ENFERMAGEM 2012.2
ConceitoConceitoConjunto de técnicas que permitem cultivar ou mantercélulas isoladas fora do organismo onde existem,mante...
Alguns DestaquesAlguns DestaquesFerramenta de estudos de processos biologicosGrande avanço (1940):Surgimento dos antibióti...
Desenvolvimento da Cultura de Células e TecidosDesenvolvimento da Cultura de Células e Tecidos
ClassificaçãoClassificação
Linhagem de célulasLinhagem de célulasAs células podem proliferar indefinidamente epoderão ser propagadas como uma linhag...
Linhagem de célulasLinhagem de célulasAssim…A uniformidade genética de uma linhagem de célulaspode ser melhorada pela clo...
Exemplos de cultura de célulasExemplos de cultura de célulasFig. 1 – Células em cultura
Meios de cultura de células e orgãosMeios de cultura de células e orgãos
IsolamentoIsolamentoCélulas grandessão separadasdas célulaspequenas ecélulas densasde células nãodensas porcentrifugaçãof...
IsolamentoIsolamento Marcação específicadas células comanticorpos acoplados aum corantefluorescente, emseguida, a separaç...
PreparaçãoPreparaçãoB- Cultivo em placas de culturaAo contrário das bactérias, a maior parte das célulasde tecidos não est...
Aminoácidos Vitaminas Sais Outros Proteínas (necessárias em meios semsoro, quimicamente definidos)ArgininaCistinaGlutamina...
Vantagens da Cultura CelularVantagens da Cultura Celular
Desvantagens da Cultura CelularDesvantagens da Cultura Celular
LimitaçõesLimitações
Aplicações gerais da cultura celular
Equipamentos BásicosNecessários ao Cultivo deCélulas e órgão.
Câmara de Fluxo LaminarCâmara de Fluxo Laminar
Estufa de CO2 - Placa de culturaEstufa de CO2 - Placa de cultura
Centrifuga / Microscópio InvertidoCentrifuga / Microscópio Invertido
Agitadores
Culturas de células e tecidosFig. 6 - etapas da célula-tronco 
Fig. 7-HN-5 (de um carcinoma da língua)Aspectos importantes: Dinâmica da divisão e agregação de células normais e canceros...
AgradecimentosAgradecimentosAgradecimentos aos que deAgradecimentos aos que dealguma forma contribuíramalguma forma contri...
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Cultura celular e de órgãos

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Cultura de Células e tecidos.

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  • - Os tecidos humanos podem ser obtidos nas cirurgias, biópsias e autópsias, ou retiradas de fetos ou placentas; - Os tecidos animais podem ser recolhidos nos matadouros ou em animais de laboratório abatidos humanamente. Mantendo as característica que possuem no tecido e organismo. Os métodos de cultura de tecido estão sendo desenvolvidos para o transplante das células produtoras de insulina, isoladas de um tecido pancreático fetal em pacientes com diabetes que não respondem ao tratamento médico convencional.
  • Células L – linhagem de células de fibroblasto de rato
  • As células apresentam as propriedades associadas à sua origem com por exemplo células nervosas estabelecem sinapse com outras, células derivadas do musculo esquelético contraem espontaneamente na placa de cultura Citar exemplos: células derivadas do músculo esquelético embrionário fundem-se para formar fibras musculares gigantes, que contraem espontaneamente na placa de cultura; células nervosas lançam axônios que são electricamente excitáveis e fazem sinapse com outra célula nervosa; células epiteliais que formam extensas lâminas com muitas das propriedades de um epitélio intacto. Dadas as condições apropriadas a maior parte das células animais e vegetais poderão viver, multiplicar-se até mesmo expressar propriedades diferenciadas numa placa de cultura de tecidos. As células podem ser observadas num microscópio ou analisadas bioquimicamente e os efeitos da adição ou remoção de moléculas específicas, tais como hormonas ou factores d crescimento, podem ser explorados Células da pele humana, por exemplo, duram por vários meses em cultura, dividindo-se apenas 50 a 100 vezes antes de morrerem. Tem sido sugerido que este limite de tempo de vida está relacionado com o limite de tempo de vida do animal do qual a célula se derivou.
  • Linhagem de células preparadas a partir de células cancerígenas diferem de várias formas das preparadas a partir de células normais. Por exemplo, as linhagens de células cancerígenas frequentemente crescem sem se fixarem a uma superfície, proliferam em densidades muito mais altas em placas de cultura.
  • Uma das utilidades mais importantes de clonagem celular é o isolamento de linhagens de células mutantes com defeitos em genes específicos. O estudo de células defectivas em uma determinada proteína revela, frequentemente, um pouco da função desta proteína nas células normais.
  • A- fibroblastos em cultura B- mioblastos
  • Mecanismos para separar os diferentes tipos de células presentes numa suspensão celular. Diferenças das propriedades físikas
  • Quando uma população uniforme de células é obtida por um destes métodos, esta pode ser directamente usada por análise bioquímica ; O tecido pode, então ser dissociado em células individuais viáveis, através de uma agitação branda; Vantagem dessa tecnica identificar estruturasque tenham afinidades com esses substancias fluorescente. Certas células podem aderir frequentemente a vidro ou a plástico, o que permite a separação destas das células que se aderem menos a estes materiais;
  • Quando uma população uniforme de células é obtida por um destes métodos, esta pode ser directamente usada por análise bioquímica ; O tecido pode, então ser dissociado em células individuais viáveis, através de uma agitação branda; Por foto da placa Tais células apresentam frequentemente muitas propriedades diferenciadas apropriadas à sua origem: ex.: fibroblastos que continuam a segregar colagénio;
  • Tabela..dos requerimentos
  • Reprodutibilidade dos resultados Linhagem de células clonais Controle das condições ambientais Possibilidade de selecionar uma população de células específicas Conhecimento do comportamento e função das células selecionadas
  • Perda das características – cultivo longo Necessidade de marcadores Confiabilidade dos resultados in vivo – ex: drogas Contaminação Perda de características; Dificuldade de extrapolação pDificuldade de extrapolação para o modelo de organismo intacto.
  • Necessidade de operadores experientes (com conhecimentos da técnica em condições assépticas, etc); Perda de características fenotípicas; Necessidade do uso de marcadores devido à perda de características fenotípicas; Instabilidade das células (sobretudo em linhas celulares imortais).
  • Estudo da fisiologia e metabolismo de células específicas Estudar interações entre vários tipos de células – culturas mistas Estudo de neoplasias Testar drogas ou compostos químicos Possibilidade de gerar tecidos artificiais Produção de proteínas terapêuticas
  • Cultura celular e de órgãos

    1. 1. ENFERMAGEM 2012.2
    2. 2. ConceitoConceitoConjunto de técnicas que permitem cultivar ou mantercélulas isoladas fora do organismo onde existem,mantendo as características próprias;A cultura de tecidos é um termo genérico que inclui acultura de órgãos, o qual é o crescimento de pequenosfragmentos de tecidos ou de um completo órgãoembrionário, essa cultura implica a préviadesagregação (mecânica ou enzimática) do tecidooriginal e em que as células são cultivadas numacamada aderente, num substrato sólido ou emsuspensão em meio de cultura.
    3. 3. Alguns DestaquesAlguns DestaquesFerramenta de estudos de processos biologicosGrande avanço (1940):Surgimento dos antibióticosCrescimento de linhagens celulares a partir de célulasisoladas que aderiam à superfície de placas de cultura.
    4. 4. Desenvolvimento da Cultura de Células e TecidosDesenvolvimento da Cultura de Células e Tecidos
    5. 5. ClassificaçãoClassificação
    6. 6. Linhagem de célulasLinhagem de célulasAs células podem proliferar indefinidamente epoderão ser propagadas como uma linhagem decélulas;podem ser preparadas a partir decélulas cancerígenas
    7. 7. Linhagem de célulasLinhagem de célulasAssim…A uniformidade genética de uma linhagem de célulaspode ser melhorada pela clonagem celular, em queuma única célula é isolada e prolifera-se para formarposteriormente uma colónia;Podem ser armazenadas em azoto (N) líquido a - 196ºC,por um período muito longo e continuarem viáveis,quando descongeladas.
    8. 8. Exemplos de cultura de célulasExemplos de cultura de célulasFig. 1 – Células em cultura
    9. 9. Meios de cultura de células e orgãosMeios de cultura de células e orgãos
    10. 10. IsolamentoIsolamentoCélulas grandessão separadasdas célulaspequenas ecélulas densasde células nãodensas porcentrifugaçãofraccionada;Fig.2 - Centrifugação fracionada
    11. 11. IsolamentoIsolamento Marcação específicadas células comanticorpos acoplados aum corantefluorescente, emseguida, a separaçãodestas célulasmarcadas das nãomarcadas numseparador de célulasativado porfluorescência;Fig. 3 – Citometria de fluxo
    12. 12. PreparaçãoPreparaçãoB- Cultivo em placas de culturaAo contrário das bactérias, a maior parte das célulasde tecidos não estão adaptadas para viverem emsuspensão e necessitam de uma superfície sólida paracrescerem e dividirem-se, que é agora usualmente asuperfície plástica de uma placa de cultura de tecidos;Fig.4- Microdissecção
    13. 13. Aminoácidos Vitaminas Sais Outros Proteínas (necessárias em meios semsoro, quimicamente definidos)ArgininaCistinaGlutaminaHistidinaIsoleucinaLeucinaLisinaMetioninaFenilalaninaTreoninaTriptofanoTirosinaValinaBiotinaColinaFolatoNicotinamidaPantotenatoPiridoxalTiaminaRiboflavinaNaClKClNaH2PO4NaHCO3CaCl2MgCl2GlicosePenicilinaEstreptomicinaVermelho de fenolSoroInsulinaTransferrinaFactores específicos de crescimentoComposição de um Meio Típico AdequadoComposição de um Meio Típico Adequadopara o Cultivo de Células de Mamíferospara o Cultivo de Células de MamíferosFig.5 – Tabela de componentes de um meio típico Algumas células não crescem nem se diferenciam se a placa nãoestiver coberta com componentes específicos da matriz extracelular.
    14. 14. Vantagens da Cultura CelularVantagens da Cultura Celular
    15. 15. Desvantagens da Cultura CelularDesvantagens da Cultura Celular
    16. 16. LimitaçõesLimitações
    17. 17. Aplicações gerais da cultura celular
    18. 18. Equipamentos BásicosNecessários ao Cultivo deCélulas e órgão.
    19. 19. Câmara de Fluxo LaminarCâmara de Fluxo Laminar
    20. 20. Estufa de CO2 - Placa de culturaEstufa de CO2 - Placa de cultura
    21. 21. Centrifuga / Microscópio InvertidoCentrifuga / Microscópio Invertido
    22. 22. Agitadores
    23. 23. Culturas de células e tecidosFig. 6 - etapas da célula-tronco 
    24. 24. Fig. 7-HN-5 (de um carcinoma da língua)Aspectos importantes: Dinâmica da divisão e agregação de células normais e cancerosas;Crescimento X Fatores; Colônia , diferenciação Celular, e meio ambiente.Cultivos de células e tecidos
    25. 25. AgradecimentosAgradecimentosAgradecimentos aos que deAgradecimentos aos que dealguma forma contribuíramalguma forma contribuírampara realização destepara realização desteseminário...seminário...Orientador: Prof. Me.Orientador: Prof. Me.Adalberto A. M. Neto;Adalberto A. M. Neto;Aos colegas de classe.Aos colegas de classe.Obrigado ...Obrigado ...

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