1) O documento descreve um sistema de coloração Giemsa para esfregaços sanguíneos, medula óssea e derrames cavitários, fornecendo instruções sobre preparo do corante, procedimento técnico, controles de qualidade e características de desempenho. 2) São apresentadas duas opções de coloração - May-Grunwald-Giemsa ou apenas Giemsa - com instruções passo a passo para cada uma. 3) Os resultados esperados para cada elemento celular são descritos, assim como limitações do sistema.

1. GIEMSA CORANTES
FINALIDADE REAGENTE
Sistema para coloração de células em esfregaços Corante Giemsa, em pó 8g
de sangue periférico, medula óssea ou para Glicerol 500mL
estudo citológico de elementos celulares Metanol (tamponado pH 6,8) q.s.p. 1000mL
colhidos por punção, raspagem ou concentrados
de elementos celulares de derrames cavitários. APRESENTAÇÃO
Somente para uso diagnóstico in vitro.
Ref. 500 1 x 500mL
Ref. 1000 1 x 1000mL
PRINCÍPIO
Os corantes para esfregaços sanguíneos,
também chamados de pancrômicos, são uma MATERIAIS NECESSÁRIOS NÃO
mistura de corantes de características neutras, FORNECIDOS
dependentes do pH da solução corante, que em • Suporte para coloração.
condições apropriadas coram os componentes • Cronômetro.
nucleares e citoplasmáticos dos leucócitos, com • Lâminas.
predominância de tons vermelhos (quando • Água destilada ou deionizada.
ácidos) e azulados diversos(quando básicos). • Metanol.
O corante de May-Grunwald (1902) é uma • May Grunwald.
mistura de eosina e azul de metileno (não
oxidados), que quimicamente se transforma ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DO
em eosinato de azul de metileno. REAGENTE
Giemsa (Alemanha) desenvolveu, no mesmo
O corante deve ser mantido no frasco original,
período, um corante que leva seu nome e
bem vedado, armazenado à temperatura
que hoje se sabe ser uma mistura de azur
II (mistura equimolar de azur 1 e azul de ambiente (20-30oC) e ao abrigo da luz solar.
metileno) e eosinato de azur II (corante Estável até a data de vencimento indicada no
formado pela combinação equimolar de azur 1, rótulo do frasco, obedecidas as condições de
azul de metileno e eosina amarelada). armazenamento.
Esses dois corantes são utilizados em um Na prática diária o corante é utilizado sob forma
método de coloração mais demorado em que de gotas. Sugere-se o uso de pequeno frasco
após fixação e coloração pelo May Grunwald, se conta-gotas, periodicamente alimentado com o
processa uma segunda coloração com solução corante do frasco estoque.
de Giemsa, obtendo-se um resultado final
melhor e mais detalhado. CUIDADOS E PRECAUÇÕES COM O USO
A necessidade de um único corante que pudesse DO REAGENTE
corar globalmente os elementos celulares Por tratar-se de uma solução alcoólica, deve-se
com os detalhes do MG-Giemsa levou ao tomar os cuidados inerentes ao uso do álcool
desenvolvimento de novos corantes: Leishman em laboratório. Evite pipetar o corante com o
(Inglaterra,1901) e Wright (Inglaterra,1902).
uso da boca. A ingestão acidental do metanol,
São corantes basicamente idênticos, compostos
dependendo da quantidade absorvida, pode ser
de eosina amarelada e produtos de oxidação
fatal. As soluções corantes são para uso
do azul de metileno. A diferença entre ambos
exclusivo in vitro. Seu manuseio deve ser
se restringe ao fato de que o processo de
maturação é mais longo na feitura do corante cuidadoso, evitando-se o contato com pele e
Leishman (em pó). mucosas. Em caso de contaminação acidental,
lavar a área afetada em água corrente. O
PARTICULARIDADES DOS CORANTES descarte do material utilizado deverá ser feito
PANCRÔMICOS DOLES obedecendo-se aos critérios de biossegurança
Na manipulação dos corantes pancrômicos são estabelecidos pelo laboratório, de acordo com
utilizados corantes específicos, previamente as normas locais, estaduais ou federais.
aprovados e de procedência tradicional. O
solvente é representado por metanol, grau
Observar ainda a simbologia
analítico, tamponado a pH 6,7 - 6,8. constante nos rótulos do produto: Inflamável Irritante
SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goiânia)
SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades) 1/3

2. AMOSTRA deverá optar por uma das colorações de acordo
Sangue periférico colhido por punção digital ou com sua preferência e/ou finalidade.
de coleta venosa, com o uso de anticoagulantes Opção 1-Coloração May-Grunwald-Giemsa
adequados (heparina ou soluções de EDTA). 1.Cobrir cada lâmina com 15 a 20 gotas do
Esfregaços de medula óssea e concentrados corante de May Grunwald por 1 a 2 minutos,
celulares de derrames cavitários. Os esfregaços de acordo com a extensão do esfregaço.
feitos a partir de sangue colhido com 2.Acrescentar à lâmina igual número de gotas
anticoagulantes devem ser confeccionados de água destilada, homogeneizar e deixar agir
em até 30 minutos, para se evitar deformações durante 2 minutos.
celulares sob efeito do anticoagulante (ver 3.Deixar escorrer a água da lâmina e cobrir
desenhos: como fazer esfregaços sanguíneos). em seguida com solução diluída de Giemsa,
Todas as amostras biológicas devem preparada no momento da coloração. Corar
ser consideradas como potencialmente durante 10 minutos. Deixar escorrer e lavar
infectantes. a lâmina em água corrente.
4.Secar a lâmina, mantendo-a em posição
vertical.
Opção 2-Coloração Giemsa
1.Fixar o esfregaço, cobrindo-o com 15 a 20
gotas de metanol por 2 minutos.
2.Escorrer o álcool metílico e, sem lavar ou
1. Dispensar uma gota de sangue sobre a deixar secar, cobrir a lâmina com solução de
lâmina. uso de Giemsa (aproximadamente 5mL).
3.Proceder à coloração por 10 minutos.
4.Lavar a lâmina em água corrente e deixá-la
secar em posição vertical.
RESULTADOS ESPERADOS
Hemácias: róseo
2. Com o uso de uma lâmina extensora, realizar Plaquetas: azul
o esfregaço. Leucócitos:
• Linfócitos
núcleo: azul violeta - citoplasma: azul
• Monócitos
núcleo (lobulado): azul violeta - citoplasma:
azul claro
• Granulócitos
3. O esfregaço deve ser uniforme em toda a Neutrófilos polimorfonucleares
lâmina. núcleo: azul escuro - citoplasma: rosa pálido
granulações: de tons róseos a azul claro
linfócitos neutrófilos e monócitos • Basófilos
núcleo: púrpura a azul escuro
granulações volumosas, cobrindo todo o
início do final do
esfregaço esfregaço citoplasma : azul escuro
zona prefe-
• Eosinófilos
rencial núcleo: azul - citoplasma: rosa pálido
grânulos volumosos: vermelho a vermelho
4. Desenho esquemático de esfregaço. laranja.
Resultados homogêneos na contagem diferencial
são obtidos examinando-se a porção mediana LIMITAÇÕES DO SISTEMA
do esfregaço. • Para se obter ótimo desempenho do sistema,
é necessário que o procedimento técnico seja
PROCEDIMENTO TÉCNICO rigorosamente seguido conforme instruções
de uso. Qualquer alteração poderá levar a
Preparo da solução corante seg. Giemsa
resultados errôneos.
Em tubo de ensaio, misturar 3 gotas do corante • Os esfregaços de cor vermelho intenso estão
Giemsa para cada 2mL de água destilada. excessivamente ácidos, ou o corante atuou
A seguir são recomendadas duas opções para por pouco tempo.
coloração com o corante Giemsa. O laboratório • Os esfregaços de cor cinza, cinza azulado
2/3

3. ou esverdeado estão muito alcalinos, ou o Reprodutibilidade: durante 12 meses
corante agiu durante muito tempo. consecutivos, foram realizados testes em
• Os esfregaços muito espessos só são esfregaços sangüíneos confeccionados e
aproveitáveis em certas partes das bordas. Os corados em condições ideais, utilizando-se o
excessivamente delgados tornam-se pálidos. mesmo lote de corante. Houve concordância
• A acidez ou a basicidade do esfregaço estão das características tintoriais dos elementos
relacionadas, frequentemente, à qualidade sanguíneos durante todo o período de teste.
da água. Observamos que a reprodutividade do corante
está relacionada com a qualidade da água,
CONTROLE DE QUALIDADE DO SISTEMA qualidade do metanol e limpeza da lâmina
1. controle de qualidade em microscopia de onde foi confeccionado o esfregaço e tempo
O
esfregaços sanguíneos depende diretamente de coloração.
da formação e da experiência do profissional
que avaliará a qualidade dos esfregaços, BIBLIOGRAFIA CONSULTADA
coloração, etc.. • Wa l f : P r a c t i c a l c l i n i c a l h e m a t o l o g y
2. limpeza e a secagem adequada do material a interpretation and techniques, 375-376;
A
ser utilizado são de fundamental importância 1973.
para a estabilidade dos reagentes e obtenção • Waessner S.: Técnicas em citologia
de resultados corretos. Não usar detergente hematológica, 16-32; 1990.
à base de fosfato. • Lima, O.A.; Soares JB; Greco J.B. Galizzi,
3. água utilizada na limpeza do material e Cançado J.R.: Métodos de laboratório aplicados
A
no preparo dos reagentes deve ser de boa à clínica, 21-9 a 21-12; 1992.
qualidade. • Bick Rodger L.: Hematology clinical and
4. olunas deionizadoras saturadas liberam íons laboratory practice, vol.01, 39 a 49; 1993.
C
diversos, aminas e agentes oxidantes, que • Doles: dados de arquivo.
deterioram os reagentes.
5. s lâminas para confecção do esfregaço TERMOS E CONDIÇÕES DE GARANTIA
A
devem estar perfeitamente limpas, isentas DA QUALIDADE DO PRODUTO
de gordura e polidas. As garantias do fabricante ao consumidor
6. A gota de sangue não deve ser muito seguem estritamente as relacionadas na Lei n
o
grande. Quanto maior a gota, mais espesso 8.078, de 11 de setembro de 1.990 - Código
o esfregaço. de Defesa do Consumidor.
7. esfregaço satisfatório deve ser fino e Os reagentes que compõem este sistema para
O
homogêneo, de margens livres, pois só os diagnóstico são garantidos na sua performance,
que reúnem estas condições apresentam os reprodutibilidade e qualidade até a data de
leucócitos e eritrócitos sem deformações e vencimento.
convenientemente distribuídos. Os produtos que apresentarem problemas
técnicos comprovados serão substituídos,
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO sem ônus para o consumidor.
Repetitividade: foram realizados testes
Doles Reag. Equip. para Laboratórios Ltda.
com corante hematológico Giemsa, em 10
CNPJ: 01.085.513/0001-05
indivíduos escolhidos aleatoriamente, sendo
Rodovia BR 153, Km 493, Lt.07
confeccionados dois esfregaços para cada
Conjunto Palmares.
indivíduo, totalizando 20 lâminas estudadas. As
CEP: 74775-027
amostras foram coletadas sem anticoagulantes
Goiânia - GO – Brasil
e os esfregaços, confeccionados em lâminas
e-mail: doles@doles.com.br
novas, desengorduradas. Utilizou-se água
recém-deionizada para diluição do corante
M.S.: n 0 10231810018
e metanol p.a. para fixação do esfregaço. O
procedimento técnico seguiu rigorosamente
Revisão: 11 (04/2010)
as instruções de uso, havendo assim total
concordância das características tintoriais de
eritrócitos, neutrófilos, linfócitos, monócitos e
plaquetas, entre as lâminas estudadas.
3/3