O documento descreve os principais métodos de diagnóstico em patologia, incluindo exames clínicos, laboratoriais e de imagem. Detalha técnicas como citologia esfoliativa, biópsia por agulha fina, biópsia cirúrgica e preparação de lâminas histológicas. Também discute técnicas complementares como imuno-histoquímica, PCR e microscopia eletrônica aplicadas ao diagnóstico patológico.

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MMÉÉTODOS DE DIAGNTODOS DE DIAGNÓÓSTICOSTICO
EM PATOLOGIAEM PATOLOGIA
Oliver Guilherme da Silva
Médico Patologista
Fases do diagnóstico
l Exame clínico
l Exames complementares
– Exames laboratoriais
– Exames por imagens
– Exame histopatológico
Estudo Histopatológico
l Citologia Esfoliativa
l Punção Aspirativa por Agulha Fina (PAAF)
l Citologia por decalque -“Imprint”
l Biópsia
– Incisional
– Excisional
– Por saca-bocado
– Por punção
– Por raspagem(curetagem)
– Por punch
– De congelação
l Importância do conhecimento da técnica e suas indicações:
– Cuidadoso manejo
– Preservação dos tecidos (Fixação adequada)
Estudo Histopatológico
l “Estudo morfológico de células livres ou isoladas dos tecidos”.
l 3 modalidades aplicadas a anatomia patológica
– Citologia esfoliativa: Esfregaço de secreções e líquidos orgânicos
– Esfregaço de punção aspirativa por agulha fina (PAAF)
– Citologia por decalque -“Imprint” : decalque da superfície de corte de
peças cirúrgicas ou de autópsias
Técnica Citológica
l Fixação:
– “Uma vez fora do organismo, qualquer célula isolada
sofre autólise, daí a necessidade imediata de fixação
para evitar alterações celulares que prejudicarão a
posterior análise do material”.
l Técnicas de Fixação:
– Dessecação
– Líquidos fixadores
l Alcool etílico 95º
l Álcool etilico 50º
Técnica Citológica

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l “Estudo das células naturalmente descamadas ou retiradas
artificialmente da superfície dos tecidos”.
l Método de diagnóstico baseado no fato de que as alterações das
células superficiais podem ser o reflexo daquelas do tecido
subadjacente
Citologia Esfoliativa Esfregaço cérvico-vaginal
l “Consiste na punção de um órgão sólido com agulha montada
numa seringa e aspiração do material para exame citológico”.
l Indicado em órgãos não apropriados para a citologia esfoliativa
como pulmão, glandulas salivares, tireoide, pâncreas, fígados ou
tumores quando a biópsia implica na abertura de uma cavidade.
l Fixação do material: Álcool etílico 95º
Biópsia por Aspiração
Vantagens do exame citológico
l Técnica simples de coleta
l Equipamentos de baixo custo
l Complicações raríssimas
•Hematoma
•Pneumotórax
l Rapidez no diagnóstico
Biópsia por Aspiração

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l Método utilizado para o diagnóstico imediato de certas lesões
Método do Decalque:
“Imprint”
l “Modalidade de técnica histológica na qual se obtém o
endurecimento do fragmento de tecido pela congelação a fim
de poder ser cortado por um micrótomo especial ligado a uma
substância congelante”.
l Indicações:
– Estabelecer a presença e a natureza do tumor;
– Determinar a adequação de margens;
– Verificar a suficiência de material para diagnóstico.
Biópsia por Congelação
Micrótomo de congelação
l Bios = vida
l Opsis = visão
l Retirada de fragmentos de tecido do vivo para o diagnóstico
histopatológico
l Compreende:
– Colheita do material pelo ato cirúrgico
– Exame microscópico do mesmo
Biópsia
Bisturi Punch Saca-bocado
Alça de
polipectomia Trefina Cureta Estereotaxia
Instrumental para realização de
biópsia
l Não deve ser aplicado a qualquer procedimento cirúrgico:
– Remoção de pequeno fragmento do colo do útero – BIÓPSIA
– Exame do útero proveniente de histerectomia – PEÇA CIRÚRGICA
l Fixação :
– Solução utilizada: Formol a 10%
– Volume: 20 vezes o da peça
Biópsia

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l Biópsia Incisional
l Biópsia Excisional
l Biópsia por Saca-bocado
l Biópsia por Raspagem (curetagem)
l Biópsia por Punção
l Biópsia Punch
Biópsia
l Remoção de uma parte da lesão e outra do tecido normal
adjacente
Biópsia Incisional
Finalidade diagnóstica
l Remoção de toda a lesão devendo ser circundada por uma margem
de tecido normal(margem de segurança) quando se tratar de uma
superfície cutânea ou mucosa
l Indicado para lesões pequenas
Biópsia Excisional
Finalidade diagnóstica & terapêutica Finalidade diagnóstica & terapêutica

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Finalidade diagnóstica & terapêutica
l É realizada com pinças saca-bocado de vários tamanhos
Biópsia por Saca-bocado
l Indicada para órgãos cavitários ou para lesões cavitárias por
meio da cureta e também no caso de lesões ósseas císticas.
Biópsia por Raspagem
(Curetagem)
l Indicada para se obter material de órgãos externamente
inacessíveis, a não ser pela cirurgia. É uma biópsia feita as
cegas por meio de agulhas calibrosas, empregadas para órgãos
como fígado e rim.
Biópsia por Punção

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l Destinada as biópsias de pele, é feita com um instrumento
especial semelhante a um vazador, no qual consta de uma lâmina
circular na extremidade de um tubo oco que permite obter um
cilíndro de pele atingindo até a hipoderme.
Biópsia por Punch
Biópsia por punch
Biópsia
Fixação do Material
Exame Histopatológico
Técnicas
em
Patologia
TTéécnicascnicas
emem
PatologiaPatologia
FNFN

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Preparo de Lâminas Histológicas
l Clivagem do material
l Processamento do material
l Inclusão do material
l Desbastar(desgaste) o material
l Corte do material
l Abertura do material
l Colocação do material na estufa
l Coloração do material
l Fases da coloração
l Montagem da lâmina
Clivagem do material
l Identificação do material
l Fixação prévia do material
em formol 10%
l Descrever as características
do material
l Secção do material de
3,0x2,5x0,3cm p/ inclusão
Processamento do tecido
l Auto-técnico
(processador de tecido)
– Constituição
– Fases do processamento
l Fixação, desidratação,
clarificação e
impregnação
l Duração processo
Inclusão do material
Desbastar(desgastar) o material
l Consiste em retirar o
excesso de parafina e
acertar a superfície do
bloco
l Utilização de navalha
específica
Corte do material
l Resfriar o bloco
previamente
l Corte no micrótomo de
3µ a 5µ

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Corte do material
l Cortes seriados
l Retirada do material
Abertura do corte
l Colocação do material
no banho histológico a
60º.
l Pesca do material
– Identificação prévia da
lâmina
Colocação do material na estufa
l Adesão do material a
lâmina
l Remoção do excesso
de parafina
Coloração do material
l Retirada do suporte e
colocação no berço
l Início do processo de
coloração
Fases da coloração
l Desparafinização
l Hidratação
Fases da coloração
l Coloração do núcleo
l Remoção do excesso de
hematoxilina

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Fases da coloração
l Coloração do
citoplasma
l Desidratação
Fases da coloração
l Diafanização ou
clarificação
Montagem da lâmina
Montagem da lâmina
Técnicas Complementares
em Patologia
• Colorações especiais
• Imuno-histoquímica
• PCR
• Hibridização “in situ”
• Microscopia eletrônica
Colorações EspeciaisColorações Especiais
Mycobacterium tuberculosis corado pela técnica de Ziehl-NeelsenMycobacterium tuberculosis corado pela técnica de Ziehl-NeelsenFNFN

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Candida sp. corada pela técnica do PASCandida sp. corada pela técnica do PASFNFN
Colorações EspeciaisColorações Especiais
Pigmento de melanina em melanoma corado pela técnica de
Fontana-Masson
Pigmento de melanina em melanoma corado pela técnica de
Fontana-Masson
FNFN
Colorações EspeciaisColorações Especiais
ImunoistoquímicaImunoistoquImunoistoquíímicamica
TTéécnica usada para identificacnica usada para identificaçção de constituintes teciduais ouão de constituintes teciduais ou
celulares (celulares (AgAg), atrav), atravéés de interas de interaçções Antões Antíígenogeno-- AnticorpoAnticorpo
Imunohistoquímica
l Categorização de tumores indiferenciados;
l Categorização de leucemias e linfomas;
l Determinação do local de tumores metastáticos;
l Detecção de moléculas que possuem significado prognóstico e
terapêutico;
l Identificação de agentes infecciosos.
Linfoma B (CD20) Linfoma T (CD45RO)
HMB45
PCR – Reação em cadeia
da Polimerase
ll A reaA reaçção em cadeia da polimeraseão em cadeia da polimerase éé um procedimentoum procedimento inin vitrovitro,,
para amplificapara amplificaçção enzimão enzimáática de seqtica de seqüüências especências especííficas de DNA.ficas de DNA.
ll A PCR permite a rA PCR permite a ráápida amplificapida amplificaçção de uma cão de uma cóópia de DNA empia de DNA em
milhões de cmilhões de cóópias. Por isso, a PCRpias. Por isso, a PCR éé uma das mais amplamenteuma das mais amplamente
utilizadas tutilizadas téécnicas da medicina moderna.cnicas da medicina moderna.

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Aplicações da PCR
ll A PCRA PCR éé utilizada tambutilizada tambéém nas seguintes condim nas seguintes condiçções:ões:
•• PresenPresençça de agentes infecciososa de agentes infecciosos
•• DiagnDiagnóóstico prstico préé--natal de doennatal de doençças genas genééticasticas
•• Clonagem de DNA genômico ouClonagem de DNA genômico ou cDNAcDNA
•• QuantificaQuantificaçção de DNA ou RNAão de DNA ou RNA
•• AnAnáálise de amostras forenseslise de amostras forenses
ll CrimesCrimes
ll PaternidadePaternidade
ll IdentificaIdentificaççãoão
Hibridização in situ
“É uma técnica utilizada para identificar mRNA(ou DNA) em amostras
de tecido humano e animal em conjunto com aspectos
morfológicos”.
EBER In Situ Hybridization (DAB)
(Nasopharyngeal Carcinoma) / EBV
Microscopia Eletrônica
ll Microscopia Eletrônica de VarreduraMicroscopia Eletrônica de Varredura
ll Microscopia Eletrônica de TransmissãoMicroscopia Eletrônica de Transmissão
Microscópio Eletrônico de Varredura
Microscopia Eletrônica de Varredura
Formiga
Microscópio eletrônico de varredura
No microscópio eletrônico de varredura (MEV) um feixe de elétrons
extremamente estreito é usado para varrer o espécimen – isto é, ele é
movido para diante e
para trás enquanto passa através do espécimen. O feixe tem vários
efeitos sobre o espécimen, dos quais o
principal para nossa finalidade é que ele faz com que o próprio espécimen
emita elétrons. A imagem é construída em sequência, no tempo, à medida
que o espécimen é varrido.
O MEV, por outro lado, é ideal para estudar a topografia de superfície de
objetos sólidos, mas fornece pouca, ou nenhuma informação sobre
a estrutura interna

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Microscópio Eletrônico de Transmissão
Microscopia Eletrônica de Transmissão
Microscópio eletrônico de transmissão
Esse tipo de microscópio é comumente chamado de microscópio eletrônico
direto ou de transmissão (MET) pelo fato da imagem do espécimen ser formada
simultaneamente à passagem do feixe de luz através dele. O emprego do MET
é bastante difundido no estudo de materiais biológicos, pois ele permite
definição de
imagens intracelulares, permitindo estudos de morfologia celular, aspectos
gerais das organelas e também da interação de parasitas com as células,
fornecendo
informações sobre alterações e efeitos
citopatáticos ocasionados por vírus, fitoplasmas, micoplasmas, bactérias e
outros organismos diminutos, de impossível visualização na microscopia de luz
convencional.
O MET é um instrumento admirável para estudar os detalhes mais finos de uma
estrutura celular, ou a organização molecular de vírus ou constituintes
subcelulares.
Obrigado !!!!!!!