,
filtrado (ou centrifugado) e seco em dissecador, sendo
então pesado.
• Bom método para fungos filamentosos