Reações de caracterização de aminoácidos e proteínas

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Reações de caracterização de aminoácidos e proteínas

  1. 1. REAÇÕES DE CARACTERIZAÇÃO DE AMINOÁCIDOS E PROTEÍNAS INTRODUÇÃO Proteínas são macromoléculas naturais com uma ou mais cadeias polipeptídicas , isto é, são polímeros de aminoácidos; constituem 50% ou mais da matéria seca celular, sendo fundamentais tanto no aspecto estrutural como funcional. As proteínas podem ser separadas umas das outras e de outros tipos de moléculas através de métodos baseados em certas propriedades características , tais como solubilidade , peso molecular , carga elétrica e afinidade por determinados compostos. É também possível caracterizar as proteínas por reações de precipitação e coloração. OBJETIVOS Identificação de aminoácidos e ligação peptídica pelos métodos da Ninhidrina e Biureto. MATERIAL  Ovoalbumina 1%  Gelatina 1%  Glicina 1%  H2O Destilada  NaOH 6N  Solução de Ninhidrina  Reagente de biureto  Pipetas 5ml e pêra  Banho-maria a 100°  Tubos de ensaio/ estantes para tubos de ensaio
  2. 2. PROCEDIMENTOS 1° ETAPA: Teste de Ninhidrina (Identificar somente aminoácidos livres) Essa reação é dada pela presença do amino grupo livre e possibilita inclusive a determinação quantitativa do aminoácido – formação de composto colorido. 1. Numerar os 4 tubos de 1 á 4. 2. Colocar em cada tubo 3ml de solução de ovoalbumina, gelatina, glicina e água, respectivamente. 3. Adicionar 1 ml de Ninhidrina. 4. Aquecer em banho-maria por 10 minutos e observar. 2°ETAPA: Teste de Biureto Essa reação é dada por substância que contêm no mínimo duas ligações peptídicas(tripeptídeo). Sendo assim, essa reação é positiva para todas as proteínas , graças as suas ligações peptídicas. O íon cobre fornecido por uma solução diluída e alcalina de CuSO4 se complexa com os grupos aminos as ligações peptídicas desenvolvendo uma coloração violeta. 1. Numerar tubos 4 tubos de 1 á 4 2. Colocar em cada tubo 3ml de solução de ovoalbumina, gelatina, glicina e água, respectivamente. 3. Adicionar 0,5 ml de NaOH e agitar com cuidado. 4. Adicionar a cada tubo 3 gotas de reativo de Biureto.
  3. 3. RESULTADOS ETAPA 1 TUBOS DE ENSAIO EM BANHO MARIA 1ML DE NINHIDRINA + 10 MINUTOS EM BANHO-MARIA Tubo 1 -> Ovoalbumina = NÃO OCORREU REAÇÃO Tubo 2 -> Gelatina = NÃO OCORREU REAÇÃO Tubo 3 -> Glicina = HOUVE REAÇÃO ( VIOLETA ESCURO) Tubo 4 -> H20 = NÃO HOUVE REAÇÃO PEPTÍDICA ETAPA 2 TUBOS DE ENSAIO + 0,5ml DE NaOH + 3 GOTAS DE REATIVO DE BIURETO Tubo 1 -> Ovoalbumina = REAÇÃO PEPTÍDICA Tubo 2 -> Gelatina = REAÇÃO PEPTÍDICA Tubo 3 -> Glicina = NÃO HOUVE REAÇÃO Tubo 4 -> H20 = NÃO HOUVE REAÇÃO

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