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Carregado porHortencia Gomes da Silveira
PCR SSP
O PCR-SSP é uma técnica de genotipagem que utiliza iniciadores específicos para determinar polimorfismos genéticos, principalmente antígenos HLA importantes para transplantes. O processo envolve amplificar amostras de DNA em tubos contendo primers específicos para alelos, permitindo identificar quais estão presentes após eletroforese em gel. A técnica possui vantagens como diagnóstico precoce e teste de múltiplos polimorfismos, mas também desvantagens como baixa resolução e custos elevados
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PCR SSP
- 1. PCR-SSP Acadêmicos: Bruna Campos, HortênciaGomes, Rebeca Furtado, Yuri Guedes Professora orientadora: Cláudia Penaforte Centro Universitário de Belo Horizonte – UNIBH Faculdade de Medicina Disciplina: Biologia Molecular
- 2. O que é? •O PCR-SSP é uma abordagem de genotipagem de DNA com base na utilização de sequências específicas (SSP); • Consiste de múltiplos iniciadores de PCR específicos para diferentes polimorfismos genéticos. Exemplo: HLA; • Várias PCRs são preparadas para cada amostra e os produtos de amplificação específicos serão produzidos se os iniciadores são complementares ao DNA da amostra. Disponível em: <https://www.abbottmolecular.com/technologies/ssp.html>
- 3. Material Utilizado • DNA •Tampão • dNTP • MgCl2 • Primer "específico" • Taq polimerase • Termociclador • Gel de agarose (para correr a eletroforese) Disponível em: <http://www.jbn.org.br/audiencia_pdf.asp?aid2=777&nomeArquivo=19-04-06.pdf>
- 4. Aplicação • Análise depolimorfismos únicos de nucleotídeos (SNPs); • Principalmente para determinar antígenos HLA (que são altamente polimórficos); • Teste de compatibilidade entre doadores e receptores em transplantes; • Farmacogenética; • Diagnóstico de doenças. Disponível em: <http://www.jbn.org.br/audiencia_pdf.asp?aid2=777&nomeArquivo=19-04-06.pdf>
- 5. HLA • Sistema doHLA Antígenos HLA; • Importância no estudo da rejeição de órgãos; • Defesa imunológica; • Existem várias proteínas do sistema imune que estão associadas ao HLA: MHC-I, MHC-II, Citocinas, Interleucinas, Interferons. Disponível em: <http://www.jbn.org.br/audiencia_pdf.asp?aid2=777&nomeArquivo=19-04-06.pdf>
- 6. Processo PCR-SSP • Colocaro DNA em diferentes tubos contendo dois primers PCR; • Um dos primers hibridiza uma região conservada do locus HLA, sendo adicionado a todos os tubos; • O segundo primer hibridiza com uma região polimórfica do locus HLA; *cada tubo contem um primer de especificidade diferente. • A amplificação do DNA só será observada no tubo contendo o segundo primer específico que corresponde ao alelo (alta resolução) ou ao grupo de alelos (baixa resolução) do HLA na amostra do DNA; • Eletroforese em gel de agarose. Disponível em: <http://www.grupouninter.com.br/revistasaude/index.php/saudeDesenvolvimento/article/view/220>
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- 11. Vantagens • Diagnóstico precocede doenças; • Em um único teste, mais de um polimorfismo pode ser identificado; • Mais eficiente que o teste de sorologia; • Fácil e rápida execução. Disponível em: <www.scielo.br/pdf/rbhh/v31n4/aop5509.pdf>
- 12. Desvantagens • Baixa resolução(grupos de alelos); • Contaminação; • Uso do gel de agarose limita o tamanho do fragmento; • Requer habilidade técnica; • Alto custo do equipamento. Disponível em: <http://www.moreirajr.com.br/revistas.asp?fase=r003&id_materia=4499>
- 13. Referências • https://www.abbottmolecular.com/technologies/ssp.html, acessoem junho, 2015. • http://www.grupouninter.com.br/revistasaude/index.php/saudeDesenvolvimento/article/view/2 20, acesso em junho, 2015. • http://www.jbn.org.br/audiencia_pdf.asp?aid2=777&nomeArquivo=19-04-06.pdf, acesso em junho, 2015. • http://www.moreirajr.com.br/revistas.asp?fase=r003&id_materia=4499, acesso em junho, 2015. • http://www.scielo.br/pdf/rbhh/v31n4/aop5509.pdf, acesso em junho, 2015. • http://www.slideshare.net/jmgrigg/organ-transplantation-and-the-hla-system-lecture-28091691, acesso em junho, 2015.
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