O documento discute o potencial da terapia celular, especialmente células-tronco mesenquimais, no tratamento de tendinite equina. As células-tronco mesenquimais podem ser isoladas da medula óssea ou tecido adiposo e cultivadas para implante no local da lesão, onde podem promover neovascularização, melhorar a qualidade do tecido tendíneo e acelerar a cicatrização através de fatores de crescimento liberados. Os resultados iniciais sugerem que a terapia celular associada ao plasma r

1. Terapia celular no tratamento de tendinite equina – 2010 Profa. Ana Liz Garcia Alves

2. Terapia celular no tratamento de tendinite equina Profa. Dra. Ana Liz Garcia Alves Departamento de Cirurgia e Anestesiologia Veterinária Email: [email_address]

3. A enfermidade tendínea diminui o desempenho de cavalos atletas e representa um impacto econômico na indústria eqüina.

4. Transferir a força biomecânica dos músculos para o osso, promovendo a movimentação do esqueleto TFDS

5. TENDINITES Manifestações clínicas: Alta incidência do envolvimento do TDFS, em terço médio de metacarpo ou junto a bainha sinovial

6. Incidência de tendinites WILLIANS et al., 2001 ROSS, 2004 1992 N = 1045 (193); 18,5% 2003 N = 1432 (412); 28,8% LAM et al . , 2007 Grock, 2010

9. Complexo hierárquico H.E. 100x

12. Fisiopatologia: Lesão com ruptura matriz Hemorragia intra-tendínea Processso inflamatório Proliferação de fibroblastos Angiogênese Produção de colágeno Extrínseca Paratendão

13. Fisiopatologia: Colágeno imaturo Arquitetura desorganizada Fibras de pequeno calibre Tipo III Maturação: aumento de: diâmetro das fibras fibras colágenas tipo I nº de ligações estáveis semanas à meses Média: 8 – 12 sem.

17. Área da lesão = 31,04mm2 Área do tendão = 97mm2 Porcentagem da área de lesão = 30% Esquema do cálculo da porcentagem da área da lesão

23. Células tronco São células que possuem a capacidade de se dividir dando origem a células semelhantes às progenitoras e de se diferenciar em outros tipos celulares diferenciação replicação célula tronco célula especializada célula tronco Identificada ( FRIEDENSTEIN, 1966 )- (JOHNSTONE et al, 1998)

24. Classificação das células tronco quanto a diferenciação

28. diferença * Célula tronco adulta * Célula tronco embrionária * Pode ser extraída no indivíduo adulto para implante autólogo * Menor risco da formação de teratomas nos implantes * Não necessita da destruição obrigatória do embrião (blastocisto) para a sua obtenção * Por ser pluripotente tem a capacidade de se diferenciar em diversos tipos celulares * Maior facilidade no cultivo e na diferenciação celular * Maior resistência a períodos longos de cultura

30. Células mesenquimais Potencial terapêutico nas lesões ortopédicas dos eqüinos em função de sua habilidade de Auto renovação e diferenciação.

33. DAVIS (1996) PERÍODO DO IMPLANTE

36. Coleta de células mesenquimais

38. Separação da fração mononuclear Ficoll Hypaque: – Filtragem – Centrifugação refrigerada – Separação Botão celular contendo a fração mononuclear

39. Identificação celular Citologia Zago&Covas, 20006 Microscopia confocal

41. Preparo para o implante Volume: 0,7ml suspensão celular diluído em soro autólogo

42. CTM derivada da medula óssea 100x

43. Células mesenquimais em cultura Laboratório de Reprodução Avançada e Terapia Celular FMVZ – UNESP - Botucatu

46. Separação da fração vascular estromal

47. Plaqueamento das CTM derivadas do tecido adiposo 400x

48. Plaqueamento das CTM derivadas do tecido adiposo 200x 100x

49. Implante no local de lesão

50. Injeção de células mesenquimais no tendão flexor digital superficial

60. CLÍNICO RESULTADOS FUNCIONAL

61. Avaliação ultra-sonográfica Doppler Terapia celular 14 dias Terapia celular 21 dias

62. Avaliação do implante: Biópsia Tendínea

63. Imunomarca ç ão nuclear para o anticorpo Ki-67 (clone MIB1), BC, DAB contra colora ç ão Hematoxilina, observado ao microsc ó pio ó ptico 400x. T – Grupo tratado. C – Grupo controle. C T Proliferação celular BARREIRA, 2005 – Tese de Dourorado 30µm RESULTADOS

64. RESULTADOS: Presença de neovasos H.E. 40x H.E. 40x Grupo tratado Grupo controle

66. Terapia celular

68. Tratamento Cirúrgico: diminuir a inflamação inicial Drenagem (Splitting) tendíneo Estudar o tamanho da lesão

70. Tendinite FDS e espessamento ligamento anular Manifestações clínicas:

71. Tratamento Cirúrgico: Desmotomia do Anular - aplicação : tendinite distal ou tenossinovite crônica

74. Atividade física DAVIS (1996)

75. REGENERAÇÃO Conceitos atuais: necessidade de descoberta dos fatores que determinam o sinal para a divisão celular de células estáveis e permanentes. Conceitos fixos: determinadas estruturas “nunca regeneram ” Microscopia confocal Elisabeth Ehler 2006