2. ConceitoConceito
Conjunto de técnicas que permitem cultivar ou manter
células isoladas fora do organismo onde existem,
mantendo as características próprias;
A cultura de tecidos é um termo genérico que inclui a
cultura de órgãos, o qual é o crescimento de pequenos
fragmentos de tecidos ou de um completo órgão
embrionário, essa cultura implica a prévia
desagregação (mecânica ou enzimática) do tecido
original e em que as células são cultivadas numa
camada aderente, num substrato sólido ou em
suspensão em meio de cultura.
3. Alguns DestaquesAlguns Destaques
Ferramenta de estudos de processos biologicos
Grande avanço (1940):
Surgimento dos antibióticos
Crescimento de linhagens celulares a partir de células
isoladas que aderiam à superfície de placas de cultura.
6. Linhagem de célulasLinhagem de células
As células podem proliferar indefinidamente e
poderão ser propagadas como uma linhagem de
células;
podem ser preparadas a partir de
células cancerígenas
7. Linhagem de célulasLinhagem de células
Assim…
A uniformidade genética de uma linhagem de células
pode ser melhorada pela clonagem celular, em que
uma única célula é isolada e prolifera-se para formar
posteriormente uma colónia;
Podem ser armazenadas em azoto (N) líquido a - 196ºC,
por um período muito longo e continuarem viáveis,
quando descongeladas.
8. Exemplos de cultura de célulasExemplos de cultura de células
Fig. 1 – Células em cultura
9. Meios de cultura de células e orgãosMeios de cultura de células e orgãos
11. IsolamentoIsolamento
Marcação específica
das células com
anticorpos acoplados a
um corante
fluorescente, em
seguida, a separação
destas células
marcadas das não
marcadas num
separador de células
ativado por
fluorescência;
Fig. 3 – Citometria de fluxo
12. PreparaçãoPreparação
B- Cultivo em placas de cultura
Ao contrário das bactérias, a maior parte das células
de tecidos não estão adaptadas para viverem em
suspensão e necessitam de uma superfície sólida para
crescerem e dividirem-se, que é agora usualmente a
superfície plástica de uma placa de cultura de tecidos;
Fig.4- Microdissecção
13. Aminoácidos Vitaminas Sais Outros Proteínas (necessárias em meios sem
soro, quimicamente definidos)
Arginina
Cistina
Glutamina
Histidina
Isoleucina
Leucina
Lisina
Metionina
Fenilalanina
Treonina
Triptofano
Tirosina
Valina
Biotina
Colina
Folato
Nicotinamida
Pantotenato
Piridoxal
Tiamina
Riboflavina
NaCl
KCl
NaH2PO4
NaHCO3
CaCl2
MgCl2
Glicose
Penicilina
Estreptomicina
Vermelho de fenol
Soro
Insulina
Transferrina
Factores específicos de crescimento
Composição de um Meio Típico AdequadoComposição de um Meio Típico Adequado
para o Cultivo de Células de Mamíferospara o Cultivo de Células de Mamíferos
Fig.5 – Tabela de componentes de um meio típico
Algumas células não crescem nem se diferenciam se a placa não
estiver coberta com componentes específicos da matriz extracelular.
25. AgradecimentosAgradecimentos
Agradecimentos aos que deAgradecimentos aos que de
alguma forma contribuíramalguma forma contribuíram
para realização destepara realização deste
seminário...seminário...
Orientador: Prof. Me.Orientador: Prof. Me.
Adalberto A. M. Neto;Adalberto A. M. Neto;
Aos colegas de classe.Aos colegas de classe.
Obrigado ...Obrigado ...
Notas do Editor
- Os tecidos humanos podem ser obtidos nas cirurgias, biópsias e autópsias, ou retiradas de fetos ou placentas; - Os tecidos animais podem ser recolhidos nos matadouros ou em animais de laboratório abatidos humanamente. Mantendo as característica que possuem no tecido e organismo. Os métodos de cultura de tecido estão sendo desenvolvidos para o transplante das células produtoras de insulina, isoladas de um tecido pancreático fetal em pacientes com diabetes que não respondem ao tratamento médico convencional.
Células L – linhagem de células de fibroblasto de rato
As células apresentam as propriedades associadas à sua origem com por exemplo células nervosas estabelecem sinapse com outras, células derivadas do musculo esquelético contraem espontaneamente na placa de cultura Citar exemplos: células derivadas do músculo esquelético embrionário fundem-se para formar fibras musculares gigantes, que contraem espontaneamente na placa de cultura; células nervosas lançam axônios que são electricamente excitáveis e fazem sinapse com outra célula nervosa; células epiteliais que formam extensas lâminas com muitas das propriedades de um epitélio intacto. Dadas as condições apropriadas a maior parte das células animais e vegetais poderão viver, multiplicar-se até mesmo expressar propriedades diferenciadas numa placa de cultura de tecidos. As células podem ser observadas num microscópio ou analisadas bioquimicamente e os efeitos da adição ou remoção de moléculas específicas, tais como hormonas ou factores d crescimento, podem ser explorados Células da pele humana, por exemplo, duram por vários meses em cultura, dividindo-se apenas 50 a 100 vezes antes de morrerem. Tem sido sugerido que este limite de tempo de vida está relacionado com o limite de tempo de vida do animal do qual a célula se derivou.
Linhagem de células preparadas a partir de células cancerígenas diferem de várias formas das preparadas a partir de células normais. Por exemplo, as linhagens de células cancerígenas frequentemente crescem sem se fixarem a uma superfície, proliferam em densidades muito mais altas em placas de cultura.
Uma das utilidades mais importantes de clonagem celular é o isolamento de linhagens de células mutantes com defeitos em genes específicos. O estudo de células defectivas em uma determinada proteína revela, frequentemente, um pouco da função desta proteína nas células normais.
A- fibroblastos em cultura B- mioblastos
Mecanismos para separar os diferentes tipos de células presentes numa suspensão celular. Diferenças das propriedades físikas
Quando uma população uniforme de células é obtida por um destes métodos, esta pode ser directamente usada por análise bioquímica ; O tecido pode, então ser dissociado em células individuais viáveis, através de uma agitação branda; Vantagem dessa tecnica identificar estruturasque tenham afinidades com esses substancias fluorescente. Certas células podem aderir frequentemente a vidro ou a plástico, o que permite a separação destas das células que se aderem menos a estes materiais;
Quando uma população uniforme de células é obtida por um destes métodos, esta pode ser directamente usada por análise bioquímica ; O tecido pode, então ser dissociado em células individuais viáveis, através de uma agitação branda; Por foto da placa Tais células apresentam frequentemente muitas propriedades diferenciadas apropriadas à sua origem: ex.: fibroblastos que continuam a segregar colagénio;
Tabela..dos requerimentos
Reprodutibilidade dos resultados Linhagem de células clonais Controle das condições ambientais Possibilidade de selecionar uma população de células específicas Conhecimento do comportamento e função das células selecionadas
Perda das características – cultivo longo Necessidade de marcadores Confiabilidade dos resultados in vivo – ex: drogas Contaminação Perda de características; Dificuldade de extrapolação pDificuldade de extrapolação para o modelo de organismo intacto.
Necessidade de operadores experientes (com conhecimentos da técnica em condições assépticas, etc); Perda de características fenotípicas; Necessidade do uso de marcadores devido à perda de características fenotípicas; Instabilidade das células (sobretudo em linhas celulares imortais).
Estudo da fisiologia e metabolismo de células específicas Estudar interações entre vários tipos de células – culturas mistas Estudo de neoplasias Testar drogas ou compostos químicos Possibilidade de gerar tecidos artificiais Produção de proteínas terapêuticas