O documento discute a técnica de DNA recombinante e clonagem. Ele explica como plasmídios podem ser usados para inserir genes em bactérias usando enzimas de restrição e ligases. A clonagem permite produzir muitas cópias idênticas de um gene para aplicações como produção de insulina e vacinas.

1. MarceloMarcelo
BezerraBezerra
Técnica do DNATécnica do DNA
recombinante erecombinante e
Clonagem.Clonagem.

2. BiotecnologiaBiotecnologia
tecnologia do DNA recombinantetecnologia do DNA recombinante

3. Plasmídios
• O plasmídio é o material genético circular não ligado ao
cromossomo que fica espalhado pelo hialoplasma das
bactérias. Ele sofre o mesmo processo do DNA
cromossomal de transcrição e tradução, além de, se
multiplicar a cada divisão celular, passando uma cópia
para cada célula “filha”;
• O plasmídio é retirado das células bacterianas para que
se possa inserir o gene de estudo, para depois recolocá-
lo na bactéria.

5. Enzimas de restriçãoEnzimas de restrição
endonucleases de restriçãoendonucleases de restrição
• São “tesouras moleculares” que fatiam o DNA;
• Provenientes de vários tipos de bactérias;
• Cortam o DNA em sequencias específicas
denominados sítios de restrição;
• Atualmente já foram identificadas centenas de
enzimas de restrição;
• As principais são Eco RI, Hind III e BAM HI.

7. Clonagem do DNAClonagem do DNA
clonagem gênicaclonagem gênica
• Técnica para obtenção de um grande número de
moléculas de DNA idênticas, a partir de um único
fragmento de DNA;
• Utilizam-se vetores de DNA denominados vetores de
clonagem molecular;
• Os principais vetores utilizados são os plasmídios
(segmentos de DNA presente em bactérias) e os
bacteriófagos (vírus que atacam bactérias).

8. Clonagem por meio de plasmídiosClonagem por meio de plasmídios
• 1 - as enzimas de restrição cortam o DNA em fragmentos manipuláveis
específicos que contêm o gene pretendido;
• 2 – esses fragmentos obtidos são incorporados num vetor (transporte do
fragmento de DNA para uma célula);
• 3 – para que o fragmento de DNA seja incorporado no vetor é necessário
que a mesma enzima de restrição, que tinha atuado no DNA, atue agora
no vetor – assim, as zonas cortadas conseguem-se complementar;
• 4 – as enzimas DNA ligases são as responsáveis pela ligação dos dois
fragmentos de DNA – é produzida uma nova molécula estável;
• 5 – o vetor recombinante é colocado junto às bactérias (célula
hospedeira) para ser incorporado por elas, que em condições adequadas
se dividem criando inúmeras cópias do gene aí inserido – clonagem;

9. Clonagem por meio de plasmídiosClonagem por meio de plasmídios
• 6 – selecionar as bactérias que incorporaram o vetor;
• 7 – purificação – separar o composto de interesse dos outros que foram
produzidos pelo metabolismo normal do hospedeiro
• 8 - vetor: plasmídios (pequenos fragmentos livres de DNA com forma
circular que estão presentes em bactérias).

11. Aplicações da clonagem e do DNA
recombinante
• A manutenção de acervo gênico, conservando
variações genéticas raras por um longo tempo;
• Desenvolvimento de culturas microbianas que são
capazes de produzir substâncias como hormônios
(insulina e do crescimento), enzimas industriais e
vacinas.

12. Clonagem
É um processo natural ou artificial onde são produzidos
organismos geneticamente idênticos. Trata-se de um tipo de
reprodução assexuada pois não envolve troca de gametas entre
indivíduos.

14. A clonagem traz oportunidades
• Utilização de órgãos de mamíferos clonados
para transplantes em humanos;
• A salvação para espécies com risco de extinção.

15. A clonagem gera controvérsias
• A taxa de sucesso na clonagem de mamíferos é
muito baixa, o que torna necessário centenas de
tentativas, gerando um clone não tão saudável
quanto o original;
• Animais clonados, em uma população
selvagem, resultaria em uma redução da
biodiversidade, pois os clones são
geneticamente idênticos.