1 - A cromatografia foi inventada no início do século 20 pelo botânico russo Mikhail Tswett para separar pigmentos de clorofila. 2 - Ela envolve a separação dos componentes de uma mistura através da distribuição desses componentes entre fases móvel e estacionária. 3 - Existem diversos tipos de cromatografia que diferem pela composição da fase estacionária, como cromatografia por troca iônica, exclusão, adsorção e partição.

2.  O marco da invenção da cromatografia foi atribuída ao
botânico Russo Mikhail Semyonovich Tswett, em
relatórios publicados entre os anos de 1906 e 1906;
 Durante estudos botânicos, ele descobriu que a
clorofila era composta por mais de um corante, e que
passando-a por um tubo com éter de petróleo, ele
registrou que as misturas se separavam
gradativamente entre uma fase fixa de Carbonato de
Cálcio (CaCO3);
 Foi também o primeiro a usar o termo Cromatografia,
em seu relatório publicado no Jornal Alemão de
Botânica;
2

3.  É um método físico-químico de separação de
componentes de uma mistura, realizada através da
distribuição desses componentes, em uma fase
estacionária;
 A fase móvel move-se através da fase estacionária,
sendo arrastada pela força da gravidade, de modo
que um ou mais componentes desta mistura sejam
retidos pela fase estacionária;
 Existem diversas formas de se realizar o processo,
sendo a líquida considerada clássica e predecessora
de todas as outras;
3

4.  Amplamente usada para separação de misturas
complexas e em sua purificação, a cromatografia
permite que essas fases sejam completamente
classificadas e separadas;
 Podem ser usadas na industria química,
alimentícia, bioengenharia, laboratórios de
análises químicas e diversas outras;
 Permite as análises qualitativas e quantitativas de
materiais orgânicos e inorgânicos em diversas
amostras;
4

5.  CROMATOGRAFIA POR TROCA IÔNICA
 Baseia no principio de diferença de cargas entre a
fase estacionária e a fase móvel;
 Usa-se da diferença eletrostática entre os
componentes da matriz e da fase móvel, sendo
possível controlá-la utilizando fatores como pH e força
iônica (Potencial de Ionização);
 A coluna pode ser reutilizada, usando o eluente inicial
como calibrador;
 A matriz é composta material poroso, natural ou
sintético, como por exemplo carboximetilcelulose
(carga -) e dietilaminoetilcelulose (carga +);
5

6. 6

7.  CROMATOGRAFIA POR ADOSRÇÃO
 É baseada em uma fase estacionaria solida que
adsorve (prende) certas moléculas de forma não
covalente com outras moléculas situadas numa
matriz insolúvel em água.
 Este tipo de cromatografia usa-se principalmente
em bioquímica para isolar enzimas e para separar
moléculas da membrana celular.
 Em geral, substâncias solúveis em solventes
orgânicos são melhor separadas na cromatografia
por adsorção
7

8. 8

9.  CROMATOGRAFIA POR EXCLUSÃO
 É utilizada na separação de componentes pelo
tamanho molecular;
 Apresenta duas fases:
 Fase móvel pode ser um líquido ou um gás;
 Fase estacionaria que pode ser um polímero ou um
gel com poros de tamanhos controlados;
 Promove uma distribuição seletiva e dinâmica das
moléculas;
 Esta técnica utiliza-se em bioquímica para separar
proteínas e bioestruturas de grandes dimensões;
9

10. 10

11.  CROMATOGRAFIA POR PARTIÇÃO
 Também chamada de Cromatografia líquido- líquido;
 Usa a distribuição de acordo com a solubilidade
relativa das moléculas da fase estacionária e móvel.
 Tem como suporte para a FE um sólido inerte, como
sílica gel.
 Quando a FE for apolar, os solutos polares serão
primeiramente separados; No caso contrário, os
solutos polares serão os primeiros a serem eluidos;
11

12.  Usada para a separação de vários componentes
orgânicos, como hidrocarbonetos saturados,
xilenos, dioxano, clorofórmio e cloreto de
metileno.
 Para evitar a perda da fase estacionário, é
indicado que ela seja ligada ao suporte inerte,
dando a este tipo de cromatografia de partição o
nome de cromatografia de fase ligada.
12

13. 13

14.  Os materiais utilizados são relativamente simples
e de fácil manuseio:
 Coluna cromatográfica – Feita de vidro e com
diâmetros diversos;
 Fase estacionária – Suporte sólido, também varia
de acordo com a análise: sílica gel, alumina
(Óxido de Alumínio), Carbonato de Cálcio,
 Eluentes – Podem ser solventes orgânicos ou
inorgânicos, água, álcool, cetonas e etc...
 Béqueres, Pipetas, Algodão e Suporte;
14

15.  COLUNAS CROMATOGRÁFICAS
15

16.  VANTAGENS:
 Alto poder de resolução;
 Separações eficientes e específicas;
 Exige treinamento técnico para uso;
 Análise quantitativa e qualitativa;
 Baixo custo em relação aos métodos mais modernos;
 DESVANTAGENS:
 Separações demoradas, devido ao uso somente da
força da gravidade;
 Precisa de métodos auxiliares, como a
espectrofotometria para as determinações qualitativas
das amostras.
16

17.  1 – Relacione:

1 – Cromatografia por partição
 2 – Cromatografias por exclusão
 3 – Cromatografias por adsorção
 4 – Cromatografias por troca iônica

 ( ) Usa a diferença eletrostática das moléculas para separar as
misturas;
 ( ) Sua fase estacionária é feita de material poroso, cuja
seletividade se dá pelo tamanho molecular;
 ( ) Os coeficientes de solubilidade são o fator principal de
afinidade entre a fase móvel e a estacionária;
 ( ) A Fase estacionária irá interagir com a fase móvel através de
interações fracas de seus componentes.
17

18.  2 – O que é a cromatografia?
 3 – Analise as seguintes afirmações:

I – Toda cromatografia usará somente um tipo específico de fase móvel, visto
que a separação independe do solvente usado e da coluna.
 II – A Cromatografia é um método qualitativo e quantitativo, usado em diversas
análises.
 III – A maior desvantagem da cromatografia líquida consiste no tempo gasto
para fazer a separação dos materiais, visto que se usa a força da gravidade
para arrastas a amostra pela coluna.
 IV - A cromatografia é usada para a separação somente de materiais
inorgânicos, não sendo
 possível separação de moléculas como proteínas e outros biocompostos.
 Estão corretas:

 A) I, II e III
 B) I e IV
 C) Somente II
 D) II e III
 E) Somente IV
18

19.  BRAITHWAITE, A.; SMITH, F. J. Chromatographic Methods. 5.
ed. London: Blackie Academy & Professional, 1996. 559 p.
 COLLINS, Carol H.; BRAGA, Gilberto L.; BONATO, Pierina
S.. Introdução a Métodos Cromatográficos. 7. ed. Campinas:
Unicamp, 1997. 279 p.
 COLINS, Carol H.. Separações em colunas abertas:
cromatografia por exclusão e por bioafinidade. Campinas:
Periódico: Scientia Chromatographica, 2011. 2 p. Disponível
em:<http://www.scientiachromatographica.com/files/v3n2/v
3n2a6.pdf>. Acesso em: 08 maio 2015.
19

20.  MENDHAM, J et al. Análise Química Quantitativa. 6. ed. Rio de
Janeiro: Pearson Longman, 2000. 462 p. Julio Carlos Afonso et. al.
 SILVA JUNIOR, José Godinho da. Cromatografia de
proteínas: Guia teórico e prático. Rio de Janeiro: Interciência,
2004. 111 p.
 PACHECO, S. et al. História da Cromatografia Líquida. Web:
Revista Virtual de Química, 2015. 47 p. Disponível em:
<http://www.uff.br/RVQ/index.php/rvq/article/download/869/598>.
Acesso em: 04 maio 2015.
20