Projeto de pesquisa apersentado como requisito básico para obtenção do título de Mestre em Agronomia

1. UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALAGOAS
CENTRO DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM AGRONOMIA “PRODUÇÃO VEGETAL”

2. Rio Largo/AL, quarta-feira, 3 de agosto de 2022
CONDICIONAMENTO FISIOLOGICO E AVALIAÇÃO DO VIGOR DE
SEMENTES DE TABACO (Nicotiana tabacum) POR HPLC
Acadêmico: CRISTIAN BERNARDO
Professor: Dr. JOÃO CORREIA

3. Fonte: MARCOS FILHO, J. Livro - Piracicaba: Fealq, 2005.
INTRODUÇÃO
A produtividade agrícola no campo é o
espelho da qualidade das sementes
plantadas.
A baixa produtividade é o reflexo de uma
série de mudanças degenerativas e
consequentemente redução no potencial
fisiológico e qualidade o após a sua
maturidade.

4. Fonte: Adaptado de SILVA, C., B. et, al. HORTSCIENCE; v. 50, n. 6, p. 873-878. junho de 2015.
INTRODUÇÃO
Semente
embebida Germinação
Plântula
Embebição
Armazenamento
Priming
Semente madura Semente tratada
Conteúdo
de
água
Tempo
Germinação
(%)
Tempo
Tratadas
Sem tratamento
Sementes condicionadas podem originar
plântulas precoces e uniformes em campo
Priming: Método que objetiva
melhorar o desempenho no campo

5. Fonte: Adaptado de SILVA, C., B. et, al. HORTSCIENCE; v. 50, n. 6, p. 873-878. junho de 2015.
INTRODUÇÃO
O condicionamento fisiológico de sementes
com biorreguladores (GB’s e BR’s) favorece as
atividades enzimáticas e desenvolvimento de
plântulas, acarretando maiores ganhos na
produção.
Pesquisas e disseminação do resultado
promissor destas técnicas podem alavancar a
economia de uma região produtora.
Arroz Milho
Feijão Soja
Pimentão Algodão

6. “O vigor das sementes é o conjunto de
características que determinam a atividade
e a performance de lotes de sementes.”
ISTA, 2006.
Perspectivas por inovações para avaliação
do vigor de sementes, com ferramentas
promissoras na busca por métodos sensíveis
e confiáveis que permitam identificar perdas
de potencial fisiológico em sementes.
Marcos Filho Jr., 2015.
INTRODUÇÃO
Fontes: Inter. Seed Testing Assoc. SeedVigor testing. Zurich: International Rules for Seed Testing, 303 p. 2006;
MARCOS FILHO, J. Sci. Agric. v.72, n.4, p.363-374, Jul/Ago 2015;
JOSÉ, S., C., B., R., et, al. Rev. Bras. de Sementes, vol. 28, nº 2, p.60, 2006.
Mecanismos que atuam contra o sistema de
oxidação lipídica, antioxidantes e de
proteínas específicas (Late embriogenesis
abundant proteins – LEA proteínas).
Sementes tolerantes a dessecação têm
apresentado alta quantidade de sacarose e
oligossacarídeos (estaquiose ou rafinose), e
ausência ou reduzida quantidade de
monossacarídeos, como a galactose,
manose, frutose e glicose.
JOSÉ, 2006

7. INTRODUÇÃO
Vantagens Desvantagens
Aplicabilidade Custos
Simplicidade Amostra
Sensibilidade (10-15)
Eficiência
Reprodutibilidade
Velocidade
Fonte: Extraído de ZHANG, H. PLoS ONE 10(7): e0132509. doi:10.1371/journal.pone.0132509. 2015.

8. Nicotiana tabacum
(Solanaceae)
Nicotina
Há mais de 60 sp., entretanto
somente a N. tabacum tem interesse,
pois é a única que sintetiza nicotina.
Originária do México e dos Andes
bolivianos, pode atingir 2,5m de
altura. Pouco ramificada com grandes
folhas verdes e flores brancas.
É sensível ao vento e granizo e
temperaturas abaixo de 18ºC e acima
de 28ºC.
ASPECTOS BOTÂNICOS

9. BIO
FUMICULTURA MUNDIAL (t)
China Brasil Índia
2,4 Mi (37%)
86 Mil
650 Mil (10%)
2,5 Mi
720 Mil (12%)
465 Mil
Fonte: Extraído e adaptado de ITGA/AFUBRA. Safra 2011/12. Acesso em jul. 2018. www.afubra.com.br
LEI ANTI TABAGISMO NOVAS PESQUISAS
2,7 Mi (41%)
2,6 Mi
Outros

10. FUMICULTURA BRASILEIRA (t)
Sul Nordeste* Alagoas
700 Mil (98,1%)
*Exceto Alagoas.
Fonte: Extraído e adaptado de AFUBRA/IBGE, Safra 2011/12. Acesso em jul. 2018. www.afubra.com.br
9,36 Mil (1,3%)
3,6 Mil (0,5%)
Outras
720 (0,1%)
Emancipou-se graças à
participação econômica
que detinha desde 1880;
Capital do fumo até o
final da década de 70;
Ainda é o maior produtor
do Nordeste.

11. CADEIA PRODUTIVA
Fonte: Extraído e adaptado de RFB/IBGE. Dados estatísticos, ano base 2016. Acesso em ago. 2018. www.fazenda.gov.br
Mais de 2 milhões de pessoas envolvidas;
Emprego e renda nas regiões produtoras;
O setor recolha mais de R$20 bi/ano* ao Tesouro
Nacional, que reverte em serviços para a sociedade;
Saúde Ciência Educação Segurança
Sendo a cultura não alimentícia de maior relevância
para o desenvolvimento de regiões produtoras.
*Sem contabilizar outras obrigações fiscais como Previdência Social,
Imposto de Renda, nem as taxas estaduais e municipais.

12. Ponto de maturação da semente;
Poucas informações para metodologias
para avaliar a qualidade;
Testes caros e complexos;
Lotes de má qualidade;
Literatura escassa quanto estudos de
envigoramento;
Perdas significativas no campo.
Fonte: Adaptado de CRIVELLARI, R., P., L. Tese (Doutorado em Agronomia/Fitotecnia) – UFLA, 2016.
PROBLEMÁTICA

13. JUSTIFICATIVA
O setor fumageiro tem grande importância
econômica e social, sendo a cultura não
alimentícia de maior relevância para o
desenvolvimento de regiões produtoras da
cultura.
Possibilitando o aumento da produtividade
no campo sem a necessidade de ampliação
da área plantada
Para Alagoas, justifica-se pela relevância do
tema, visto a constante busca por novas
tecnologias e metodologias aplicáveis na
diversificação e no planejamento da
pequena propriedade rural.
Fonte: Adaptado de CRIVELLARI, R., P., L. Tese (Doutorado em Agronomia/Fitotecnia) – UFLA, 2016.

14. Objetivo geral
O objetivo geral do presente projeto é estudar o potencial fisiológico de sementes de
Nicotiana tabacum frente a diferentes concentrações de 24-EpiBL e o uso da
cromatografia líquida na avaliação da qualidade das mesmas em perspectivas às novas
técnicas introduzidas na Produção e Análise de Sementes.
Objetivos específicos
(a) Avaliar o potencial fisiológico inicial dos lotes de sementes de N. tabacum por meio
dos testes de germinação e vigor;
(b) Estudar diferentes concentrações de 24-EpiBL no condicionamento fisiológico das
sementes;
(c) Avaliar o potencial fisiológico de sementes de N. tabacum em concomitância do item
“b” em diferentes lotes;
OBJETIVOS

15. (d) Estudar o perfil de oligossacarídeos por cromatografia líquida correlacionar ao
vigor das sementes nos lotes estudados;
(e) Determinar a condição ideal para o condicionamento fisiológico das sementes;
(f) Promover a formação de recursos humanos em Fisiologia, Tecnologia e Produção
de Sementes e Mudas.
OBJETIVOS

16. CARACTERIZAÇÃO
PRIMING
ESTATÍSTICA
CROMATOGRAFIA
O projeto será conduzido majoritariamente
no Laboratório de Propagação de Plantas
(CECA/UFAL).
Serão estudados 5 lotes do cultivar
comercial ARAPIRACA conduzido em DIC
com 4 repetições para cada lote e teste.
METODOLOGIA FLUXOGRAMA GERAL
ARMAZENAMENTO

17. CARACTERIZAÇÃO
PRIMING
ESTATÍSTICA
CROMATOGRAFIA
O projeto será conduzido majoritariamente
no Laboratório de Propagação de Plantas
(CECA/UFAL).
Serão estudados 5 lotes do cultivar
comercial ARAPIRACA conduzido em DIC
com 4 repetições para cada lote e teste.
METODOLOGIA FLUXOGRAMA GERAL
ARMAZENAMENTO

18. CARACTERIZAÇÃO
Teor de Água;
Germinação;
Primeira Contagem de Germinação;
Índice de Velocidade de Germinação;
Teste de Emergência em Campo;
Índice de Velocidade de Emergência;
Condutividade elétrica;
Envelhecimento Acelerado;
Stand Inicial e Stand Final.
METODOLOGIA
Estufa de Secagem
105oC/24hs
Câmara de Germinação
Fotoperíodo de 8Hs 20-30oC
Gerbox de plástico
e Papel mata borrão
Sementeira
em float sys
Condutivímetro
Fontes: Regras para Análise de Sementes, 2009;
CRIVELLARI, R., P., L. Tese (Doutorado em Agronomia/Fitotecnia) – UFLA, 2016.

19. CROMATOGRAFIA
METODOLOGIA
Coluna: Aminex (NH2)
Reagentes grau HPLC:
Água Ultrapura (Milli-Q);
Ácido Acético;
Metanol;
Padrões de Açúcares Solúveis:
Ribose; Xilose; Maltose; Sacarose;
Frutose; Glicose.
Purificação
Injeção
Sementes secas
Identificação pelo tempo de retenção
Quantificação por normatização de área
Fonte: Modificado de JOSÉ, S., C., B., R., et, al. Rev. Bras. de Sementes, vol. 28, nº 2, p.60, 2006.
Extração a frio

20. PRIMING
METODOLOGIA
Marcha de embebição;
Hidrocondicionamento;
Condicionamento com 24-EpiBL;
Secagem.
Fonte: Modificado de SILVA, C., B. et, al. HORTSCIENCE; v. 50, n. 6, p. 873-878. junho de 2015.
ARMAZENAMENTO
Refrigeração;
Acompanhamento trimestral.

21. ESTATÍSTICA
METODOLOGIA
Os dados obtidos serão submetidos à análise de variância
(ANOVA) usando o software estatístico Assistat versão 7.6
pelo teste F (p ≤ 0,01 e p ≤ 0,05, quando preciso) e à análise
de Tukey (p ≤ 0,05) para comparação de contraste de médias
e regressão polinomial com melhor ajuste da curva de
tendência para o potencial de armazenamento com base no
coeficiente de determinação e sua significância.
Fonte: Modificado de SILVA, C., B. et, al. HORTSCIENCE; v. 50, n. 6, p. 873-878. junho de 2015.

22. RESULTADOS E IMPACTOS ESPERADOS
1- Domínio da técnica de avaliação do potencial fisiológico de sementes de Nicotiana
tabacum;
2 - Domínio do processo de condicionamento fisiológico das sementes com 24-EpiBL;
3 - Conhecimento das concentrações e condições para promover o condicionamento
fisiológico;
4 - Conhecer o perfil de oligossacarídeos e a deterioração de sementes de N. tabacum
por HPLC, permitindo o incremento da análise de sementes elevando a sensibilidade
dos testes de qualidade de sementes;
5 - Proposição de novas tecnologias para aplicação comercial.

23. RESULTADOS E IMPACTOS ESPERADOS
6 - Publicações científicas em periódicos com seletiva política editorial e congressos;
7 - Fortalecimento das cooperações interinstitucionais entre os centros de pesquisas
do CECA/UFAL e de organizações do setor produtivo local (Arapiraca-AL) e qualificação
de quadros de pesquisas aplicada, em alto nível, na perspectiva de aumentar
qualitativamente e quantitativamente o desempenho científico-tecnológico do país,
particularmente, do estado de Alagoas, e a competitividade internacional da pesquisa
brasileira;
8 - Formação recursos humanos na área de fisiologia, tecnologia e produção de
sementes e mudas;
9 - Possibilidades de implementação da técnica em campo, estudando a importância
para o setor produtivo local (Arapiraca-AL);

24. Por fim, o conjunto de resultados almejados deve apresentar solidez tal que permita a
utilização dos resultados no campo por agricultores, visando práticas agrícolas integradas
à tecnologia de sementes.
Vale ainda salientar que a proposta do uso do biorregulador 24-EpiBL para
condicionamento fisiológico e o estudo dos mecanismos envolvidos na deterioração e
melhoria do vigor das sementes de N. tabacum com marcadores moleculares
relacionados às reservas de oligossacarídeos na deterioração das mesmas por HPLC, não
estão relatados na literatura, o que demonstra seu ineditismo.
CONSIDERAÇÕES FINAIS

25. CRONOGRAMA
ANO I ANO II
MÊS
Atividade 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
Revisão bibliográfica
Caracterização
Cromatografia
Priming
Armazenamento
Análise Estatística
Redação da Dissertação
Defesa da Dissertação
Correções
Submissão do Artigo

26. P
N
OBRIGADO!! K
UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALAGOAS
CENTRO DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS
PROGRAMA DE PÓS GRADUAÇÃO EM AGRONOMIA “PRODUÇÃO VEGETAL”

27. UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALAGOAS
CENTRO DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM AGRONOMIA “PRODUÇÃO VEGETAL”