1) O documento discute cinco métodos espectrofotométricos para determinação de proteínas totais, incluindo seus princípios, aplicações e desvantagens.
2) Os métodos são: biureto, Lowry, Bradford, Smith e absorção UV. Lowry é o mais sensível porém suscetível a interferências. Biureto é menos sensível.
3) Fatores como tempo de análise, sensibilidade, especificidade e custo devem ser considerados na escolha do método adequado para cada aplicação.
Doseamento Das ProteíNas Pelo MéTodo Do Bioreto (RelatóRio) BioquímicaDavid Quintino
Este documento descreve um experimento para determinar a quantidade de proteína em amostras usando o método de Biureto. Uma curva de calibração foi usada para calcular as concentrações de proteína nas amostras, que foram de 21,17 mg/mL para a amostra 6 e 8,277 mg/mL para a amostra 7.
1. O documento é um relatório sobre uma aula prática de espectrofotometria realizada por alunos da Universidade Estadual do Centro-Oeste.
2. O relatório apresenta os objetivos, materiais e métodos, resultados e discussão da aula prática que incluiu a determinação da curva de absorção, curva de calibração e concentração de proteínas em uma amostra problema utilizando espectrofotometria.
3. Os alunos conseguiram alcançar os objetivos propostos para a aula prática ao
O documento descreve um experimento de volumetria redox usando permanganometria para determinar a concentração de peróxido de hidrogênio em uma amostra. A solução de permanganato de potássio foi padronizada usando oxalato de sódio e depois usada para titular a amostra de peróxido. Os cálculos mostraram que a concentração de H2O2 na amostra foi de 10,06 ± 0,07 L, em concordância com o valor do rótulo.
O documento resume três métodos de volumetria de precipitação - Método de Mohr, Método de Volhard e Método de Fajans. O Método de Mohr é usado para determinar cloretos usando nitrato de prata como titulante e cromato de potássio como indicador. O Método de Volhard quantifica haletos de forma indireta através da titulação de excesso de prata com tiocianato de potássio usando ferro (III) como indicador. O Método de Fajans usa indicadores de adsorção como a fluores
Relatorio de Química Analítica II - Determinação da Acidez total do VinagreDhion Meyg Fernandes
É comum associar o termo ácido a compostos altamente perigosos, letais, corrosivos, de extrema periculosidade. Até certo ponto isto está correto, mas vale ressaltar que, não obstante da realidade científica, isto não é uma verdade absoluta.
1. O documento descreve um experimento sobre cinética química que verifica como diferentes fatores como concentração dos reagentes, temperatura e catalisadores afetam a velocidade de reações.
2. É apresentada a teoria sobre cinética química, incluindo definições de termos como velocidade de reação, ordem de reação, molecularidade e como a temperatura e catalisadores podem afetar as velocidades.
3. O experimento em questão estuda especificamente como a variação da concentração dos reagentes influencia a
Este relatório descreve quatro experimentos realizados para diferenciar elementos, determinar densidade, identificar solubilidade e separar componentes de misturas. As amostras foram analisadas por propriedades como cor, odor e estado para identificar elementos e compostos. A densidade foi calculada pela massa e volume de amostras de zinco. Substâncias foram testadas em solventes para determinar solubilidade. Misturas foram separadas por diferença de solubilidade ou solubilidade seletiva.
Este documento descreve um experimento de laboratório sobre preparação de soluções e determinação de pH. Os estudantes prepararam soluções de NaOH e HCl, testaram o pH com papel de tornassol e indicador de pH, e observaram as mudanças de cor. A conclusão é que os indicadores são úteis para identificar substâncias ácidas e básicas e determinar o pH.
Doseamento Das ProteíNas Pelo MéTodo Do Bioreto (RelatóRio) BioquímicaDavid Quintino
Este documento descreve um experimento para determinar a quantidade de proteína em amostras usando o método de Biureto. Uma curva de calibração foi usada para calcular as concentrações de proteína nas amostras, que foram de 21,17 mg/mL para a amostra 6 e 8,277 mg/mL para a amostra 7.
1. O documento é um relatório sobre uma aula prática de espectrofotometria realizada por alunos da Universidade Estadual do Centro-Oeste.
2. O relatório apresenta os objetivos, materiais e métodos, resultados e discussão da aula prática que incluiu a determinação da curva de absorção, curva de calibração e concentração de proteínas em uma amostra problema utilizando espectrofotometria.
3. Os alunos conseguiram alcançar os objetivos propostos para a aula prática ao
O documento descreve um experimento de volumetria redox usando permanganometria para determinar a concentração de peróxido de hidrogênio em uma amostra. A solução de permanganato de potássio foi padronizada usando oxalato de sódio e depois usada para titular a amostra de peróxido. Os cálculos mostraram que a concentração de H2O2 na amostra foi de 10,06 ± 0,07 L, em concordância com o valor do rótulo.
O documento resume três métodos de volumetria de precipitação - Método de Mohr, Método de Volhard e Método de Fajans. O Método de Mohr é usado para determinar cloretos usando nitrato de prata como titulante e cromato de potássio como indicador. O Método de Volhard quantifica haletos de forma indireta através da titulação de excesso de prata com tiocianato de potássio usando ferro (III) como indicador. O Método de Fajans usa indicadores de adsorção como a fluores
Relatorio de Química Analítica II - Determinação da Acidez total do VinagreDhion Meyg Fernandes
É comum associar o termo ácido a compostos altamente perigosos, letais, corrosivos, de extrema periculosidade. Até certo ponto isto está correto, mas vale ressaltar que, não obstante da realidade científica, isto não é uma verdade absoluta.
1. O documento descreve um experimento sobre cinética química que verifica como diferentes fatores como concentração dos reagentes, temperatura e catalisadores afetam a velocidade de reações.
2. É apresentada a teoria sobre cinética química, incluindo definições de termos como velocidade de reação, ordem de reação, molecularidade e como a temperatura e catalisadores podem afetar as velocidades.
3. O experimento em questão estuda especificamente como a variação da concentração dos reagentes influencia a
Este relatório descreve quatro experimentos realizados para diferenciar elementos, determinar densidade, identificar solubilidade e separar componentes de misturas. As amostras foram analisadas por propriedades como cor, odor e estado para identificar elementos e compostos. A densidade foi calculada pela massa e volume de amostras de zinco. Substâncias foram testadas em solventes para determinar solubilidade. Misturas foram separadas por diferença de solubilidade ou solubilidade seletiva.
Este documento descreve um experimento de laboratório sobre preparação de soluções e determinação de pH. Os estudantes prepararam soluções de NaOH e HCl, testaram o pH com papel de tornassol e indicador de pH, e observaram as mudanças de cor. A conclusão é que os indicadores são úteis para identificar substâncias ácidas e básicas e determinar o pH.
O documento descreve um experimento sobre a precipitação de proteínas da clara de ovo sob diferentes condições. Foram testados a adição de sais, calor e solventes orgânicos. A adição de sais e calor causou a precipitação da albumina, enquanto solventes orgânicos como etanol e acetona também precipitaram a proteína.
Este documento descreve um experimento de calorimetria para determinar a energia de diferentes alimentos, como amendoins e salgadinhos. O experimento usa uma lata de metal preenchida com gelo para manter a temperatura constante enquanto o alimento queima, fazendo com que o gelo derreta. A quantidade de água derretida é medida para calcular o calor liberado pela combustão.
O documento discute estudos de caso e tomada de decisão em nutrição. Ele fornece instruções para a realização de estudos de caso, incluindo análise do problema e proposta de solução, e descreve o processo de tomada de decisão, com etapas como definição do problema, determinação de variáveis e elaboração de modelos para testar soluções.
1. O documento descreve procedimentos para determinar a densidade de amostras sólidas e líquidas.
2. Foram medidas as densidades de vários materiais como pregos, parafusos, clipes, água, álcool e óleo.
3. A densidade pode ser afetada por fatores como temperatura e composição do material.
1. O documento descreve os princípios e procedimentos da titulação volumétrica, incluindo a padronização de soluções de ácido clorídrico e hidróxido de sódio.
2. Foi realizada a titulação de uma amostra de leite de magnésia com ácido clorídrico e o excesso deste foi titulado com hidróxido de sódio para determinar a pureza de hidróxido de magnésio na amostra.
3. Os resultados experimentais permitiram calcular as concentrações das solu
Relatório de preparo e padronização de HCl e H2SO4Ivys Antônio
Este documento descreve a preparação e padronização de soluções de ácido clorídrico (HCl) e ácido sulfúrico (H2SO4). Inicialmente, são apresentados os cálculos para determinar as concentrações teóricas dos ácidos P.A. Em seguida, detalha-se o procedimento experimental para preparar soluções de HCl 0,1 mol/L e H2SO4 0,1 mol/L. Por fim, os resultados incluem a titulação da solução de HCl com uma base padronizada, revelando que a
O documento descreve procedimentos básicos de contagem de microrganismos em laboratório, incluindo técnicas de contagem em placas e a técnica do Número Mais Provável. A técnica de contagem em placas permite contar colônias formadas a partir de células viáveis, enquanto a técnica do NMP estima a densidade de microrganismos viáveis através de uma abordagem estatística.
O documento descreve a história e o funcionamento do microscópio eletrônico de varredura. Foi desenvolvido na década de 1930 e influenciado pelo desenvolvimento da televisão e radar. Produz imagens de alta ampliação através de um feixe de elétrons que varre a superfície da amostra, detectando sinais que são transmitidos como imagem. Permite ampliações de até 300.000x com alta resolução.
DETERMINAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO POR ESPECTOFOTOMETRIATaline Góes
Este relatório descreve um experimento para determinar a concentração, absortividade e absortividade molar de uma solução de permanganato de potássio (KMnO4) usando espectrofotometria. Medições de absorbância foram realizadas em diferentes concentrações de KMnO4 e usadas para construir uma curva de calibração, da qual a concentração de uma amostra desconhecida foi determinada.
Este relatório apresenta os resultados de uma experiência realizada para medir as dimensões e calcular a densidade de duas esferas de vidro de tamanhos diferentes. Foram medidas o diâmetro, a massa, a área, o volume e a densidade das esferas usando um paquímetro e uma balança analítica. Os resultados encontrados para cada esfera estão apresentados em tabelas.
Este documento descreve um experimento de volumetria de precipitação utilizando o método de Mohr para determinar a concentração de cloretos em diferentes amostras. O experimento determinou o teor de cloreto em água da torneira, o teor de NaCl em soro fisiológico e a pureza de um sal de cozinha comercial. Os resultados obtidos estavam de acordo com os valores esperados, com pequenas margens de erro.
1. O documento descreve uma aula prática sobre identificação de amostras sólidas e líquidas através da determinação da densidade.
2. Os alunos aprenderam a medir massa, volume e calcular densidade de amostras usando equipamentos como balança analítica e provetas.
3. A conclusão é que medir densidade requer medição precisa de massa, volume e cálculo da relação entre os dois para identificar a amostra comparando com dados bibliográficos.
O documento discute indicadores de pH naturais e sintéticos, e apresenta experimentos para verificar propriedades de ácidos, bases e óxidos. Extratos de repolho roxo e beterraba são usados como indicadores naturais em soluções ácidas e básicas. Reações com ácido clorídrico, hidróxido de amônio e dióxido de carbono são realizadas para demonstrar propriedades químicas.
Quimica experimental - Relatorio PREPARAÇÃO E PADRONIZAÇÃO DE SOLUÇÕESJessica Amaral
Este relatório descreve os procedimentos experimentais para preparar e padronizar soluções de NaOH e HCl. As soluções foram preparadas por diluição e suas concentrações foram determinadas por titulação com soluções padrão de ácido biftalato de potássio e NaOH.
1) As propriedades coligativas dependem do número de partículas na mistura e não da identidade química. São elas: abaixamento da pressão de vapor, aumento do ponto de ebulição, abaixamento do ponto de solidificação e pressão osmótica.
2) A pressão máxima de vapor de um líquido aumenta com a temperatura, facilitando a passagem das moléculas para o estado vapor.
3) Soluções com solutos não voláteis apresentam pontos de ebulição e congelamento diferentes do solvente
Este documento descreve a história de sucesso de uma comunidade no Maranhão que criou uma farmácia fitoterápica para produzir remédios naturais a partir de plantas medicinais. A farmácia melhorou o acesso à saúde na comunidade e promoveu o desenvolvimento econômico local. O documento discute como a farmácia pode ser aprimorada através de expansão, marketing, pesquisa de novas ervas e capacitação da população rural.
O relatório descreve técnicas de refratometria para determinar o índice de refração e a porcentagem Brix de amostras. Foram medidas amostras de óleos vegetais, soluções de sacarose, alimentos e bebidas usando um refratômetro de Abbé. Os resultados mostraram que o índice de refração e a porcentagem Brix aumentam com a concentração da solução e variam com a temperatura.
Relatório - Volumetria de Complexação: determinação de dureza da água.Dhion Meyg Fernandes
Este relatório descreve um experimento de volumetria de complexação para determinar a dureza da água através da titulação de uma amostra de água com EDTA. O documento apresenta conceitos sobre complexos, complexometria e EDTA, além de descrever os objetivos, materiais, métodos e resultados do experimento.
1) O documento introduz os métodos electroanalíticos, discutindo células electroquímicas, potenciais de célula, e tipos de correntes iônicas.
2) A seção sobre condutimetria explica condutância, condutividade específica e equivalente, e como a condutividade varia com a concentração e interações iônicas. Métodos de análise condutimétrica incluem titulações.
3) A potenciometria é abordada, incluindo células potenciomé
Aula de Métodos e Técnicas de Análise da Informação para Planejamento, julho de 2017, UFABC
Apresentação disponível em: https://youtu.be/cQ8ZfzL3SfI
Bases de dados disponíveis em:https://app.box.com/s/4yl70hj73c9mqyh1jb0l8skics4xf8i1
O documento descreve testes para identificar aminoácidos e ligações peptídicas em proteínas através dos métodos da ninhidrina e biureto. O teste da ninhidrina identificou apenas o aminoácido livre glicina, enquanto o teste de biureto detectou ligações peptídicas nas proteínas ovoalbumina e gelatina.
Este documento fornece orientações para uma aula prática sobre células. Os alunos irão observar diferentes tipos de células vegetais e animais ao microscópio e comparar suas estruturas. Eles devem elaborar um relatório descrevendo os objetivos, fundamentos teóricos, materiais e métodos utilizados, resultados observados e conclusões.
O documento descreve um experimento sobre a precipitação de proteínas da clara de ovo sob diferentes condições. Foram testados a adição de sais, calor e solventes orgânicos. A adição de sais e calor causou a precipitação da albumina, enquanto solventes orgânicos como etanol e acetona também precipitaram a proteína.
Este documento descreve um experimento de calorimetria para determinar a energia de diferentes alimentos, como amendoins e salgadinhos. O experimento usa uma lata de metal preenchida com gelo para manter a temperatura constante enquanto o alimento queima, fazendo com que o gelo derreta. A quantidade de água derretida é medida para calcular o calor liberado pela combustão.
O documento discute estudos de caso e tomada de decisão em nutrição. Ele fornece instruções para a realização de estudos de caso, incluindo análise do problema e proposta de solução, e descreve o processo de tomada de decisão, com etapas como definição do problema, determinação de variáveis e elaboração de modelos para testar soluções.
1. O documento descreve procedimentos para determinar a densidade de amostras sólidas e líquidas.
2. Foram medidas as densidades de vários materiais como pregos, parafusos, clipes, água, álcool e óleo.
3. A densidade pode ser afetada por fatores como temperatura e composição do material.
1. O documento descreve os princípios e procedimentos da titulação volumétrica, incluindo a padronização de soluções de ácido clorídrico e hidróxido de sódio.
2. Foi realizada a titulação de uma amostra de leite de magnésia com ácido clorídrico e o excesso deste foi titulado com hidróxido de sódio para determinar a pureza de hidróxido de magnésio na amostra.
3. Os resultados experimentais permitiram calcular as concentrações das solu
Relatório de preparo e padronização de HCl e H2SO4Ivys Antônio
Este documento descreve a preparação e padronização de soluções de ácido clorídrico (HCl) e ácido sulfúrico (H2SO4). Inicialmente, são apresentados os cálculos para determinar as concentrações teóricas dos ácidos P.A. Em seguida, detalha-se o procedimento experimental para preparar soluções de HCl 0,1 mol/L e H2SO4 0,1 mol/L. Por fim, os resultados incluem a titulação da solução de HCl com uma base padronizada, revelando que a
O documento descreve procedimentos básicos de contagem de microrganismos em laboratório, incluindo técnicas de contagem em placas e a técnica do Número Mais Provável. A técnica de contagem em placas permite contar colônias formadas a partir de células viáveis, enquanto a técnica do NMP estima a densidade de microrganismos viáveis através de uma abordagem estatística.
O documento descreve a história e o funcionamento do microscópio eletrônico de varredura. Foi desenvolvido na década de 1930 e influenciado pelo desenvolvimento da televisão e radar. Produz imagens de alta ampliação através de um feixe de elétrons que varre a superfície da amostra, detectando sinais que são transmitidos como imagem. Permite ampliações de até 300.000x com alta resolução.
DETERMINAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO POR ESPECTOFOTOMETRIATaline Góes
Este relatório descreve um experimento para determinar a concentração, absortividade e absortividade molar de uma solução de permanganato de potássio (KMnO4) usando espectrofotometria. Medições de absorbância foram realizadas em diferentes concentrações de KMnO4 e usadas para construir uma curva de calibração, da qual a concentração de uma amostra desconhecida foi determinada.
Este relatório apresenta os resultados de uma experiência realizada para medir as dimensões e calcular a densidade de duas esferas de vidro de tamanhos diferentes. Foram medidas o diâmetro, a massa, a área, o volume e a densidade das esferas usando um paquímetro e uma balança analítica. Os resultados encontrados para cada esfera estão apresentados em tabelas.
Este documento descreve um experimento de volumetria de precipitação utilizando o método de Mohr para determinar a concentração de cloretos em diferentes amostras. O experimento determinou o teor de cloreto em água da torneira, o teor de NaCl em soro fisiológico e a pureza de um sal de cozinha comercial. Os resultados obtidos estavam de acordo com os valores esperados, com pequenas margens de erro.
1. O documento descreve uma aula prática sobre identificação de amostras sólidas e líquidas através da determinação da densidade.
2. Os alunos aprenderam a medir massa, volume e calcular densidade de amostras usando equipamentos como balança analítica e provetas.
3. A conclusão é que medir densidade requer medição precisa de massa, volume e cálculo da relação entre os dois para identificar a amostra comparando com dados bibliográficos.
O documento discute indicadores de pH naturais e sintéticos, e apresenta experimentos para verificar propriedades de ácidos, bases e óxidos. Extratos de repolho roxo e beterraba são usados como indicadores naturais em soluções ácidas e básicas. Reações com ácido clorídrico, hidróxido de amônio e dióxido de carbono são realizadas para demonstrar propriedades químicas.
Quimica experimental - Relatorio PREPARAÇÃO E PADRONIZAÇÃO DE SOLUÇÕESJessica Amaral
Este relatório descreve os procedimentos experimentais para preparar e padronizar soluções de NaOH e HCl. As soluções foram preparadas por diluição e suas concentrações foram determinadas por titulação com soluções padrão de ácido biftalato de potássio e NaOH.
1) As propriedades coligativas dependem do número de partículas na mistura e não da identidade química. São elas: abaixamento da pressão de vapor, aumento do ponto de ebulição, abaixamento do ponto de solidificação e pressão osmótica.
2) A pressão máxima de vapor de um líquido aumenta com a temperatura, facilitando a passagem das moléculas para o estado vapor.
3) Soluções com solutos não voláteis apresentam pontos de ebulição e congelamento diferentes do solvente
Este documento descreve a história de sucesso de uma comunidade no Maranhão que criou uma farmácia fitoterápica para produzir remédios naturais a partir de plantas medicinais. A farmácia melhorou o acesso à saúde na comunidade e promoveu o desenvolvimento econômico local. O documento discute como a farmácia pode ser aprimorada através de expansão, marketing, pesquisa de novas ervas e capacitação da população rural.
O relatório descreve técnicas de refratometria para determinar o índice de refração e a porcentagem Brix de amostras. Foram medidas amostras de óleos vegetais, soluções de sacarose, alimentos e bebidas usando um refratômetro de Abbé. Os resultados mostraram que o índice de refração e a porcentagem Brix aumentam com a concentração da solução e variam com a temperatura.
Relatório - Volumetria de Complexação: determinação de dureza da água.Dhion Meyg Fernandes
Este relatório descreve um experimento de volumetria de complexação para determinar a dureza da água através da titulação de uma amostra de água com EDTA. O documento apresenta conceitos sobre complexos, complexometria e EDTA, além de descrever os objetivos, materiais, métodos e resultados do experimento.
1) O documento introduz os métodos electroanalíticos, discutindo células electroquímicas, potenciais de célula, e tipos de correntes iônicas.
2) A seção sobre condutimetria explica condutância, condutividade específica e equivalente, e como a condutividade varia com a concentração e interações iônicas. Métodos de análise condutimétrica incluem titulações.
3) A potenciometria é abordada, incluindo células potenciomé
Aula de Métodos e Técnicas de Análise da Informação para Planejamento, julho de 2017, UFABC
Apresentação disponível em: https://youtu.be/cQ8ZfzL3SfI
Bases de dados disponíveis em:https://app.box.com/s/4yl70hj73c9mqyh1jb0l8skics4xf8i1
O documento descreve testes para identificar aminoácidos e ligações peptídicas em proteínas através dos métodos da ninhidrina e biureto. O teste da ninhidrina identificou apenas o aminoácido livre glicina, enquanto o teste de biureto detectou ligações peptídicas nas proteínas ovoalbumina e gelatina.
Este documento fornece orientações para uma aula prática sobre células. Os alunos irão observar diferentes tipos de células vegetais e animais ao microscópio e comparar suas estruturas. Eles devem elaborar um relatório descrevendo os objetivos, fundamentos teóricos, materiais e métodos utilizados, resultados observados e conclusões.
Aula prática reações qualitativa par aminoácidos e proteínasMauro Perez
Este documento descreve protocolos para identificar aminoácidos e proteínas através de reações químicas específicas. A reação de Biureto é usada para detectar ligações peptídicas através da formação de uma cor violeta ou rosa. A reação de ninhidrina produz uma cor púrpura ou amarela ao reagir com grupos amina livres. A reação xantoproteica gera compostos coloridos ao reagir proteínas contendo grupos fenil com ácido nítrico.
Este documento é um livro intitulado "Biologia: aulas práticas" que fornece 23 atividades experimentais de biologia para professores levarem aos alunos. O livro foi organizado por Bianca Caroline Rossi-Rodrigues e Eduardo Galembeck e publicado pela Editora Eduardo Galembeck em 2012 na Universidade Estadual de Campinas.
Este documento fornece instruções para uma atividade experimental de observação ao microscópio de células da epiderme da cebola. Os alunos irão cortar e preparar amostras da epiderme da cebola, aplicar água iodada como corante, e observar as células sob o microscópio para identificar estruturas como a parede celular, membrana plasmática e citoplasma.
O documento descreve experimentos para identificar proteínas, glícidos e lípidos em alimentos. Proteínas foram identificadas no leite quando os reagentes mudaram para violeta. Glícidos como amido foram identificados na batata, pão e cenoura quando o lugol mudou a cor para azul. Lípidos foram identificados no azeite quando o Sudão III formou uma película vermelha.
1) O documento fornece instruções passo-a-passo para a observação de células humanas em um esfregaço de mucosa bucal sob microscópio.
2) Inclui etapas como raspar a bochecha, fazer o esfregaço na lâmina de vidro, corar com azul de metileno e observar ao microscópio.
3) Também fornece sugestões para aplicar o protocolo em sala de aula e anexos com questões e atividades correlatas para os alunos.
Este documento descreve um experimento sobre a membrana plasmática de amostras de batata mergulhadas em soluções de sacarose com diferentes concentrações. Os resultados mostraram que as amostras em soluções hipotônicas aumentaram de volume, enquanto as em soluções hipertônicas diminuíram de volume e ficaram mais secas, devido à osmose da água através da membrana plasmática.
Apostila 1 revisão - Imunologia BásicaGenecy Costa
1. O documento descreve os fundamentos da imunidade inata, com ênfase nos mecanismos moleculares e celulares da resposta inflamatória. 2. A imunidade inata atua como primeira linha de defesa do organismo através de barreiras, células e moléculas que reconhecem padrões moleculares associados a patógenos. 3. Células como macrófagos, neutrófilos e células dendríticas desempenham um papel importante na fagocitose de patógenos e liberação de mediadores inflamató
O documento discute a utilização de biossensores, dispositivos que integram um bioreceptor e um transdutor para produzir um sinal proporcional à concentração de um analito. Biossensores podem automatizar processos químicos e melhorar o tratamento de pacientes de forma precisa e sem falhas humanas, principalmente no monitoramento da glicose. O documento revisa diferentes tipos e aplicações de biossensores.
O documento discute espectrofotometria e métodos de purificação e caracterização de proteínas, incluindo a lei de Lambert-Beer, espectrometria de absorção atômica, diálise, cromatografia em coluna, cromatografia de troca iônica, cromatografia de afinidade, HPLC e eletroforese. Vários métodos geralmente precisam ser usados sequencialmente para purificar completamente uma proteína com base em diferentes propriedades.
Este documento compara as bulas de duas marcas de tiras reagentes utilizadas no exame químico de urina, Roche Combur10 Test® UX e Bayer Multistix® 10 SG. Foram analisados os princípios utilizados para cada parâmetro, sensibilidade, intervalos de leitura e possíveis interferências. Diferenças nos reagentes e informações fornecidas foram observadas.
Este documento compara a digestibilidade protéica in vitro e in vivo de diferentes cultivares de feijão armazenados por 30 dias. Onze variedades brasileiras de feijão foram testadas usando quatro métodos de digestibilidade in vitro e ensaios biológicos com ratos para medir a digestibilidade in vivo. Os resultados mostraram que o método desenvolvido por Cruz teve a maior correlação com os valores de digestibilidade in vivo, com coeficientes de correlação de 0,83 e 0,91 para digestibilidade verdadeira e aparente, respectivamente.
1. O documento apresenta as informações sobre a 4a edição do livro "Métodos Físico-Químicos para Análise de Alimentos", incluindo sua estrutura em capítulos, objetivos, novos métodos incorporados e adequações realizadas.
2. A introdução destaca a importância da análise bromatológica para avaliar a qualidade e segurança dos alimentos e a necessidade de atualização constante dos métodos analíticos.
3. O documento descreve as principais mudanças realizadas nesta 4a edição em rel
Livro metodos fisico quimicos para análise de alimentosRenata Rabelo
Este documento descreve a história das edições do livro "Métodos Físico-Químicos para Análise de Alimentos" publicado pelo Instituto Adolfo Lutz desde 1967. A quarta edição, lançada em 2008, inclui novos métodos e atualiza métodos antigos para atender às novas exigências legais sobre qualidade e segurança de alimentos no Brasil. O livro tem o objetivo de fornecer métodos analíticos confiáveis e acessíveis para laboratórios de saúde pública.
Analise de alimentos Instituto Adolf Lutz. 2008Natália Duarte
1. O documento apresenta as informações sobre a 4a edição do livro "Métodos Físico-Químicos para Análise de Alimentos", incluindo sua estrutura em capítulos, objetivos, novos métodos incorporados e adequações realizadas.
2. A introdução destaca a importância da análise bromatológica para avaliar a qualidade e segurança dos alimentos e a necessidade de atualização constante dos métodos analíticos.
3. O documento descreve as principais mudanças realizadas nesta 4a edição em rel
1) O documento faz uma revisão sistemática da literatura sobre os riscos do consumo de aditivos alimentares à saúde.
2) Estudos mostram que o consumo de alguns corantes artificiais por crianças excedeu os níveis diários aceitáveis estabelecidos, representando riscos à saúde infantil.
3) Crianças são particularmente vulneráveis aos efeitos dos aditivos devido à imaturidade fisiológica e à dificuldade de controlar a ingestão.
11 revisao-de-literatura-uso-de-prebioticos-probioticos-e-simbioticos-nos-pre...Glorinha E David
Este artigo revisa o uso de prebióticos, probióticos e simbióticos nos períodos pré e pós-operatório de pacientes com câncer colorretal. A revisão encontrou sete estudos clínicos randomizados que demonstraram benefícios do uso desses suplementos, como melhoria da qualidade de vida e exames laboratoriais, além de redução de bactérias patogênicas e tempo de internação. Contudo, são necessários mais estudos prospectivos para fornecer dados mais conclusivos sobre os efeitos des
O documento discute três artigos científicos sobre temas relacionados à bioética ambiental e ética animal. O primeiro artigo avalia os impactos ambientais causados por estradas na biodiversidade. O segundo analisa o uso de animais como medicamentos e tratamentos estéticos. O terceiro testa armadilhas para capturar caramujos invasores.
1. A água se ioniza através da reação ácido-base, formando íons hidrogênio e hidróxido. Isto permite que a água atue como ácido e base fraca.
2. O pH é uma medida da concentração de íons hidrogênio e está relacionado à constante de dissociação de ácidos e bases através da equação de Henderson-Hasselbach.
3. Tampões são sistemas que resistem à variações de pH quando pequenas quantidades de ácido ou base são adicionadas, consistindo de um á
O CEMSA é um laboratório fundado em 2008 que oferece serviços de espectrometria de massas para áreas como farmacêutica, cosméticos e ambiental. O laboratório realiza testes in vitro de ADME para auxiliar no desenvolvimento de novos fármacos e oferece cursos e treinamentos em espectrometria de massas.
O documento discute exames laboratoriais realizados por enfermeiros, incluindo quais exames podem solicitar de acordo com resoluções do COFEN. Detalha anticoagulantes usados em exames, como EDTA, heparina e citrato, e fases do processo de exames laboratoriais como pré-analítica, analítica e interpretação de resultados.
1. O documento discute métodos comumente utilizados em farmacogenética, incluindo procedimentos para obtenção e armazenamento de amostras biológicas, métodos de extração de ácidos nucleicos e técnicas de triagem de mutações e polimorfismos genéticos como PCR, SSCP e RFLP.
2. São descritos métodos de extração de DNA e RNA de amostras de sangue, tecidos e células para análises moleculares.
3. São apresentados diversos métodos de triagem
Este documento descreve uma revisão da literatura sobre o tratamento da acne grave com isotretinoína. Ele resume 11 ensaios clínicos randomizados e 2 diretrizes terapêuticas que avaliaram a eficácia e segurança da isotretinoína no tratamento da acne grave e resistente a outros tratamentos.
O documento discute testes in vitro com células para avaliar alimentos funcionais. Estes testes podem analisar a absorção, metabolismo, toxicidade e efeitos de compostos bioativos sem usar animais ou humanos. Exemplos de testes incluem ensaios com células Caco-2, ROS, LDH e testes de atividade enzimática como SOD e catalase.
O documento apresenta um resumo de uma dissertação de mestrado sobre o Sistema de Classificação Biofarmacêutica (SCB) e as possibilidades de isenção de estudos de biodisponibilidade. O trabalho revisa a literatura sobre o SCB, discutindo sua aplicação para prever a biodisponibilidade de fármacos e como tem sido usado pelas agências regulatórias para isentar certos medicamentos de estudos clínicos. No Brasil, o SCB ainda não é aceito para isenção de estudos, devido à falta
Esta unidade introduz os principais conceitos da bioquímica, incluindo: 1) A lógica molecular da vida é baseada nas propriedades únicas da água, como a formação de pontes de hidrogênio; 2) A água possui propriedades cruciais para a vida, como sua polaridade e capacidade de formar estruturas organizadas; 3) Os compostos orgânicos que constituem os seres vivos incluem proteínas, carboidratos e lipídeos.
1. DIVULGAÇÃO
DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS VIA ESPECTROFOMETRIA: VANTAGENS E DESVANTAGENS DOS
MÉTODOS EXISTENTES
Dimas A. M. Zaia*
Departamento de Química - CCE - Universidade Estadual de Londrina - 86051-970 - Londrina - PR
Cássia Thaïs B. V. Zaia
Departamento de Ciências Fisiológicas - CCB - Universidade Estadual de Londrina - 86051-970 - Londrina - PR
Jaim Lichtig
Instituto de Química - Universidade de São Paulo - 05599-970 - São Paulo - SP
Recebido em 23/7/97; aceito em 19/6/98
DETERMINATION OF TOTAL PROTEIN BY SPECTROPHOTOMETRY: ADVANTAGES AND
DISADVANTAGES OF PROPOSED METHODS. Spectrophotometric determination of total pro-tein
is used in several areas such as clinical analysis, food science and technology, biochemistry,
protein chemistry, physiology. Five spectrophotometric methods are mostly used: biuret, Lowry,
Bradford, Smith and UV absorption. In this review a general overview of these methods is pre-sented
(interferences, applications); other methodologies are also discussed.
Keywords: protein; spectrophotometry; protein analysis.
INTRODUÇÃO
O desenvolvimento de metodologias e estudos comparativos
de metodologias espectrofotométricas para a determinação de
proteínas totais sempre foram de grande interesse para profis-sionais,
tanto ligados à indústria de alimentos, laboratórios de
análises clínicas, como para pesquisadores de diversas áreas.
Apesar de os profissionais serem de diferentes áreas e, portan-to,
com objetivos diferentes, observamos que os questionamen-tos
são sempre os mesmos: Quais são os principais interferen-tes
no método que estou usando? Qual é o método mais ade-quado
para meu caso? Qual é o princípio envolvido no método
que estou usando?
Esta revisão, portanto, tem por objetivo abordar diversos
aspectos dos métodos espectrofotométricos utilizados para a
determinação de proteínas totais em diferentes meios.
As proteínas desempenham papéis extremamente importan-tes,
na maioria dos processos biológicos, atuando como enzi-mas,
hormônios, neurotransmissores, transportadores através
das membranas celulares e outros1,2.
O desenvolvimento de metodologias para determinar pro-teínas
tem, cada vez mais, se tornado de fundamental rele-vância
em várias áreas do conhecimento, como por exemplo,
em análises clínicas1, favorecendo o diagnóstico de certas
doenças correlacionadas com a alteração da quantidade de
proteínas nos fluidos biológicos; em nutrição animal3, ressal-tando
o aproveitamento racional de nutrientes; em problemas
relacionados à nutrição humana1,4,5, como obesidade, anorexia
nervosa, desnutrição, devendo as dietas apresentar teor balan-ceado
de proteínas; em tecnologia e ciências de alimentos6,
objetivando o aproveitamento racional da matéria prima e o
melhoramento dos produtos novos e já existentes; em ecolo-gia7,
relacionando o comportamento alimentar com a quanti-dade
de proteína ingerida dos alimentos, favorecendo o en-tendimento
dos vários aspectos da vida dos animais silves-tres;
e na área de química de proteínas objetivando purificar
novas proteínas e enzimas8.
Estas são apenas algumas das mais importantes aplicações
analíticas para metodologias de determinação de proteínas to-tais;
obviamente, existem muitas outras de grande relevância.
Os métodos para a determinação da concentração de proteí-nas
totais são muito variados, no entanto, as metodologias mais
utilizadas são as espectrofotométricas no ultra-violeta e no vi-sível
(UV-Vis).
MÉTODOS ESPECTROFOTOMÉTRICOS MAIS
UTILIZADOS PARA A DETERMINAÇÃO
DE PROTEÍNAS TOTAIS
Muitos métodos espectrofotométricos, ao longo dos anos,
têm sido propostos para a determinação de proteínas totais,
mas não existe uma metodologia considerada de uso universal
para todos os meios. Os métodos geralmente mais utilizados
são o do biureto9, de Lowry10, do “Coomassie brilliant blue”
BG-250 ou reagente de Bradford11, do BCA ou reagente de
Smith12, e de absorção de proteínas no ultravioleta13. A seguir
serão discutidas as vantagens e desvantagens destas cinco
metodologias.
O MÉTODO DE BIURETO
Princípio
As origens do método do biureto podem ser traçadas desde a
proposta inicial de Autenrieth, em 1915; posteriormente diversos
autores propuseram modificações do mesmo, sendo, atualmente, a
proposta metodológica de Gornall e cols9. a mais utilizada.
O método se baseia na reação do reativo do biureto, que é
constituído de uma mistura de cobre e hidróxido de sódio com
um complexante que estabiliza o cobre em solução, sendo o
tartarato de sódio o recomendado por Gornall e cols.9. O co-bre,
em meio alcalino, reage com proteínas formando um com-plexo
quadrado planar com a ligação peptídica. O produto de
reação apresenta duas bandas de absorção, uma em 270 nm e
outra em 540 nm. Apesar da banda na região de 270 nm au-mentar
em seis vezes a sensibilidade do método do biureto14, a
banda na região de 540 nm é a mais utilizada para fins analí-ticos,
porque diversas substâncias, normalmente presentes na
maioria dos meios analisados, absorvem na região de 270 nm
causando muita interferência no método.
Aplicações
O método de biureto tem sido aplicado para determinar a
QUÍMICA NOVA, 21(6) (1998) 787
2. concentração de proteínas totais em diversos meios, sendo
eles: soro ou plasma sangüíneo15,16,18,19, líquido cérebro espi-nhal
(líqüor)20,21, urina22-24, alimentos25-29, saliva30, fibrino-gênio31
e tecido animal32. O método de biureto tem sido, tam-bém,
utilizado em análise por injeção em fluxo19, assim como
em alguns métodos cinéticos21,33. Apesar de ser rápido, utili-zar
reagentes de baixo custo e não apresentar grande variação
da absortividade específica para diferentes proteínas9,20,21,30,
este método não é muito sensível, como foi destacado por
diversos autores20,24,30, colocando-o em grande desvantagem,
em relação a outras metodologias, e por isto tem sido, ao
longo dos anos, substituído por métodos mais sensíveis. Mes-mo
assim, o método de biureto continua sendo recomendado
para a determinação da concentração de proteínas totais em
plasma sangüíneo pela Associação Americana de Análises
Clínicas e por diversos autores15,16,34, bem como para a deter-minação
de proteínas totais em saliva30 e leite29, quando com-parado
com outros métodos.
Interferentes
Verifica-se que o método de biureto está sujeito à interfe-rência
de substâncias que possam reagir com os íons cobre
(II). Na tabela 1 estão listados alguns interferentes; os métodos
para sua eliminação variam conforme o caso, como discutido
nas referências citadas nessa tabela, no entanto, recomendamos
a precipitação das proteínas com ácido tricloroacético e poste-rior
solubilização para determinação das mesmas.
O MÉTODO DE LOWRY
Princípio
O método que atualmente conhecemos como de Lowry e
cols.10, para a determinação de proteínas totais, foi original-mente
proposto por Wu35, em 1922, sendo esta a metodologia
mais utilizada para a determinação de proteínas. O princípio
do método baseia-se numa mistura contendo molibdato,
tungstato e ácido fosfórico, (reagente Folin-Ciocalteau), que
sofre uma redução quando reage com proteínas, na presença do
catalisador cobre (II), e produz um composto com absorção
máxima em 750 nm.
Chou e Goldstein36 e Legler e cols.37 estudaram extensiva-mente
o mecanismo de redução do reagente de Folin-Ciocalteau
por proteínas, peptídeos ou aminoácidos. Estes autores36,37 su-gerem
que esta redução ocorra diretamente através das cadeias
laterais de alguns aminoácidos (tirosina, triptofano, cisteína,
asparagina e histidina), que contribuem com quatro elétrons,
ou através da retirada de dois elétrons de cada unidade tetra-peptídica
dos peptídeos e proteínas, que é facilitada pela for-mação
do quelato entre o cobre (II) e peptídeos/proteínas.
Aplicações
A principal vantagem do método de Lowry é a sua alta
sensibilidade e, por isto, tem sido utilizado para a determina-ção
da concentração de proteínas totais em diversos meios,
sendo eles: líqüor20,38, plasma sangüíneo34,39,40, saliva huma-na30,
tecido animal32,41-43, plantas44-46, suco biliar47, membra-nas48-
50, leite humano28,51 e produtos alimentícios52. Sargent53
propôs uma modificação no método de Lowry que possibilitou
o aumento da sensibilidade em cinqüenta vezes. Tal modifica-ção
está baseada no fato de que o verde de malaquita reage
com o azul de molibdato produzido no método de Lowry e o
produto desta reação absorve fortemente em 690 nm aumen-tando
a sensibilidade do método de Lowry.
Devido ao seu extenso uso, o método de Lowry e cols.10
tem sido utilizado em diversos tipos de equipamentos auto-matizados43,54-
57.
Em estudos comparativos de métodos, alguns autores reco-mendam
a utilização da metodologia proposta por Lowry e
cols.10 para determinar proteínas totais em líqüor38, tecido ani-mal41
e tecido vegetal45. Os autores38,41,45, de maneira geral,
recomendam o método de Lowry, pois no estudo comparativo
de metodologias o mesmo mostrou-se mais sensível, com me-lhor
exatidão, menor consumo de amostra e, dependendo do
caso, menos suscetível a alguns tipos de interferentes.
Interferentes
Apesar do método de Lowry e cols.10 apresentar uma gran-de
sensibilidade para proteínas, o mesmo possui algumas des-vantagens,
tais como: estar sujeito a muitos interferentes,
apresentar longo tempo de análise, possuir absortividade es-pecífica
altamente variável para diferentes proteínas, e seguir
a Lei de Beer-Lambert apenas numa pequena faixa de con-centração
de proteínas.
Várias modificações no método de Lowry têm sido propos-tas
para resolver os problemas acima citados. Para aumentar a
velocidade da reação, Shakir e cols.58 recomendam aquecer a
amostra, por 3 minutos, a 37°C, após a adição de sulfato de
cobre alcalino, e por mais três minutos, após a adição do
Tabela 1. Algumas substâncias que interferem na determinação de proteínas totais pelo método de biureto9.
Interferentes Comentários Referências
Bilirrubina Absorve em 540 nm, sério interferente acima de 70 mg/L. 9, 20, 21
Amônio Sulfato de amônio usado como precipitante de 9
proteínas; em meio alcalino amônia complexa cobre.
Lipídios Provoca turbidez nas amostras, com conseqüente 32
aumento da absorção das mesmas.
Hemoglobina Aumenta a absorção das amostras. 9, 21
Dextran-40 e 70 Causa turbidez nas amostras, em meio alcalino 16-18
com tartarato, devido à formação de um complexo insolúvel
entre o dextran e cobre.
Peptídeos e aminoácidos Reagem com cobre, sendo interferentes em métodos 33
livres (His, Ser, Thr) baseados em cinética de reação.
Melanina Provoca falso positivo 72
Tampão tris-HCl e glicose Reage com o cobre presente no reativo de biureto. 33
Lactose Provoca falso positivo 29
Amido Provoca falso positivo 26
788 QUÍMICA NOVA, 21(6) (1998)
3. reagente de Folin-Ciocalteau. Larson e cols.59 recomendam a
adição de tri-1,4-dimercaptobutanodiol, 3 minutos após a adi-ção
do reagente Folin-Ciocalteau, com o objetivo de aumentar
a velocidade de reação e eliminar a etapa de 30 minutos de
espera. Alam60 propõe um rígido controle do pH para diminuir
o tempo de análise, estabilizar o produto formado e uniformi-zar
as absortividades específicas das diferentes proteínas.
Hartree61 fez várias modificações no método de Lowry
melhorando a faixa de linearidade e uniformizando as absorti-vidades
específicas para algumas proteínas; estas modifica-ções61
são as mais utilizadas, apesar de tornar o método de
Lowry mais trabalhoso no preparo dos reagentes.
Stauffer62 recomenda a construção do gráfico de log Abs
versus log microgramas de proteína e Hess e cols.63 recomen-dam
o uso de alta concentração do reagente Folin-Ciocalteau.
Tais procedimentos, segundo estes autores, diminuem o tempo
de análise, uniformizam as absortividades específicas para al-gumas
proteínas e/ou aumentam a faixa de linearidade do mé-todo
de Lowry e cols.10.
Diversas substâncias interferentes no método de Lowry são
citadas na literatura; estas normalmente causam aumento na
absorbância do branco, diminuição da absortividade específica
ou formação de algum tipo de precipitado. Os interferentes mais
comuns estão listados na tabela 2, tendo-se ainda, como fonte
de consulta, uma lista preparada por Bensadoun e Weinstein64.
Para a eliminação da maioria dos interferentes citados na
tabela 2, sugere-se a precipitação das proteínas utilizando-se:
ácido tricloroacético e co-precipitantes42,64,65, misturas de
metanol-clorofórmio-água48 ou hexano-isopropanol49. Se o in-terferente
for composto de enxofre, como mercaptanas, por
exemplo, aconselha-se o uso de iodo acetato66 ou a secagem a
vácuo da amostra67, se for lipídeo ou melanina sugere-se a
adição de detergentes41,68,69. Verifica-se que a reação de Lowry
é fotossensível70 recomendando-se exposição uniforme de luz
aos tubos.
Apesar de todos os esforços para melhorar o método de
Lowry, isto é, diminuir o tempo requerido para a análise, au-mentar
a faixa de linearidade para a lei de Beer e tornar mais
homogênea as absortividades específicas para diferentes pro-teínas,
o mesmo continua moroso e sujeito a inúmeros interfe-rentes
e, nos últimos anos, está sendo substituído por outros
métodos, tais como, o método de Bradford e o método de Smith
ou do BCA.
O MÉTODO DE BRADFORD
Princípio
O método de Bradford11 é uma técnica para a determinação
de proteínas totais que utiliza o corante de “Coomassie brilliant
blue” BG-250.
Este método é baseado na interação entre o corante BG-250
e macromoléculas de proteínas que contém aminoácidos de
cadeias laterais básicas ou aromáticas. No pH de reação, a
interação entre a proteína de alto peso molecular e o corante
BG-250 provoca o deslocamento do equilíbrio do corante para
a forma aniônica, que absorve fortemente em 595 nm76.
Aplicações
O método de Bradford11, é mais rápido e sensível que o de
Lowry e cols.10 e tem sido utilizado para a determinação de
proteínas totais em diversos meios: plasma ou soro
sangüíneo34,39, líqüor20,77-81, saliva humana30, produtos ali-mentícios82,
leite humano28,29,83, tecidos de plantas44,45, sus-pensões
de células84-86, avidina e estreptavidina87, uri-na22,24,79,88-
90 e detergentes91.
Alguns autores recomendam o método de Bradford para a
determinação de proteínas totais em leite humano83, líqüor80 e
urina24. No entanto, com relação à urina, diversos autores des-tacam
dois fatores contra a utilização desta metodologia, sendo
um deles a dependência entre o número de diluições da amos-tra
e o resultado da concentração de proteína obtido e, o outro,
a presença de proteínas de baixo peso molecular, subestimando
a concentração de proteínas totais na urina, principalmente, de
pacientes com proteinúria22,88-90,92-96.
Tabela 2. Algumas substâncias que interferem na determinação de proteínas totais pelo método de Lowry e cols.10.
Interferentes Comentários Referências
Compostos fenólicos Reagem com o reativo de Folin-Ciocalteau resultando 10, 44, 57, 73
em falso positivo.
Lipídios Provocam turbidez das amostras. 10, 41, 48, 49, 69, 71
Detergentes Provocam a formação de precipitado. 41, 48, 49, 57, 61, 65
Ácido úrico Reage com o reativo de Folin-Ciocalteau resultando em 10, 73
falso positivo.
Guanina e xantina Reagem com o reativo de Folin-Ciocalteau resultando 10, 73
em falso positivo.
Sulfato de amônio Diminui a absortividade devido à alteração do pH da 10, 57
amostra.
Melanina Reage com o reativo de Folin-Ciocalteau resultando 68, 72
em falso positivo.
Bilirrubina Aumenta a absorção da amostra. 20
4-metilumbeliferona Reage com o reativo de Folin-Ciocalteau resultando em 47
falso positivo.
Mercaptanas e cisteína Reagem com o reativo de Folin-Ciocalteau resultando 48, 49, 66, 67, 73
em falso positivo.
Tampão tris-HCl Reage com o reativo de Folin-Ciocalteau resultando em 57, 73
falso positivo.
Açúcares Reagem com o reativo de Folin-Ciocalteau resultando 57, 61, 73-75
em falso positivo.
RNA Aumenta a absorção das amostras 65, 73
QUÍMICA NOVA, 21(6) (1998) 789
4. Algumas metodologias utilizando equipamentos automatiza-dos80,97-
101 estão tornando este método mais rápido.
Interferentes
Apesar do método de Bradford11 ser mais rápido, sensível e
estar sujeito a um número bem menor de interferentes que o
método de Lowry e cols.10, o mesmo apresenta algumas des-vantagens,
tais como a variação da absortividade específica para
diferentes proteínas, devido à baixa solubilidade75,102 ou baixo
peso molecular das mesmas22,88-90, e fornecimento de resulta-dos
nem sempre reprodutíveis devido ao grau de pureza do
corante BG-250 que varia conforme a procedência, sendo reco-mendável
a padronização das condições de reação para cada
lote de corante adquirido.
Para tentar tornar mais uniforme a absortividade específica
de diferentes proteínas, algumas alternativas foram sugeridas:
aumentar a concentração do corante103; aumentar a solubiliza-ção
das proteínas que vão reagir com o corante, usando deter-gentes24,79,84,86,104-
106, hidróxido de sódio84,107 ou fenol108; ou
aquecer com uréia e 2-mercaptoetanol109. Entretanto, no caso
de amostras com proteínas de baixo peso molecular, não reco-mendamos
a utilização deste método.
A falta de linearidade na lei de Beer-Lambert11,107,110 tem
sido, também, observada devido a uma variação do pH quando
da adição da amostra ao reagente BG-250.
Existem poucas substâncias, citadas na literatura, que são
interferentes no método de Bradford. Estes interferentes nor-malmente
reagem com as proteínas impedindo a reação com
o corante BG-250 ou reagem com o corante causando au-mento
na absorbância. A tabela 3 mostra os interferentes
mais comuns ao método de Bradford11. Os métodos de
eliminação destes interferentes variam conforme o caso,
como discutido nas referências citadas nessa tabela, no
entanto, recomendamos a precipitação das proteínas com
ácido tricloroacético.
O MÉTODO DE SMITH OU BCA
Princípio
O método proposto por Smith e cols.12, também conhecido
por método do ácido bicinchoninico (BCA 4,4'-dicarboxi-2,2'-
biquinolina), se baseia na reação de cobre (II) com proteí-nas,
em meio alcalino, produzindo cobre (I) e formando um
complexo com o BCA, que absorve fortemente na região de
560 nm.
No entanto, Legler e cols.37, estudando o papel catalisa-dor
do cobre, em meio alcalino, na reação entre proteínas e
o reativo de Folin-Ciocauteau, detectaram formação de um
intermediário de cobre (III) com peptídeos, porém não de-tectaram
cobre (I), como estabelecido por Smith e cols.12,
devendo, portanto, ser este mecanismo melhor estudado
para se estabelecer qual ou quais intermediários de cobre
são formados.
Aplicações
Este método tem a vantagem de ser mais simples no prepa-ro
dos reagentes, tão sensível quanto o método de Lowry e
cols.10 e relativamente rápido, sendo aplicado na determinação
da concentração de proteínas totais em saliva30, proteínas celu-lares41,113,
interferons75, leite humano28 e determinação de gru-pos
funcionais114.
O método de Smith e cols.12 tem sido recomendado em es-tudos
de comparação de metodologias para a determinação de
proteínas totais em leite humano28 e células113. Esta metodolo-gia
também tem sido adaptada para a determinação de proteí-nas
totais utilizando-se equipamentos automatizados115,116.
Interferentes
O método de Smith e cols.12 possui algumas desvantagens,
como a dependência da temperatura de incubação das amos-tras12,115,
a variação da absortividade específica para diferentes
proteínas30,75,115 e a variação da absorbância com o tempo.
Recomendamos, portanto, um rígido controle no tempo de lei-tura
das amostras, após a incubação das mesmas.
Os interferentes, em potencial, do método de Smith e cols.12
são aquelas substâncias que reagem com os íons cobre (reações
de óxido-redução, formação de complexos, precipitação) ou com
o reativo de BCA. A tabela 4 mostra os interferentes mais co-muns
no método de Smith e cols.12. Os métodos de eliminação
destes interferentes variam conforme o caso, como discutido nas
referências citadas nessa tabela; em muitas situações recomen-damos
a precipitação das proteínas com ácido tricloroacético.
Tabela 3. Algumas substâncias que interferem na determinação de proteínas totais pelo método de Bradford11.
Interferentes Comentários Referências
Tolbutamida Provoca falso positivo. 89
Uréia Fornece resultado falso positivo, acima de 45 g/L. 89, 107, 109
Cloreto de sódio e de Fornecem resultado falso negativo, acima de 1 M 85, 89, 107
potássio
Detergentes (Triton X- A larga banda de absorção em 650 nm, devido a reação 11, 76, 84-86, 91, 104, 107
100, SDS, Tween-20) entre o corante e os detergentes, interfere na banda em
595 nm, resultando em falso positivo.
Ciclodextrinas Formam um complexo de inclusão com o corante BG- 74
250, resultando em falso positivo.
Polifenóis e polifenóis Reagem com as proteínas impedindo a formação do 11, 44, 45, 111
oxidases complexo das mesmas com o corante BG-250.
2-mercaptoetanol + Diminuem a absorção da amostra. 11, 109
guanadina
Glicerol Provoca falso positivo. 11, 85, 107
Lipídios Causam turbidez na amostra. 85
Cloropromazina Provoca falso positivo. 112
Fluoreto Diminui a absorção da amostra. 78
790 QUÍMICA NOVA, 21(6) (1998)
5. Tabela 4. Algumas substâncias que interferem na determinação de proteínas totais pelo método de Smith e cols.12.
Interferentes Comentários Referências
Açúcares em geral Provocam parcial redução do cobre (II) resultando em 12, 74, 75, 113,
falso positivo. 116, 117
EDTA Complexa íons cobre (II). 12
Lipídios Reação entre BCA e lipídios resulta em falso positivo 41, 71
Sulfato de amônio Resulta falso negativo. 12, 117
Mercaptoetanol e Provocam redução do cobre (II) resultando em falso 117
dithiothreitol positivo.
Peróxido de hidrogênio Reação entre BCA e peróxido de hidrogênio resulta em 118
falso positivo.
Vitamina C e Provocam redução do cobre (II) resultando em falso 112
paracetemol positivo.
Cloropromazina Provoca turbidez na amostra. 112
Penicilinas Provocam falso positivo. 112
MÉTODO DE ABSORÇÃO NO ULTRA-VIOLETA
Princípio
Este método é baseado no fato de que as proteínas mostram
absorção na região de 280 nm e na região abaixo de 220 nm,
sendo a primeira devido a diversos aminoácidos (fenilalanina,
cisteína, cistina, metionina, triptofano, histidina e tirosina), e a
segunda devido à ligação peptídica13. No entanto, em 280 nm,
em pH neutro, somente os aminoácidos triptofano, tirosina e
cistina possuem uma absortividade molar significativamente
grande119,120.
Aplicações
O método tem sido muito utilizado durante os procedi-mentos
de purificação e separação de proteínas13 para a quan-tificação
das mesmas. Suas principais vantagens são as de
não destruir a amostra e de ser rápido; na literatura raramente
são descritas outras aplicações além desta. O principal moti-vo
desta limitação é que, em amostras complexas, diversas
substâncias absorvem no ultra-violeta tornando os resultados
pouco confiáveis.
Interferentes
Este método está sujeito a muitos interferentes, sendo que
qualquer substância que apresente uma banda de absorção na
região de leitura é um interferente em potencial. Este fato fez
com que esta metodologia fosse utilizada somente em proces-sos
de purificação de proteínas, onde uma avaliação semi-quantitativa
é suficiente, na maioria dos casos.
Os métodos discutidos acima são os mais utilizados, porém,
como estão sujeitos a limitações, a todo o momento continuam
aparecendo, na literatura, modificações das metodologias já
existentes, além de propostas de novas metodologias, que se-rão
discutidas a seguir.
NOVOS MÉTODOS ESPECTROFOTOMÉTRICOS
PARA A DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS
Zaia e cols.121-124 propuseram uma metodologia básica utili-zando
p-benzoquinona (PBQ), para a determinação de proteí-nas
em diversos meios. O método se baseia no fato de que o
produto de reação entre PBQ e proteínas absorve em 350 nm.
Esta metodologia mostrou-se 10 vezes mais sensível que o
método de biureto124, de menor custo que o de Lowry e cols.123,
e mais rápida que os métodos de Lowry e Kjedahl122,123. Zaia
e cols.121 propuseram, ainda, uma metodologia inédita que
possibilita, em uma única análise, determinar simultaneamente
proteínas e aminoácidos, pois o produto de reação PBQ/proteí-na
absorve em 350 nm e o produto de reação PBQ/aminoáci-dos
absorve em 480 nm. Uma outra quinona, o cloranil, foi
utilizada por Rahim e Al-Ghabsha125, para a determinação de
proteínas totais.
Krystal e cols.126,127 propuseram uma metodologia que é 100
vezes mais sensível que o método de Bradford11. Este método
está baseado no fato de que prata amoniacal liga-se a proteínas
e o produto de reação absorve fortemente em 420 nm.
Stoscheck128 propôs uma metodologia que é 25 vezes mais
sensível que o método de Bradford11 e 50 vezes mais sensível
que o de Lowry10. Neste método, o ouro coloidal, na presen-ça
de proteínas, desloca o seu máximo de absorção de 535
para 595 nm. Segundo a autora o método está sujeito a pou-cos
interferentes.
Estas metodologias que utilizam ouro coloidal ou prata
amoniacal, possuem um inconveniente óbvio que é a utilização
de reagentes caros; no entanto, Krystal e cols.126 afirmam que
o custo de 10 análises em triplicata é menor que dois centavos
de dolar.
Soedjak129 propôs uma metodologia em que o eritrosin B
reage com proteína formado um cromóforo que absorve forte-mente
em 545 nm. A sensibilidade desta metodologia está en-tre
2 e 14 μg/mL de proteína, que é a mesma sensibilidade do
método proposto por Zaia e cols.121.
O método da ninhidrina130 tem sido utilizado para a deter-minação
de proteínas totais30,44,75. Nesta metodologia, as pro-teínas
são submetidas à hidrólise ácida, sendo os aminoácidos
liberados determinados com ninhidrina. A desvantagem desta
metodologia é o tempo gasto na hidrólise ácida, nos métodos
comumente utilizados.
CONCLUSÃO
Diversos fatores devem ser analisados antes da escolha de
uma metodologia para a determinação de proteínas totais, po-rém,
um deles é essencial: o conhecimento, o mais preciso
possível, da natureza dos constituintes da amostra e de suas
concentrações aproximadas. Isto facilitará a identificação dos
possíveis interferentes e conseqüentemente ajudará na escolha
do método mais apropriado para cada situação.
Outros fatores, também importantes, são a sensibilidade
necessária, que é dependente da concentração de proteína na
amostra e do volume de amostra disponível; a rapidez e o cus-to
da metodologia; e, não menos importante, o grau de
confiabilidade nos resultados obtidos devido aos interferentes
no método escolhido.
QUÍMICA NOVA, 21(6) (1998) 791
6. Temos observado que muitas vezes a escolha de uma meto-dologia
para a determinação de proteínas totais é feita com
base na popularidade de um determinado método e isto acon-tece
em parte devido à falta de trabalhos de comparação de
metodologias. Portanto, acreditamos que muitos trabalhos des-te
tipo devam ainda ser desenvolvidos principalmente nas áreas
de análises clínicas, ciências e tecnologia de alimentos.
AGRADECIMENTOS
Agradecemos a todas as pessoas que, durante estes anos, com-partilharam
sua experiência analítica, assim como dispenderam
parte de seu tempo em discussões dos problemas de análises de
proteínas. CTBVZ agradece ao CNPq pela bolsa de pesquisador.
REFERÊNCIAS
1. Ganong, W. F.; Review of Medical Physiology; 17ª edi-ção,
Prentice-Hall Inc.; San Francisco, 1995.
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