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BIOLOGIA
TECNOLOGIA DO DNA
VISÃO GERAL
 Estudiosos demonstraram que a molécula de DNA servia de
molde para a formação da molécula de RNA e que, para isso, era
necessário a atividade da enzima RNA-polimerase.
 Para manipular o DNA, foi necessário o desenvolvimento de
ferramentas básicas que permitissem cortar, copiar e colar o
DNA.
 Em 1970, foram descobertas as endonucleases de restrição, que
deram origem a produção de DNA-recombinante.
Tecnologia do dna
ENDONUCLEASES DE RESTRIÇÃO
Werner Arber
 Estudou o processo pelo qual os DNAs virais são eliminados
após serem introduzidos em células bacterianas
hospedeiras.
 Verificou que determinadas bactérias eram capazes de
identificar os DNAs virais e destruí-los.
 Descobriu um novo grupo de enzimas, que foram
denominados endonucleases de restrição.
ENDONUCLEASES DE RESTRIÇÃO
 As sequências são lidas de forma idêntica tanto da esquerda para
a direita quanto da direita para a esquerda (na fita
complementar). Essas sequências recebem o nome de
palíndromo.
 Essas enzimas cortam a dupla-hélice de forma muito precisa e
com a ajuda de uma segunda enzima determina a metilação,
fazendo com que ela impeça que a enzima de restrição atue no
DNA da própria bactéria prevenindo sua destruição.
ENDONUCLEASES DE RESTRIÇÃO
 Uma das primeiras endonucleases de restrição
descoberta foi a EcoRI. Liga-se a sequência
GAATTC/CTTAAG do DNA.
 Moléculas de DNA cortadas com um ER
tendem a se unir novamente. Com o auxílio da
enzima DNA-ligase, a ligação torna-se
permanente.
Tecnologia do dna
PLASMÍDEOS
 Surgiu dos estudos sobre a resistência bacteriana aos
antibióticos.
 Em 1960, os cientistas descobriram que muitas bactérias
adquiriam resistência a antibióticos devido a presença dos
plasmídeos.
 Ao receber um plasmídeo, informações genéticas são
transferidas de uma bactéria a outra.
Tecnologia do dna
DNA - RECOMBINANTE
 Em 1972, Boyer (especialista em endonucleases)
e Cohen (especialista em plasmídeos), uniram
esforços para resenhar a molécula de DNA-
recombinante.
 Tinham como objetivo obter um “híbrido”, cada
um com genes que conferiam resistência a um
determinado antibiótico.
Tecnologia do dna
OUTROS VETORES DE CLONAGEM
 Os plamídeos são, sem duvida, um dos principais vetores de
clonagem, sendo, portanto, um veiculo ideal para transportar os
fragmentos de DNA para dentro das bactérias.
Alem dos plasmídeos, existem outros vetores de clonagem:
 Bacteriófagos
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Tecnologia do dna

  • 2. VISÃO GERAL  Estudiosos demonstraram que a molécula de DNA servia de molde para a formação da molécula de RNA e que, para isso, era necessário a atividade da enzima RNA-polimerase.  Para manipular o DNA, foi necessário o desenvolvimento de ferramentas básicas que permitissem cortar, copiar e colar o DNA.  Em 1970, foram descobertas as endonucleases de restrição, que deram origem a produção de DNA-recombinante.
  • 4. ENDONUCLEASES DE RESTRIÇÃO Werner Arber  Estudou o processo pelo qual os DNAs virais são eliminados após serem introduzidos em células bacterianas hospedeiras.  Verificou que determinadas bactérias eram capazes de identificar os DNAs virais e destruí-los.  Descobriu um novo grupo de enzimas, que foram denominados endonucleases de restrição.
  • 5. ENDONUCLEASES DE RESTRIÇÃO  As sequências são lidas de forma idêntica tanto da esquerda para a direita quanto da direita para a esquerda (na fita complementar). Essas sequências recebem o nome de palíndromo.  Essas enzimas cortam a dupla-hélice de forma muito precisa e com a ajuda de uma segunda enzima determina a metilação, fazendo com que ela impeça que a enzima de restrição atue no DNA da própria bactéria prevenindo sua destruição.
  • 6. ENDONUCLEASES DE RESTRIÇÃO  Uma das primeiras endonucleases de restrição descoberta foi a EcoRI. Liga-se a sequência GAATTC/CTTAAG do DNA.  Moléculas de DNA cortadas com um ER tendem a se unir novamente. Com o auxílio da enzima DNA-ligase, a ligação torna-se permanente.
  • 8. PLASMÍDEOS  Surgiu dos estudos sobre a resistência bacteriana aos antibióticos.  Em 1960, os cientistas descobriram que muitas bactérias adquiriam resistência a antibióticos devido a presença dos plasmídeos.  Ao receber um plasmídeo, informações genéticas são transferidas de uma bactéria a outra.
  • 10. DNA - RECOMBINANTE  Em 1972, Boyer (especialista em endonucleases) e Cohen (especialista em plasmídeos), uniram esforços para resenhar a molécula de DNA- recombinante.  Tinham como objetivo obter um “híbrido”, cada um com genes que conferiam resistência a um determinado antibiótico.
  • 12. OUTROS VETORES DE CLONAGEM  Os plamídeos são, sem duvida, um dos principais vetores de clonagem, sendo, portanto, um veiculo ideal para transportar os fragmentos de DNA para dentro das bactérias. Alem dos plasmídeos, existem outros vetores de clonagem:  Bacteriófagos  Cosmídeos  Transpórsons