A cromatografia é um método físico-químico para separar os componentes de uma mistura, fazendo-a passar através de uma fase estacionária. Os principais métodos são a cromatografia em papel, camada delgada, gasosa e líquida de alta eficiência. A cromatografia em camada delgada usa placas de vidro ou sílica como fase estacionária para separar compostos por suas diferentes afinidades.

1. Profa. Zara Hoffmann Cromatografia Conceitos Básicos

2. Cromatografia Método físico-químico para separação dos componentes de uma mistura Efetua-se fazendo-se passar uma solução (líquida ou gasosa) através de uma fase estacionária, onde se efetua o procedimento de separação. A solução recebe a denominação de fase móvel ( líquida ou gasosa) A fase estacionária (sólida ou líquida)

3. Esta separação resulta das diferenças de velocidade dos componentes arrastados pela fase móvel devido às diferentes interações com a fase estacionária. Os principais métodos cromatográficos são: cromatografia em papel (CP), cromatografia de camada delgada (CCD), cromatografia gasosa (CG) e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A seleção do método a ser empregado depende do material a ser utilizado.

4. Algumas definições Dissolvente : substância ou mistura de substâncias que constituem a fase móvel (geralmente líquido com alta PVapor) Origem : onde se aplica a amostra Adsorção : concentração na superfície de um sólido, das partículas de uma substância em dissolução Eluente : dissolvente polar Série eluotrópica : pentano, éter de petróleo, cicloexano, benzeno, clorofórmio, éter etílico, acetato de etila, acetona, etanol

6. Cromatografia por Adsorção fase estacionária sólida À medida que a solução passa através da fase sólida, os solutos vão sendo sucessivamente adsorvidos e dessorvidos, cada qual com uma característica específica Os que são mais adsorvidos atrasam-se em relação aos menos adsorvidos, e consegue-se a separação uns dos outros

7. Cromatografia por partição fase estacionária líquida O mecanismo da separação é baseado na diferente repartição dos solutos entre o solvente da solução e o líquido estacionário (solubilidade e interações intermoleculares)

8. Cromatografia em coluna (fase estacionária sólida) Cromatografia em papel (fase estacionária líquida) Cromatografia em camada fina (fase estacionária sólida) Cromatografia Gasosa (fase estacionária sólida)

9. Utilização Técnica de análise muito versátil Extensa e corrente aplicação em bioquímica, em química analítica, etc Separação de componentes Identificação de compostos (comparação com padrões) Purificação de compostos

10. Cromatografia em Camada Delgada (CDD) Técnica de Adsorção líquido/sólido Diferença de afinidade dos componentes de uma mistura pela fase estacionária Reações orgânicas, purificação e identificação de substâncias Placas de vidro (3/4mm) + sílica Gel ou alumina(fase estacionária)- polares Ativação: 105 – 110º.C, por 30/60 min

11. Fase móvel – solvente adequado ou mistura (pouco polar) Cuba de vidro tampada – capilaridade Revelação : fase estacionária fluorescente (UV), ou iodo (complexos c/compostos insaturados) Fator de Retenção - R f - Razão entre a distância percorrida pela substância em questão e a distância percorrida pela fase móvel Valores ideais entre 0,4 e 0,6

12. Cromatografia de placas (CDD)

14. Cromatografia Líquida de Alta Eficiência – CLAE (HPLC) Os componentes de um cromatógrafo líquido são: bomba, coluna cromatográfica, detector e o registrador. Fase móvel dissolver a amostra sem qualquer interação química entre ambas; ter alto grau de pureza (impurezas podem interferir na detecção do analito por ultravioleta- UV; ser compatível com o detector empregado e possuir polaridade adequada para permitir uma separação conveniente dos componentes da amostra. Solventes : água, metanol e acetonitrila.

15. Fase estacionária utiliza-se sólidos ou semi-rígidos, partículas porosas esféricas ou irregulares com diferentes diâmetros e suportam pressão até 350 bar. A coluna cromatográfica material inerte que resiste a todas as pressões em que ela vai ser usada Capacidade da coluna determinada pelo comprimento, diâmetro e pelo material de recheio. As colunas geralmente utilizadas são: octadecil (C18, RP18, ODS), octil (C8, RP8), CN (cianopropil) e NH2 (amina).

16. Detectores mais usados os fotométricos , baseados na absorbância no ultra-violeta e no visível os detectores de fluorescência (ordem de picograma) detectores por índice de refração (acompanham continuamente a diferença no índice de refração entre a fase móvel pura e o eluente que sai da coluna contendo os componentes da amostra (ordem de micrograma.).

19. Cromatografia de Alta Resolução e Absorção Atômica

20. HPLC