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Universidade Federal do Pará
Instituto de Ciências Biológicas
Faculdade de Biomedicina
Módulo: ACD I – Bacteriologia
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Bactérias Gram-Negativas
Isis Liz
BGN não-fermentadores de glicose
→ Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter spp.
BGN fermentadores de glicose (Família
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Isis Liz
Isis Liz
→ Detecção, prevenção e Orientação (profissionais
de saúde)
→ organizar e planejar serviços de saúde.
Passos para a invest...
• Intrínseca
• Adquirida
 Mutações
 Processos de recombinação genética
Transformação
Transdução
Conjugação
 Transpos...
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Antibióticos geralmente entram nas bactérias através de
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Celular
Sítio Modificado
Antibiótico
Alteração estrutural do sítio de ação:
Ligação bloqueada
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Celular
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Antibiótico
Entrada Saída
Bomba Ativa
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Parede
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Antibiótico
Sítio de AçãoEnzima
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Há quatro subclasses de beta-lactâmicos:
→ As penicilinas → As cefalosporinas
→ Os carbapenems → Os monob...
As bactérias possuem a capacidade de produzir
várias enzimas capazes de inibir a ação de inúmeros
fármacos, dentre essas e...
1. Inibição por quelantes de
zinco (EDTA)
2. Comparar os halos de
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3. Difícil estabelecer provas
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→ Fitas Imipenem
→ Diluição em SF; incubar em placa de Agar N. S.
(escala de McFarland 0,5)
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do EUCAST
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Fonte: Comitê Brasileiro de Testes de Sensibilidade aos Antimicrobianos: Orientações do EUCAST
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→ Realizada com caldo Mueller-Hinton
→ Concentrações entre 0,25 e 512 mg/L (µg/ml), com e sem ácido
clavulânico.
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Fonte: ANVISA – Interpretação de dados microbiológicos - Métodos para TSA
Microdiluição em caldo
João Marcos
Quando a combinação de duas drogas
potencializa a atividade de ambas, temos um
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→ Método de triagem para a detecção de ESBLs em enterobactérias;
→ Não sensibilidade aos β – lactâmicos de espectro estend...
→ Teste confirmatório fenotípico por disco – difusão para a
detecção da enzima klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC).
...
→ Teste confirmatório fenotípico por disco – difusão para a
detecção da enzima klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC).
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Teste fenotípico de confirmação por disco – difusão
para a detecção da enzima β – Lactamase de Espectro
Estendido (ESBL) p...
Principais genes de resistência antimicrobiana
e bactérias de importância médica:
→ bla(TEM1): E. coli
→ bla(TEM10): K. pn...
Fonte modificada de :Justin M. Cole et al. J. Clin. Microbiol. 2009;47:322-326
Real-time PCR ensaio para blaKPC
Vivianne
A detecção de bacilos Gram-negativos de
resistência a antimicrobianos é de grande
relevância, a fim de limitar sua dissemi...
Brasil. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Nota técnica 01/2013. Medidas para identificação, prevenção e controle d...
RANG. P. H ; DALE.M. M. et al. Farmacologia, cap. 49/50, 7º edição, 2 v, Elsevier, 2012.
MOREIRA, C. V.; FREIRE, D. Klebsi...
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Métodos de detecção de resistência bacteriana aos antimicrobianos em bacilos Gram-negativos (cultura de vigilância epidemiológica)

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Métodos laboratoriais utilizados para a detecção de resistência bacteriana aos antimicrobianos (ou antibióticos), tendo como foco, neste trabalho, os bacilos Gram-negativos.

Publicada em: Saúde e medicina
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Métodos de detecção de resistência bacteriana aos antimicrobianos em bacilos Gram-negativos (cultura de vigilância epidemiológica)

  1. 1. Universidade Federal do Pará Instituto de Ciências Biológicas Faculdade de Biomedicina Módulo: ACD I – Bacteriologia Profª Dra. Antônia Vieira Profª Msc. Jessylene Almeida Dayse Minelle Paixão Isis Liz Barbosa João Marcos de Oliveira Maria Silvana Lopes Ritiane Caetano Thayanne Macedo Vivianne Araujo Belém 2015 Métodos de detecção de resistência bacteriana aos antimicrobianos em BGN (cultura de vigilância epidemiológica)
  2. 2. Bactérias Gram-Negativas Isis Liz
  3. 3. BGN não-fermentadores de glicose → Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter spp. BGN fermentadores de glicose (Família Enterobacteriaceae) → Carbapenemases (Klebsiella pneumoniae) → β-lactamases de espectro estendido – ESBL (Escherichia coli) → β-lactamases AmpC adquiridas (Salmonella entérica) Bacilos Gram-Negativos Isis Liz
  4. 4. Isis Liz
  5. 5. Isis Liz
  6. 6. → Detecção, prevenção e Orientação (profissionais de saúde) → organizar e planejar serviços de saúde. Passos para a investigação 1. Definição de caso. 2. Métodos de identificação. 3. Identificação da unidade acometida corretamente. Vigilância epidemiológica Isis Liz
  7. 7. • Intrínseca • Adquirida  Mutações  Processos de recombinação genética Transformação Transdução Conjugação  Transposição Mecanismos de resistência bacteriana Thayanne
  8. 8. Interior da bactéria Parede Celular Porina Antibiótico Antibióticos geralmente entram nas bactérias através de canais protéicos (porinas) da parede celular de BGN Diminuição da Permeabilidade Thayanne
  9. 9. Interior da bactéria Parede Celular Sítio Modificado Antibiótico Alteração estrutural do sítio de ação: Ligação bloqueada Com a mudança estrutural do alvo, o antibiótico perde a capacidade de se ligar ao sítio. Modificação do Sítio de Ação Thayanne
  10. 10. Interior da bactéria Parede Celular Porina Antibiótico Entrada Saída Bomba Ativa Bombas no interior da bactéria fazem com que, assim que o antibiótico entra na célula, ele seja lançado para o meio externo. Thayanne Bomba de Efluxo
  11. 11. Interior da bactéria Parede Celular Antibiótico Sítio de AçãoEnzima Antibiótico destruído Antibiótico alterado, Previne a ligação As enzimas destroem ou modificam o antibiótico Mecanismo enzimático Thayanne
  12. 12. Os antibióticos são classificados de acordo com o seu mecanismo de ação. → Inibição da síntese da parede celular → Inibição da síntese ou dano da membrana citoplasmática → Alteração na síntese dos ácidos nucleicos → Inibição da síntese ribossômica → Alteração de metabolismos celulares Classificação dos Antibióticos Dayse
  13. 13. Beta-lactâmicos: Há quatro subclasses de beta-lactâmicos: → As penicilinas → As cefalosporinas → Os carbapenems → Os monobactans Classificação dos Antibióticos Dayse
  14. 14. As bactérias possuem a capacidade de produzir várias enzimas capazes de inibir a ação de inúmeros fármacos, dentre essas enzimas destacam-se: → As beta-lactamases de espectro ampliado (ESBL); → As beta-lactamase cromossômicas (AmpC); → As metalo-beta-lactamases; → E as Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC). Resistência aos antibióticos da classe dos β-lactâmicos Dayse
  15. 15. 1. Inibição por quelantes de zinco (EDTA) 2. Comparar os halos de inibição. 3. Difícil estabelecer provas de determinação, pois as provas com quelantes poderiam não detectar todos os tipos de MBL. Figura 1. P. Aeruginosa sem MBL. Figura 2. P. aeruginosa com produção de MBL. Teste do EDTA Fonte: Marchiaro. Detecção de metalo β-lactamase Maria Silvana
  16. 16. → Fitas Imipenem → Diluição em SF; incubar em placa de Agar N. S. (escala de McFarland 0,5) → Inocular em 1:10 em placa de Agar Muller-Hinton → Critério de positividade Redução  3.0 diluições 1:10 da bactéria. Inoculada em A.M.H. Fonte: Anderson. K.F, Detecção de CIM por E-teste ® i isolado de K. Pneumoniae com fita de E-teste de Imipenem em A.M.H Etest® Detecção de produtoras de cabarpenemase Maria Silvana
  17. 17. Fonte: Comitê Brasileiro de Testes de Sensibilidade aos Antimicrobianos: Orientações do EUCAST Teste de triagem para produção de ESBL Maria Silvana
  18. 18. Fonte: Comitê Brasileiro de Testes de Sensibilidade aos Antimicrobianos: Orientações do EUCAST Testes confirmatórios para ESBL em Enterobacteriaceae que são positivos nos testes de triagem para ESBL Maria Silvana
  19. 19. → Realizada com caldo Mueller-Hinton → Concentrações entre 0,25 e 512 mg/L (µg/ml), com e sem ácido clavulânico. → Observar a CIM necessária para inibir o crescimento do microrganismo. diluições seriadas de razão 2 de cefalosporinas (cefotaxima, ceftazidima e cefepima) ↓ Microdiluição em caldo João Marcos
  20. 20. Fonte: ANVISA – Interpretação de dados microbiológicos - Métodos para TSA Microdiluição em caldo João Marcos
  21. 21. Quando a combinação de duas drogas potencializa a atividade de ambas, temos um sinergismo. Perfil de sensibilidade Adequar o uso dos medicamentos Ao menos 2 substâncias com sensibilidade comprovada in vitro. Teste de Sinergismo ↓ ↓ João Marcos
  22. 22. → Método de triagem para a detecção de ESBLs em enterobactérias; → Não sensibilidade aos β – lactâmicos de espectro estendido (Azetreonam, cefotaxima, ceftriaxona, ceftazidima e Cefpodoxima). Fonte: ANVISA Teste de disco – difusão (Método Kirby-Bauer) Ritiane
  23. 23. → Teste confirmatório fenotípico por disco – difusão para a detecção da enzima klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC). → Essa enzima hidrolisa vários β – lactâmicos, como os carbapenêmicos. Fonte: ANVISA Teste de Hodge Modificado Ritiane
  24. 24. → Teste confirmatório fenotípico por disco – difusão para a detecção da enzima klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC). → Essa enzima hidrolisa vários β – lactâmicos, como os carbapenêmicos. Fonte: ANVISA Teste de Hodge Modificado Ritiane
  25. 25. Teste fenotípico de confirmação por disco – difusão para a detecção da enzima β – Lactamase de Espectro Estendido (ESBL) produzida pelas bactérias produtoras de ESBL. Fonte: ANVISA Teste do disco combinado (TDC) Ritiane
  26. 26. Principais genes de resistência antimicrobiana e bactérias de importância médica: → bla(TEM1): E. coli → bla(TEM10): K. pneumoniae → bla(CTX-M): E. coli e K. pneumoniae → bla(KPC): K. pneumoniae e Salmonella spp. Técnicas moleculares para detecção de resistência a antimicrobianos Vivianne
  27. 27. Fonte modificada de :Justin M. Cole et al. J. Clin. Microbiol. 2009;47:322-326 Real-time PCR ensaio para blaKPC Vivianne
  28. 28. A detecção de bacilos Gram-negativos de resistência a antimicrobianos é de grande relevância, a fim de limitar sua disseminação e contribuir para a redução dos índices de morbidade e mortalidade da população. Assim, ao realizamos cada técnica descrita, podemos observar suas particularidades genotípicas e fenotípicas, visando a construção de um perfil epidemiológico de resistência para a busca de alternativas para combater essas bactérias. Conclusão
  29. 29. Brasil. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Nota técnica 01/2013. Medidas para identificação, prevenção e controle de infecções relacionadas à assistência à saúde por microrganismos multiresistentes. Brasília: ANVISA, 2013. MARTINS, A. C.; PICOLI, S. U. Métodos alternativos para deteccão de betalactamase de espectro estendido em Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae. Jornal Brasileiro de Patologia Médica Laboratorial. v. 47, n. 4, p.421-426, agosto, 2011. MENEGOL D.; PICOLI S. U; FERREIRA M. C. Pesquisa de beta-lactamase de espectro estendido (ESBL) em enterobacteriaceae uropatogênicas isoladas em laboratório de Caxias do Sul. RBAC. 2012;44(2):97-100. Comitê Brasileiro de Testes de Sensibilidade aos Antimicrobianos. Orientações do EUCAST para a detecção de mecanismos de resistência e resistências específicas de importância clínica e/ou epidemiológica. Versão 1. BrCAST, dezembro de 2013. Brasil. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Módulo 2: Interpretação de dados microbiológicos; Módulo 5: Teste de sensibilidade aos antimicrobianos. Brasília: ANVISA, 2008. Brasil. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Manual de Microbiologia Clínica para o Controle de infecção relacionada à Assistência à Saúde. Módulo 6: Detecção e identificação e bactérias de importância médica. 1º ed. Brasília: ANVISA, 2010. KONEMAN, E. W. et al. Diagnóstico Microbiológico, Texto e Atlas colorido. 5° Ed. Rio de Janeiro, Editora Medsi, 2001. J. Clin. Microbiol. Development and Evaluation of a Real-Time PCR Assay for Detection of Klebsiella pneumoniae Carbapenemase Genes. February 2009 vol. 47 no. 2 322-326 Referências Bibliográficas
  30. 30. RANG. P. H ; DALE.M. M. et al. Farmacologia, cap. 49/50, 7º edição, 2 v, Elsevier, 2012. MOREIRA, C. V.; FREIRE, D. Klebsiella pneumoniae e sua resistência a antibióticos. PEREIRA, S. A. et al. Avaliação da acurácia de testes laboratoriais para a detecção de amostras de Klebsiella pneumoniae produtora de betalactamase de espectro estendido. Jornal Brasileiro de Patologia e Medicina Laboratorial, Rio de Janeiro, em 15 maio, 2003. JUNIOR, S. A. M. et al. Betalactamases de Espectro Ampliado (ESBL): um Importante Mecanismo de Resistência Bacteriana e sua Detecção no Laboratório Clínico. NewsLab, ed. 63, 2004. Referências Bibliográficas

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