Definição: • É uma coleção de pontos microscópicos, usualmente preenchidos com DNA, que contém sondas para determinar moléculas-alvo produzindo resultados quantitativos. • Uma molécula-alvo em determinada condição pode se ligar por hibridação em “arranjo” predefinido de moléculas denominadas probes (sondas) quimicamente ligadas à superfície sólida (Laminas, membranas de náilon, superfícies de quartzo, perolas revestidas) Histórico: • Evolução dos blot • Existe desde 1980 e 1990 • 1ª descrição: 1995 com microarrays miniaturizados • 1ª empresa de microarrays no mundo: Affymetrix Principio (metodologia): • Consiste na hibridização de uma sonda complementar (probe) e uma molécula-alvo marcada com um fluoróforo, fixadas em uma superfície sólida através de agulhas robotizadas, fotolitografia ou por impressão a jato. • Etapas: Hibridização, aquisição de imagens e análise de dados. Cuidados para realização do microarray: • Os casos e os controles devem ser pareados e processados conjuntamente • Não se deve mudar o operador da etapa de síntese ou durante as extrações de RNA • Método de extração único • As máquinas não devem ser diferentes • Número de amostra bem delineado (obtenção da estatística desejada) • Amostras em pool (conjunto de amostras testadas simultaneamente) devem ser muito bem selecionadas • Analisar se é necessário fazer replicatas técnicas ou biológicas (técnicas: experimentos independentes com reagente e estrutura distintos; biológicas: visam a reprodutibilidade do DNA) • DNAgenomico pode atrapalhar na hibridação especifica com as probes e ainda ser “coibridantes” em protocolos que usam cDNA Utilização: • Análise de expressão gênica • Análise de mutações pontuais • Diagnóstico de doenças infecciosas e genéticas • Área forense • Farmacogenômica Referências: http://dle.com.br/biologia-molecular-genetica-humana/analise-cromossomica-por-microarray http://www.embl.it/training/scienceforschools/teacher_training/teachingbase/microarray_port/introduction_microarrays_port.pdf https://pt.wikipedia.org/wiki/Microarranjo Strachan,T; Read, A. Genética Molecular Humana. 4ª edição. Artmed: Porto Alegre, 2013.

1. Microarrays (microarranjos)
Uniasselvi Fameblu II
Acadêmica: Beatriz Henkels
Engenharia Genética – 5° semestre – Biomedicina - Noturno

2. Microarray (microarranjo):
O que é?
É uma coleção de
pontos microscópicos,
usualmente preenchidos
com DNA, que contém
sondas para determinar
moléculas-alvo
produzindo resultados
quantitativos

3. Histórico
 Evolução dos blot
 1980-1990
 Edwin Southern
 1ª empresa de
microarrays no
mundo: Affymetrix

5. Princípio (metodologia)
Consiste na hibridização
de uma sonda
complementar (probe) e
uma molécula-alvo
marcada com um
fluoróforo (CY3 e CY5),
fixadas em uma superfície
sólida através de agulha
robotizadas, fotolitografia
ou por impressão a jato

6. Etapas
1. Hibridização
2. Aquisição de imagem
3. Análise de dados

11. Análise de dados

12. Utilização dos microarrays
 Análise de expressão gênica
 Análise de mutações pontuais
 Diagnóstico de doenças infecciosas e genéticas
 Área forense
 Farmacogenômica