O documento discute várias técnicas de diagnóstico virológico, incluindo métodos de amplificação como PCR em tempo real, extração de ácidos nucleicos, e aplicações destas técnicas para detecção e quantificação de vírus.
O documento descreve a reação de polimerização em cadeia (PCR), um método para amplificar seletivamente regiões específicas de DNA. A PCR usa primers, Taq polimerase e ciclos de aquecimento e resfriamento para replicar o DNA alvo exponencialmente. Isso permite detecções sensíveis de sequências genéticas em aplicações como diagnóstico médico e pesquisa.
Aula ministrada durante a disciplina de Biologia Molecular de Microrganismos, no Programa de Pós-Graduação em Microbiologia da Universidade Federal de Minas Gerais.
A reação em cadeia da polimerase (PCR) permite a amplificação in vitro de uma sequência específica de DNA através de replicação repetida. A PCR tem aplicações no diagnóstico de doenças, clonagem de genes, determinação de variabilidade genética e outros. O processo envolve extração de DNA, delineamento de primers, reação de PCR e análise dos resultados.
técnicas moleculares no tratamento do câncerAlison Regis
A PCR é uma técnica que permite a amplificação exponencial de uma sequência específica de DNA. Ela foi descrita por Kary Mullis em 1987 e é amplamente utilizada em diagnósticos médicos, mapeamento genético e outras aplicações. A PCR funciona por meio de ciclos repetidos de desnaturação do DNA, anelamento de primers e extensão da cadeia por uma Taq polimerase termoestável.
1) A PCR permite amplificar seletivamente DNA em grande quantidade com poucos recursos.
2) A reação envolve primers, DNA template, enzimas e ciclos de aquecimento e arrefecimento para duplicar o DNA.
3) A PCR tem muitas aplicações como detecção de mutações, sequenciamento de DNA e testes de paternidade.
O documento discute teoria e aplicações da PCR quantitativa (qPCR). Resume os principais tópicos da qPCR, incluindo ensaios químicos disponíveis, conceitos importantes como curvas padrão e de dissociação, e fatores que afetam a eficiência. Também aborda cálculos como quantificação absoluta e relativa usando métodos como Livak.
Este documento descreve a reação em cadeia da polimerase (PCR), incluindo seus reagentes, etapas e aplicações. A PCR permite a amplificação seletiva de segmentos específicos de DNA e foi inventada por Kary Mullis em 1983, revolucionando a biologia molecular.
O documento descreve a reação de polimerização em cadeia (PCR), um método para amplificar seletivamente regiões específicas de DNA. A PCR usa primers, Taq polimerase e ciclos de aquecimento e resfriamento para replicar o DNA alvo exponencialmente. Isso permite detecções sensíveis de sequências genéticas em aplicações como diagnóstico médico e pesquisa.
Aula ministrada durante a disciplina de Biologia Molecular de Microrganismos, no Programa de Pós-Graduação em Microbiologia da Universidade Federal de Minas Gerais.
A reação em cadeia da polimerase (PCR) permite a amplificação in vitro de uma sequência específica de DNA através de replicação repetida. A PCR tem aplicações no diagnóstico de doenças, clonagem de genes, determinação de variabilidade genética e outros. O processo envolve extração de DNA, delineamento de primers, reação de PCR e análise dos resultados.
técnicas moleculares no tratamento do câncerAlison Regis
A PCR é uma técnica que permite a amplificação exponencial de uma sequência específica de DNA. Ela foi descrita por Kary Mullis em 1987 e é amplamente utilizada em diagnósticos médicos, mapeamento genético e outras aplicações. A PCR funciona por meio de ciclos repetidos de desnaturação do DNA, anelamento de primers e extensão da cadeia por uma Taq polimerase termoestável.
1) A PCR permite amplificar seletivamente DNA em grande quantidade com poucos recursos.
2) A reação envolve primers, DNA template, enzimas e ciclos de aquecimento e arrefecimento para duplicar o DNA.
3) A PCR tem muitas aplicações como detecção de mutações, sequenciamento de DNA e testes de paternidade.
O documento discute teoria e aplicações da PCR quantitativa (qPCR). Resume os principais tópicos da qPCR, incluindo ensaios químicos disponíveis, conceitos importantes como curvas padrão e de dissociação, e fatores que afetam a eficiência. Também aborda cálculos como quantificação absoluta e relativa usando métodos como Livak.
Este documento descreve a reação em cadeia da polimerase (PCR), incluindo seus reagentes, etapas e aplicações. A PCR permite a amplificação seletiva de segmentos específicos de DNA e foi inventada por Kary Mullis em 1983, revolucionando a biologia molecular.
O documento discute as vantagens e desvantagens da técnica de Real-Time PCR em relação aos géis de Agarose convencionais. A Real-Time PCR permite monitorar a amplificação em tempo real através da detecção de fluorescência, fornecendo resultados quantitativos, específicos e sensíveis. Três métodos principais de detecção são descritos: sondas hidrolizáveis (TaqMan), sondas de hibridização e SYBR Green.
Introdução de tecnicas de diagnostico molecular Safia Naser
1. O documento discute técnicas de diagnóstico molecular, incluindo detecção de agentes infecciosos e alterações genéticas que auxiliam no diagnóstico e prognóstico de doenças.
2. São descritas várias técnicas moleculares como PCR, Southern Blot, RFLP e sequenciamento que permitem avaliar a estrutura do DNA para diagnóstico.
3. O diagnóstico molecular é um campo emergente que oferece vantagens como alta sensibilidade, rapidez e especificidade no
O documento descreve a técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), incluindo seus componentes, aplicações e variações. A PCR permite copiar DNA in vitro e foi desenvolvida em 1984, revolucionando a biologia molecular. Sua importância é comparada à descoberta da estrutura do DNA.
O documento descreve a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), incluindo sua história, aplicações e processos. A PCR permite a amplificação seletiva de fragmentos de DNA e é amplamente utilizada em diagnósticos médicos, testes de paternidade e análises forenses.
O documento descreve a técnica da eletroforese para análise de DNA e proteínas, incluindo seu histórico desde os anos 1950 e suas aplicações atuais em laboratórios de biologia molecular. A eletroforese permite separar moléculas como DNA e proteínas com base em seu tamanho e carga elétrica através da movimentação dessas moléculas em um gel sob influência de um campo elétrico.
A técnica de PCR permite amplificar seletivamente segmentos específicos de DNA a partir de quantidades muito pequenas de material genético original. O processo envolve a repetição cíclica de desnaturação do DNA, emparelhamento de primers e extensão das cadeias por uma DNA polimerase termoestável. Isto resulta na replicação exponencial do segmento de DNA delimitado pelos primers, tornando possível analisar sequências genéticas em grande escala.
Aula dna-extraction-purification emanuel-20_11_12.ppt-11(1)Jac Costa
O documento discute os tipos de DNA, estrutura do DNA e RNA, extração de DNA e análises genéticas. Resume os principais passos da extração de DNA como a lise celular, degradação de proteínas e purificação do DNA, e menciona alguns métodos comuns de extração como fenol/clorofórmio e kits comerciais.
O documento descreve técnicas de análise de hibridização de ácidos nucléicos, como fatores que afetam a estabilidade dos híbridos, métodos de imobilização de DNA em membranas como Dot Blot e procedimentos para hibridização com sondas marcadas radioativamente.
D na invest-criminal-pcr-electroforese(dnafinferprint)Madalena_Bio12
O documento discute a utilização do DNA na investigação criminal, especificamente:
1. A técnica de PCR é usada para amplificar fragmentos de DNA;
2. A eletroforese separa os fragmentos amplificados para criar impressões digitais de DNA;
3. As impressões digitais de DNA podem ser usadas para comparar DNA de suspeitos e vítimas e identificar culpados.
Dna invest criminal-pcr-electroforese(dn-afingerprint)Madalena_Bio12
O documento discute a aplicação da técnica de DNA fingerprinting na investigação criminal. Descreve os passos de extração do DNA, amplificação por PCR usando a sequência Alu como marcador, e electroforese para comparar amostras e identificar suspeitos.
O documento discute a aplicação de marcadores moleculares na agricultura. Ele descreve as ferramentas da biologia molecular usadas para identificar marcadores, como enzimas de restrição, PCR e eletroforese. Também apresenta diferentes tipos de marcadores genéticos, incluindo isoenzimas, microssatélites e SNPs.
TECNICAS DE AMPLIFICACAO DE ACIDOS NUCLEICOSRica Cane
1) O documento descreve técnicas de amplificação de ácidos nucleicos, incluindo a reação em cadeia da polimerase (PCR) que envolve desnaturação, hibridação e extensão.
2) A PCR em tempo real permite monitorar a amplificação em tempo real através da detecção da fluorescência dos produtos da reação.
3) Outras técnicas incluem a amplificação baseada na sequência dos ácidos nucleicos e a amplificação mediada por transcrição.
O documento descreve o processo de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), que permite amplificar seletivamente fragmentos de DNA. A PCR usa primers, nucleotídeos e a enzima DNA polimerase para replicar um pedaço específico de DNA in vitro, gerando milhares de cópias do fragmento. O processo consiste em ciclos de aquecimento, arrefecimento e extensão para replicar o DNA alvo.
[1] Chips de DNA permitem a análise simultânea da expressão de milhares de genes em diferentes tipos de células. [2] Podem ser usados para descobrir novos genes e compreender como as células respondem a perturbações. [3] Têm aplicações no diagnóstico de doenças, investigação do desenvolvimento de doenças e efeitos de fármacos.
Kits de Extração / Purificação de DNA/RNA - HiMediaHimediaBrasil
O documento descreve vários kits para extração e purificação de DNA e RNA. Ele explica os principais passos do processo de extração, incluindo a lise celular, ligação do DNA/RNA à membrana de sílica, lavagem e eluição do DNA/RNA purificado. Além disso, fornece detalhes sobre cada um dos kits disponíveis para diferentes tipos de amostras, como sangue, bactérias, plantas, entre outros.
O documento discute a técnica de RNA-seq para medir níveis de transcritos usando sequenciamento de próxima geração. RNA-seq permite quantificar expressão gênica com alta sensibilidade, identificar novas transcrições e splicing alternativo. A técnica é útil para estudar transcriptomas sob diferentes condições e doenças.
Este documento descreve um estudo sobre a utilização de marcadores moleculares para diferenciar genótipos de arroz selvagem (Oryza glumepatula) de duas populações diferentes. O resumo apresenta os objetivos de diferenciar as populações e caracterizar os genótipos com loci gênicos em heterozigose e homozigose. Também descreve os métodos utilizados, incluindo extração de DNA, PCR-SSR, eletroforese em gel de agarose e poliacrilamida, e análise dos resultados por meio
O documento fornece uma introdução sobre bioinformática, definindo o termo e descrevendo como combina diferentes áreas como matemática, estatística e ciência da computação para processar e analisar dados biológicos. Também resume os principais bancos de dados genômicos como GenBank e ferramentas para análise de sequências como BLAST.
Aula02 tecnicas diagnostico virologia parte 1Hugo Sousa
Este documento descreve várias técnicas imunológicas usadas no diagnóstico virológico, incluindo testes como ELISA, ELFA, imunofluorescência, imunocromatografia, imunohistoquímica e Western blot. Estas técnicas baseiam-se nas interações entre antigénios virais, anticorpos e enzimas para detectar a presença de vírus ou resposta imune.
O documento discute vírus, descrevendo suas características gerais como microorganismos intracelulares obrigatórios que se replicam dentro de células vivas. Também descreve as etapas do ciclo viral como adsorção, penetração, desnudamento, síntese e replicação do genoma, montagem e liberação. Finalmente, discute como os vírus causam doença e formas de transmissão.
O documento discute as vantagens e desvantagens da técnica de Real-Time PCR em relação aos géis de Agarose convencionais. A Real-Time PCR permite monitorar a amplificação em tempo real através da detecção de fluorescência, fornecendo resultados quantitativos, específicos e sensíveis. Três métodos principais de detecção são descritos: sondas hidrolizáveis (TaqMan), sondas de hibridização e SYBR Green.
Introdução de tecnicas de diagnostico molecular Safia Naser
1. O documento discute técnicas de diagnóstico molecular, incluindo detecção de agentes infecciosos e alterações genéticas que auxiliam no diagnóstico e prognóstico de doenças.
2. São descritas várias técnicas moleculares como PCR, Southern Blot, RFLP e sequenciamento que permitem avaliar a estrutura do DNA para diagnóstico.
3. O diagnóstico molecular é um campo emergente que oferece vantagens como alta sensibilidade, rapidez e especificidade no
O documento descreve a técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), incluindo seus componentes, aplicações e variações. A PCR permite copiar DNA in vitro e foi desenvolvida em 1984, revolucionando a biologia molecular. Sua importância é comparada à descoberta da estrutura do DNA.
O documento descreve a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), incluindo sua história, aplicações e processos. A PCR permite a amplificação seletiva de fragmentos de DNA e é amplamente utilizada em diagnósticos médicos, testes de paternidade e análises forenses.
O documento descreve a técnica da eletroforese para análise de DNA e proteínas, incluindo seu histórico desde os anos 1950 e suas aplicações atuais em laboratórios de biologia molecular. A eletroforese permite separar moléculas como DNA e proteínas com base em seu tamanho e carga elétrica através da movimentação dessas moléculas em um gel sob influência de um campo elétrico.
A técnica de PCR permite amplificar seletivamente segmentos específicos de DNA a partir de quantidades muito pequenas de material genético original. O processo envolve a repetição cíclica de desnaturação do DNA, emparelhamento de primers e extensão das cadeias por uma DNA polimerase termoestável. Isto resulta na replicação exponencial do segmento de DNA delimitado pelos primers, tornando possível analisar sequências genéticas em grande escala.
Aula dna-extraction-purification emanuel-20_11_12.ppt-11(1)Jac Costa
O documento discute os tipos de DNA, estrutura do DNA e RNA, extração de DNA e análises genéticas. Resume os principais passos da extração de DNA como a lise celular, degradação de proteínas e purificação do DNA, e menciona alguns métodos comuns de extração como fenol/clorofórmio e kits comerciais.
O documento descreve técnicas de análise de hibridização de ácidos nucléicos, como fatores que afetam a estabilidade dos híbridos, métodos de imobilização de DNA em membranas como Dot Blot e procedimentos para hibridização com sondas marcadas radioativamente.
D na invest-criminal-pcr-electroforese(dnafinferprint)Madalena_Bio12
O documento discute a utilização do DNA na investigação criminal, especificamente:
1. A técnica de PCR é usada para amplificar fragmentos de DNA;
2. A eletroforese separa os fragmentos amplificados para criar impressões digitais de DNA;
3. As impressões digitais de DNA podem ser usadas para comparar DNA de suspeitos e vítimas e identificar culpados.
Dna invest criminal-pcr-electroforese(dn-afingerprint)Madalena_Bio12
O documento discute a aplicação da técnica de DNA fingerprinting na investigação criminal. Descreve os passos de extração do DNA, amplificação por PCR usando a sequência Alu como marcador, e electroforese para comparar amostras e identificar suspeitos.
O documento discute a aplicação de marcadores moleculares na agricultura. Ele descreve as ferramentas da biologia molecular usadas para identificar marcadores, como enzimas de restrição, PCR e eletroforese. Também apresenta diferentes tipos de marcadores genéticos, incluindo isoenzimas, microssatélites e SNPs.
TECNICAS DE AMPLIFICACAO DE ACIDOS NUCLEICOSRica Cane
1) O documento descreve técnicas de amplificação de ácidos nucleicos, incluindo a reação em cadeia da polimerase (PCR) que envolve desnaturação, hibridação e extensão.
2) A PCR em tempo real permite monitorar a amplificação em tempo real através da detecção da fluorescência dos produtos da reação.
3) Outras técnicas incluem a amplificação baseada na sequência dos ácidos nucleicos e a amplificação mediada por transcrição.
O documento descreve o processo de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), que permite amplificar seletivamente fragmentos de DNA. A PCR usa primers, nucleotídeos e a enzima DNA polimerase para replicar um pedaço específico de DNA in vitro, gerando milhares de cópias do fragmento. O processo consiste em ciclos de aquecimento, arrefecimento e extensão para replicar o DNA alvo.
[1] Chips de DNA permitem a análise simultânea da expressão de milhares de genes em diferentes tipos de células. [2] Podem ser usados para descobrir novos genes e compreender como as células respondem a perturbações. [3] Têm aplicações no diagnóstico de doenças, investigação do desenvolvimento de doenças e efeitos de fármacos.
Kits de Extração / Purificação de DNA/RNA - HiMediaHimediaBrasil
O documento descreve vários kits para extração e purificação de DNA e RNA. Ele explica os principais passos do processo de extração, incluindo a lise celular, ligação do DNA/RNA à membrana de sílica, lavagem e eluição do DNA/RNA purificado. Além disso, fornece detalhes sobre cada um dos kits disponíveis para diferentes tipos de amostras, como sangue, bactérias, plantas, entre outros.
O documento discute a técnica de RNA-seq para medir níveis de transcritos usando sequenciamento de próxima geração. RNA-seq permite quantificar expressão gênica com alta sensibilidade, identificar novas transcrições e splicing alternativo. A técnica é útil para estudar transcriptomas sob diferentes condições e doenças.
Este documento descreve um estudo sobre a utilização de marcadores moleculares para diferenciar genótipos de arroz selvagem (Oryza glumepatula) de duas populações diferentes. O resumo apresenta os objetivos de diferenciar as populações e caracterizar os genótipos com loci gênicos em heterozigose e homozigose. Também descreve os métodos utilizados, incluindo extração de DNA, PCR-SSR, eletroforese em gel de agarose e poliacrilamida, e análise dos resultados por meio
O documento fornece uma introdução sobre bioinformática, definindo o termo e descrevendo como combina diferentes áreas como matemática, estatística e ciência da computação para processar e analisar dados biológicos. Também resume os principais bancos de dados genômicos como GenBank e ferramentas para análise de sequências como BLAST.
Aula02 tecnicas diagnostico virologia parte 1Hugo Sousa
Este documento descreve várias técnicas imunológicas usadas no diagnóstico virológico, incluindo testes como ELISA, ELFA, imunofluorescência, imunocromatografia, imunohistoquímica e Western blot. Estas técnicas baseiam-se nas interações entre antigénios virais, anticorpos e enzimas para detectar a presença de vírus ou resposta imune.
O documento discute vírus, descrevendo suas características gerais como microorganismos intracelulares obrigatórios que se replicam dentro de células vivas. Também descreve as etapas do ciclo viral como adsorção, penetração, desnudamento, síntese e replicação do genoma, montagem e liberação. Finalmente, discute como os vírus causam doença e formas de transmissão.
Virologia geral - Prof Jean Santos - Odontologia UENPJean Santos
Este documento discute a história, definição e classificação de vírus. Apresenta os principais conceitos sobre a morfologia, especificidade viral, ciclos de replicação e co-evolução entre vírus e hospedeiros. Também aborda o uso terapêutico de vírus e a presença de vírus endógenos no genoma humano.
Os vírus são seres microscópicos acelulares que dependem de células hospedeiras para se replicarem. Eles possuem material genético e capsídeo protetor e causam doenças em humanos, animais e plantas. As vacinas são a melhor forma de prevenção contra doenças virais.
O documento discute vírus e doenças virais. Apresenta informações sobre o que são vírus, como se reproduzem e se multiplicam, e discute diversas doenças causadas por vírus como HIV, sarampo, varíola, caxumba, febre amarela, herpes, hepatite, dengue, poliomielite e raiva.
O documento discute a patogenia das infecções virais, incluindo os mecanismos pelos quais os vírus interagem com as células hospedeiras e causam doença. Aborda os tipos de interação vírus-célula, como citocida, persistente produtiva e não produtiva, e transformação, e seus efeitos na célula. Também descreve fatores que influenciam a susceptibilidade e resistência do hospedeiro, como fatores genéticos, idade e nutrição.
O documento discute as características gerais dos vírus, incluindo sua localização entre o nível molecular e celular, dependência de células hospedeiras para se reproduzir, e estrutura básica contendo genoma e capsídeo. O documento também fornece exemplos de vírus específicos, como o vírus da gripe A e HIV.
Virologia geral - Métodos de estudo e diagnóstico viralWilia Diederichsen
O documento discute métodos de diagnóstico viral, incluindo pesquisa do vírus, propriedades biológicas, ácido nucléico e anticorpos através de exames diretos como isolamento em animais, ovos embrionados e cultura celular, e exames indiretos como pesquisa de antígenos e ácidos nucleicos por meio de provas sorológicas, moleculares e microscopia eletrônica.
O documento descreve as etapas do ciclo replicativo viral, incluindo adsorção, penetração, desnudamento, transcrição, tradução, replicação, maturação e eluição. Ele também discute conceitos como receptores celulares, tropismo viral e estratégias de replicação para diferentes classes de vírus.
O documento discute o papel dos testes moleculares para detecção do HPV no rastreamento do câncer de colo uterino, comparando-os com a citologia convencional. Os testes moleculares, como PCR e Captura Híbrida, fornecem maior sensibilidade na detecção do HPV e podem ser usados para triagem de mulheres com ASCUS ou rastreamento combinado com citologia. O rastreamento organizado é essencial para aumentar a cobertura e qualidade do diagnóstico precoce do câncer de colo.
O documento descreve as características e o ciclo de vida dos vírus. São seres acelulares extremamente pequenos que precisam invadir células para se replicar, sequestrando o metabolismo celular para produzir novos vírus. Existem diferentes tipos de vírus que causam doenças como o resfriado, a gripe, o sarampo e a AIDS, sendo a prevenção feita principalmente por vacinas.
Quantifiler™ Trio: Decision-support to help streamline Sexual Assault sample ...Thermo Fisher Scientific
Quantifiler™ Trio:
Decision-support to help streamline
Sexual Assault sample processing. Sheri Olson, Thermo Fisher Scientific
Bode West Meeting
March 2015, Coronado, CA
Comparação entre citologia e hibridização in situRoberta
Este documento apresenta os resultados de uma pesquisa sobre a incidência do Poliomavírus BK (BKV) na citologia urinária de pacientes transplantados renais. O estudo comparou a citologia urinária com a técnica de hibridização in situ para diagnosticar infecções por BKV. Os resultados indicaram que a identificação de células decoy na citologia urinária pode ajudar no diagnóstico, embora possa levar a falsos positivos. A hibridização in situ mostrou alta correlação com a citologia e permite distinguir
Clinical molecular diagnostics for drug guidanceNikesh Shah
1. Be familiar with next generation molecular diagnostic techniques that can provide guidance in clinical decision making
2. Identify the utility of these diagnostic approaches with some examples
3. Be aware of the challenges that exist in implementing these tools as part of the routine clinical decision making process, especially in resource limited settings
Este documento faz uma série de perguntas sobre objetos, programas de TV, músicas e costumes populares das décadas de 1960-1980 no Brasil. A intenção é identificar se a pessoa respondeu "SIM" a pelo menos 30% das perguntas, indicando que ela nasceu naquela época e tem "DNA de data de nascimento antiga".
Virologia geral_ métodos de inativaçao e preservação viral Wilia Diederichsen
O documento discute métodos de inativação e preservação de vírus usando agentes físicos e químicos. Ele descreve como a temperatura, radiação, pH e agentes químicos como hipoclorito de sódio podem inativar vírus. Também explica como a refrigeração, sais, liofilização e aditivos como glicerol ou soro fetal bovino podem preservar vírus por mais tempo.
This document provides a general overview of cancer. It begins by discussing whether cancer is genetic, infectious, acquired, sexually transmitted, preventable, or hereditary. It then provides brief introductions to common types and sites of cancer. The document discusses the epidemiology of cancer globally and identifies some of the main risk factors and causes of cancer development, including genetic, environmental, viral, and lifestyle factors. It provides an overview of carcinogenesis and the multistep process by which normal cells transform into cancer cells. The stages of cancer screening, diagnosis, grading, and staging are also summarized.
Este documento apresenta um curso básico de virologia elaborado por um professor de virologia. O curso inclui informações sobre a história da virologia, métodos de estudo de vírus, classificação de vírus, ciclo de vida viral e agentes causadores de doenças em animais. Além disso, fornece recomendações de literatura e sites sobre virologia para estudos adicionais.
O documento fornece uma introdução sobre as propriedades gerais dos vírus, incluindo que eles são parasitas intracelulares obrigatórios, contêm apenas DNA ou RNA, e são extremamente pequenos, medidos em nanômetros. Também discute a morfologia dos vírus, explicando que uma partícula viral contém genoma envolvido por uma cápside protéica, e alguns vírus possuem também um envelope externo.
Aula t02 colheita e manipulação de amostras biológicasHugo Sousa
Este documento descreve os procedimentos para a colheita e manipulação de amostras biológicas para análise virológica, incluindo a seleção do tipo de amostra, métodos de colheita de diferentes materiais biológicos como sangue e urina, e o uso de meios de transporte para armazenamento temporário das amostras.
Aula t01 normas e boas práticas de segurança laboratorialHugo Sousa
O documento discute normas e boas práticas de segurança laboratorial para virologia. Apresenta informações sobre erros humanos, formação contínua, perigos de produtos químicos e biológicos, conhecimento de protocolos, postulados de Koch e Rivers, grupos de risco biológico, tipos de laboratórios, câmaras de segurança biológica, proteção individual, utilização de micropipetas e eliminação de resíduos.
Este documento fornece uma introdução sobre vírus, abordando tópicos como perspectiva histórica, definição, estrutura, replicação, classificação e efeitos celulares de infecções virais. O documento discute a descoberta de vírus ao longo da história e fornece detalhes sobre a estrutura, replicação e classificação de vírus.
O documento discute estratégias de prevenção do câncer de colo de útero, incluindo a vacinação contra HPV e rastreamento. Aborda o estado da arte em Portugal, com a introdução da vacina no programa nacional de vacinação e testes de rastreamento organizado em diferentes regiões. Também considera novas abordagens à luz da vacinação, como a necessidade de melhorar a sensibilidade dos testes de rastreamento.
O documento descreve a epidemiologia, etiologia, patologia e diagnóstico do cancro gástrico. Apresenta dados sobre a incidência e fatores de risco, destacando o papel da infeção por Helicobacter pylori na carcinogénese gástrica através de um modelo de progressão histológica das lesões. Descreve ainda os principais tipos histológicos, sinais e sintomas e o sistema TNM de estadiamento da doença.
This document discusses HPV and the immune response to HPV. It covers HPV infection and pathogenesis, how HPV evades the immune system, and the immune response to HPV. Key points include that HPV infects basal keratinocytes and replicates without causing inflammation, allowing persistent infection. HPV proteins E6, E7, and E5 help HPV evade detection by suppressing interferon signaling and downregulating MHC class I presentation. Despite this, most HPV infections are cleared by cell-mediated immunity within 2 years.
Herpesviruses are enveloped viruses that contain double-stranded DNA. They can establish latent or persistent infections following primary infection. There are three subfamilies of herpesviruses - Alphaherpesvirinae, Betaherpesvirinae, and Gammaherpesvirinae - which differ in their growth characteristics and sites of latency. Primary infections and reactivations are more serious in immunocompromised patients. Common human herpesviruses include HSV-1, HSV-2, VZV, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, and HHV-8, which cause diseases like cold sores, chickenpox, mononucleosis, and some cancers
Este documento fornece um resumo das principais características do vírus do papiloma humano (HPV) em 3 frases:
O HPV é um vírus ubíquo que infecta células epiteliais e mucosas, existem tipos de baixo e alto risco que podem causar verrugas ou lesões precursoras de câncer, respectivamente. O HPV causa carcinogênese através da integração do DNA viral no genoma hospedeiro e da expressão desregulada das proteínas E6 e E7, levando à im
O documento discute as características gerais do vírus de Epstein-Barr (EBV), incluindo sua capacidade de infectar células B e epiteliais, causar infecções persistentes e estar associado a vários tipos de câncer. O EBV pode ser transmitido através da saliva e causar a mononucleose infecciosa. Ele também discute o papel do EBV na patogênese do câncer da nasofaringe.
2. real-time PCR
Técnicas
Biologia
Molecular
TÉCNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR
Detecção do genoma viral
Futuro do diagnóstico de vírus
Necessidade de equipamento e pessoal treinado
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 2
3. real-time PCR
Técnicas
TÉCNICAS Biologia
Molecular
Métodos de Amplificação
Polimerase Chain Reaction (PCR)
Restriction Fragment Lenght Position (RFLP)
Single Strand Conformation Polymorphism (SSCP)
Reverse Transcriptase - Polimerase Chain Reaction (RT- PCR)
Real-Time PCR
Sequenciação
Métodos de Hibridização
Captura Híbrida
Southern Blot
Hibridização em tiras
CHIPS
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 3
4. 4
Extracção Ácidos Nucleicos
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II
5. real-time PCR
Técnicas
Extracção Ácidos Nucleicos Biologia
Molecular
Líse alcalina;
Neutralização;
Precipitação de Proteínas e detritos celulares;
Purificação Ácidos Nucleicos
Precipitação
Eluição em colunas
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 5
6. real-time PCR
Técnicas
Extracção Ácidos Nucleicos Biologia
Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 6
7. real-time PCR
Técnicas
Extracção Ácidos Nucleicos Biologia
Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 7
9. real-time PCR
Técnicas
Extracção Ácidos Nucleicos Biologia
Molecular
Avaliação Ácidos Nucleicos por Espectofotometria UV
Estimar a concentração de DNA e RNA a ~260nm.
[dsDNA] ≈ A260 x (50 µg/mL)
[ssRNA] ≈ A260 x (40 µg/mL)
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 9
10. 10
Técnicas de Amplificação AN
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II
11. real-time PCR
Técnicas
Polymerase Chain Reaction Biologia
Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 11
12. real-time PCR
Técnicas
Polymerase Chain Reaction Biologia
Molecular
Amplifica um fragmento de DNA especifico;
Amplificação através de ciclos repetidos que vão permitir obter milhões de
cópias do fragmento pretendido;
Fragmento pretendido está localizado entre duas regiões de DNA de
sequência conhecida;
5’ – (…) ATGCGTATCGATCGATATCGATAAGCTAGCTAGGCTA (…) – 3’
3’ – (…) TACGCATAGCTAGCTATAGCTATTCGATCGATCCGAT (…) – 5’
Região Alvo
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 12
13. real-time PCR
Técnicas
Polymerase Chain Reaction Biologia
Molecular
MISTURA DE REACÇÃO:
DNA
Primers: Oligonucleótidos de cadeia simples com
sequência complementar às sequências alvo do
ADN (idealmente 20-24 nucleótidos);
Buffer: Solução tampão para estabilizar a reacção;
Mg2+ (Magnésio): Ajuda na ligação dos nucleótidos
e estabilidade da Taq;
dNTP’s: Nucleótidos livres (A, T, C, G);
Taq polimerase: Enzima termo-estável (+/-72ºC)
que efectua a cópia da sequencia alvo do ADN.
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 13
15. real-time PCR
Técnicas
Polymerase Chain Reaction Biologia
Molecular
PROCEDIMENTO
4º Passo: Repetição dos passos anteriores por 30-45 ciclos no máximo;
FINAL: Obtenção de 2nºciclos copias do fragmento alvo.
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 15
16. real-time PCR
Técnicas
Polymerase Chain Reaction Biologia
Molecular
Electroforese em Gel de Agarose:
Separa as moléculas (proteínas ou ácidos núcleicos) de acordo com o seu
peso molecular;
DNA e RNA possuem carga eléctrica negativa migram para o pólo positivo
(quanto mais pequenas mais migram);
Brometo de Etídeo que se vai intercalar na dupla hélice de ADN e possibilitar
a visualização dos fragmentos quando em exposição a luz UV;
Amostras da PCR carregadas no gel;
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 16
18. real-time PCR
Técnicas
Polymerase Chain Reaction Biologia
Molecular
APLICAÇÕES
Detecção de sequências específicas de DNA viral
Detecção AdV em amostras respiratórias
Detecção EBV em biópsias Nasofaringe
Detecção JCV em LCR
...
DESVANTAGENS
Altamente sensível a contaminação com quantidades residuais de DNA.
Falsos positivos e artefactos.
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 18
19. Restriction real-time PCR
Fragment Técnicas Length
Biologia
Polymorphism (RFLP) Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 19
20. Restriction real-time PCR
Fragment Técnicas Length
Biologia
Polymorphism (RFLP) Molecular
Baseada na técnica da PCR;
Análise de polimorfismos (mutações pontuais funcionais);
Variação no tamanho de fragmentos de DNA provocada pela actividade
diferencial de enzimas de restrição (cortam o DNA numa sequência
específica)
Presença de polimorfismo Perda ou ganho de local de restrição
Variação no tamanho de fragmentos de DNA.
5’ – (…) ACTGA (…) – 3’
3’ – (…) TGACT (…) – 5’
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 20
21. Restriction real-time PCR
Fragment Técnicas Length
Biologia
Polymorphism (RFLP) Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 21
22. Restriction real-time PCR
Fragment Técnicas Length
Biologia
Polymorphism (RFLP) Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 22
23. Restriction real-time PCR
Fragment Técnicas Length
Biologia
Polymorphism (RFLP) Molecular
APLICAÇÕES
Detecção de variantes Virais
Detecção variantes CMV – Associação com resposta a terapia
Detecção variantes HPV – Associação com patologias
Detecção variantes EBV – Associação com agressividade
...
DESVANTAGENS
Todas as do PCR
Sensível a contaminação por DNAses
Artefactos
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 23
24. Single Strand real-time PCR
Conformation
Técnicas
Biologia
Polymorphism (SSCP) Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 24
25. Single Strand real-time PCR
Conformation
Técnicas Biologia
Polymorphism (SSCP) Molecular
Baseada na técnica da PCR;
Análise de polimorfismos/mutações;
Diferenças de sequência de um único nucleótido são suficientes para que
cadeias simples de DNA adquiram uma conformação tri-dimensional
diferente;
Gel de Poliacrilamida permite correr as amostras (apenas em cadeia
simples/desnaturadas) em função da sua conformação.
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 25
26. Single Strand real-time PCR
Conformation
Técnicas
Biologia
Polymorphism (SSCP) Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 26
27. Single Strand real-time PCR
Conformation
Técnicas Biologia
Polymorphism (SSCP) Molecular
APLICAÇÕES
Detecção de variantes Virais
Detecção variantes CMV – Associação com resposta a terapia
Detecção variantes HPV – Associação com agressividade
...
DESVANTAGENS
Todas as do PCR
Contaminações
Leitura gel poliacrilamida
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II
28. real-time PCR
Técnicas
ReverseTranscriptase PCR Biologia
Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 28
29. real-time PCR
Técnicas
ReverseTranscriptase PCR Biologia
Molecular
Baseada na técnica da PCR;
Análise de expressão de mRNA;
Usa a enzima Transcritase Reversa para converter o mRNA em cDNA;
Protocolo PCR para aumentar exponencialmente o número de cópias do
mRNA;
mRNA: 5’ – AUGCGUAUCGAUAUCGAUAAGCUA (…) AAAAAAAAA – 3’
TTTTTTTTTT – 5’
Molécula Alvo
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 29
30. real-time PCR
Técnicas
ReverseTranscriptase PCR Biologia
Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 30
31. real-time PCR
Técnicas
ReverseTranscriptase PCR Biologia
Molecular
VANTAGENS
Permite fazer análise quantitativa
da expressão de mRNA.
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 31
32. real-time PCR
Técnicas
ReverseTranscriptase PCR Biologia
Molecular
APLICAÇÕES
Expressão mRNA viral
Avaliação actividade viral
DESVANTAGENS
Todas as do PCR
Contaminações
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II
33. real-time PCR
Técnicas
RealTime PCR Biologia
Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 33
34. real-time PCR
Técnicas
RealTime PCR Biologia
Molecular
PCR was traditionally limited to end-point analysis
using agarose gels
Limitations of end-point PCR:
Poor precision
Low sensitivity
Short dynamic range
Low resolution
Size-based discrimination
Ethidium bromide for staining does not allow
for accurate quantitation
Requires post-PCR processing
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 34
35. real-time PCR
Técnicas
RealTime PCR Biologia
Molecular
Monitoriza a fluorescência
emitida durante a reacção de
PCR como um indicador da
produções de amplicões em
cada ciclo de PCR;
Monitorização em tempo real;
Detecção da amplificação nos
estádios precoces da reacção –
maior precisão;
Alvo: DNA ou RNA
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 35
36. real-time PCR
Técnicas
RealTime PCR Biologia
Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 36
37. real-time PCR
Técnicas
RealTime PCR Biologia
Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 37
38. real-time PCR
Técnicas
RealTime PCR Biologia
Molecular
SYBR Green I Sonda de Hibridação Sonda TaqMan
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 38
39. real-time PCR
Técnicas
RealTime PCR Biologia
Molecular
Exponential
If 100% efficiency – exact doubling of
products. Specific and precise
Linear PCR phases in linear view
High variability. Reaction components Plateau
are being consumed and PCR products
are starting to degrade.
[DNA] Linear
Plateau
End-point analysis. The reaction has
stopped and if left for long – Exponential Cycle #
degradation of PCR products.
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 39
40. real-time PCR
Técnicas
RealTime PCR Biologia
Molecular
Baseline – The baseline phase contains
all the amplification that is below the
level of detection of the real time
instrument.
Threshold – where the threshold and
the amplification plot intersect defines
CT. Can be set manually/automatically
CT – (cycle threshold) the cycle number
where the fluorescence passes the
threshold
Rn – (Rn-baseline)
NTC – no template control
DRn is plotted against cycle numbers to
produce the amplification curves and
gives the CT value.
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 40
41. real-time PCR
Técnicas
RealTime PCR Biologia
Molecular
CT = threshold cycle
Fracção dos ciclos de
PCR a partir da qual é
detectado sinal
Quanto maior a quantidade de DNA, menor o valor de Ct
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 41
42. real-time PCR
Técnicas
RealTime PCR Biologia
Molecular
Aplicações
Quantificação carga viral
Monitorização carga viral
Monitorização terapêutica
VANTAGENS
Amplificação monitorizada em tempo real
Ausência de processamento pós PCR (baixo risco de contaminação)
Requer pouca quantidade de amostra (DNA ou RNA)
Rápido, Específico, sensível e reprodutível
Quantitativo
Barato
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 42
43. real-time PCR
Técnicas
Sequenciação Biologia
Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 43
44. real-time PCR
Técnicas
Sequenciação Biologia
Molecular
Usada para determinar a sequência de nucleótidos
Método de sequenciação mais utilizado – método didesoxi
Adição de didesoxinucleótidos que terminam a reacção de polimerização
3’ OH – necessário para adição do nucleótido seguinte
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 44
45. real-time PCR
Técnicas
Sequenciação Biologia
Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 45
46. real-time PCR
Técnicas
Sequenciação Biologia
Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 46
47. 47
Técnicas de Hibridização
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II
48. real-time PCR
Técnicas
Técnicas de Hibridização Biologia
Molecular
Alvo – DNA ou RNA
Utilização de sondas
específicas
Possibilidade de diferenciação
entre subtipos de vírus
Técnicas
Captura Híbrida
Hibridização em tiras
Southern Blotting
CHIPS
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 48
49. real-time PCR
Técnicas
Captura Híbrida Biologia
Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 49
50. real-time PCR
Técnicas
Captura Híbrida Biologia
Molecular
Principio da técnica
Hibridização de Ácidos Nucleicos
Amplificação sinal por Quimioluminescência
Método semiquantitativo
Método
Hibridização amostras positivas com sondas específicas
Complexo Sonda-Amostra é capturado por anticorpos de uma microplaca
Reacção com anticorpo secundário conjudado com FA
Adição de reagente e detecção por quimioluminescência
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 50
51. real-time PCR
Técnicas
Captura Híbrida Biologia
Molecular
45 minutes
at 65ºC
60 minutes
at 65ºC
15 minutes
30 minutes
60 minutes
agitação
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 51
52. real-time PCR
Técnicas
Southern Blot Biologia
Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 52
53. real-time PCR
Técnicas
Southern Blot Biologia
Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 53
54. real-time PCR
Técnicas
Hibridização em tiras Biologia
Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 54
55. real-time PCR
Técnicas
Hibridização em tiras Biologia
Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 55
56. real-time PCR
Técnicas
Chips Biologia
Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 56
57. real-time PCR
Técnicas
Chips Biologia
Molecular
Tipagem de vírus:
HPV, HCV, HIV
Tubos ou lâminas com sondas
específicas para cada subtipo
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 57
58. real-time PCR
Técnicas
Chips Biologia
Molecular
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 58
59. We ask the lab for a diagnosis,
expecting a yes or no, but often
end up with just a maybe…
Professor Mark Pallen
Aula 4 - Técnicas Diagnóstico Virologia - Parte II 59