Artigo bioterra v17_n2_07

1. 61
REVISTA DE BIOLOGIA E CIÊNCIAS DA TERRA ISSN 1519-5228
Volume 17 - Número 2 - 2º Semestre 2017
Caracterização fenotípica de Aeromonas sp no trecho urbano do rio
Cuiabá - MT
Ariana Arruda Camurça1
Selma Baia Batista2
RESUMO
Aeromonas é uma bactéria Gram-negativa em forma de bastonete, capaz de utilizar
diferentes carboidratos que produzem ácidos ou gás. Amplamente distribuída no ambiente e
membro importante da microbiota aquática. Este trabalho teve como objetivo, isolar e
identificar a família aeromonaceae e os possíveis gêneros de Aeromonas. Foram coletadas
amostras no perímetro urbano do Rio Cuiabá, em dois períodos sazonais, estiagem e
chuvoso. As amostras foram diluídas (10-1
a 10-5
) em água peptonada à 1% e após a
incubação á 37°C, os tubos com crescimento foram repicados para o meio de cultura TSA
acrescido de 6% de NaCl e incubados à 35°C. Os isolados foram submetidos a análises
macroscópicas e morfotintoriais. Os isolados com morfologia de Aeromonas foram
submetidos à prova de catalase e oxidase. Os cultivos positivos nessas provas foram
considerados como pertencentes ao gênero Aeromonas. Para confirmação da espécie foram
feitos testes fisiológicos e bioquímicos. Posteriormente as estirpes foram submetidas ao
antibiograma. Os testes fenotípicos feitos com as 56 cepas permitiram identificar 07
espécies e 3 estirpes com filiação incerta. Todas as cepas se mostraram sensíveis a
amoxicilina e clindamicina. Estes resultados permitiram concluir que, a água do perímetro
urbano do Rio Cuiabá está contaminada por Aeromonas.
Palavras chaves: qualidade microbiológica, resistência antimicrobiana, rio Cuiabá.
Phenotypic characterization of Aeromonas sp in excerpt urban river
Cuiabá-MT
ABSTRACT
Aeromonas is a Gram-negative rod-shaped bacteria is able to utilize various carbohydrates
to produce acids or gas. Being widely distributed in the environment, being a key member
of aquatic microbiota. Therefore, the aim of this work was to isolate and identify the family
Vibrionaceae and the possible genres of Aeromonas. The collections were made in the
urban Cuiabá River, in two seasonal periods, in the dry season and the rainy else. The
sample were made five dilutions (10-1
to 10-5
) in peptone water to 1% incubation at 37 °C,
tubes with higher growth were transferred to culture medium plus TSA 6% NaCl and
brought to the oven at 35°C, the isolates were subjected to screening by analyzing
morphotinctorial and macroscopic characteristics. All isolates with morphology of
Aeromonas were subjected to the test of catalase and oxidase. The positive cultures in these
tests were considered as belonging to the genus Aeromonas. For confirmation of the species
were made physiological and biochemical tests. The selected strains were tested for
antibiotic susceptibility. Phenotypic tests done with the 56 strains, have identified 7 and 3
strains with uncertain affiliation. All strains were sensitive to amoxicillin and clindamycin.
These results led to conclude that the water of the urban area of Cuiabá River is
contaminated by Aeromonas.
Keywords: Microbiological quality, antimicrobial resistance, Cuiabá river.

2. INTRODUÇÃO
Os ambientes aquáticos são
utilizados em todo o mundo para o
abastecimento de água, geração de
energia, irrigação, navegação, aqüicultura
e harmonia paisagística. No entanto, nas
últimas décadas, esse precioso recurso
vem sendo ameaçado pelas ações
indevidas do homem, esses fatores têm
sido observados pelos autores (BISWAS
1999, YOFFE et al.,1999 e TAVARES et
al.,1999).
Assim sendo, a água potável,
superficial ou subterrânea está cada dia
mais escasso devido ao grande aumento
da população, tanto no âmbito rural, como
no urbano. De modo geral a água deve ser
límpida, inodora e insípida.
Considerando os padrões
microbiológicos a água pode se tornar
imprópria para consumo humano, e para a
vida aquática quando contaminada por
meios, químico, físico e biológico
colocando em perigo a saúde e a vida, se
nelas forem encontrados microrganismos
patogênicos (BROCK et al., 2010).
Os problemas que envolvem a
qualidade da água são amplos dentre as
áreas de estudo, devido às fontes de
contaminação resultantes de: disposições
inadequadas de resíduos líquidos e sólidos
tanto de natureza domésticas quanto
industrial, estas atitudes, contribuem para
agravar sua escassez e resultam na
necessidade crescente do
acompanhamento das alterações da
qualidade da água.
Os patógenos mais frequentes
transmitidos através da água, são os que
causam infecção no trato intestinal.
Dentre os microrganismos contaminantes
da água destacam-se as bactérias de
natureza exógena que são oriundas de
matérias fecais (AMARAL et al., 2006).
As bactérias fazem parte da
microbiota da água de rios e tanque, estas
podem diferenciar seu potencial
patogênico quando as condições físicas e
químicas do ambiente forem alteradas
(WALTER & PLUMB, 1980).
Assim, a maioria dos organismos
são naturalmente saprófitas, que utilizam
a matéria orgânica e mineral do ambiente
aquático para seu crescimento e
multiplicação. Entretanto, quando surge a
oportunidade, esses organismos são
capazes de invadir o ambiente nutricional
e assim iniciar um processo de doenças
(FRERICHS, 1989).
Estes incluem os coliformes totais, e
os autóctones que apresentam diversas
espécies e fazem parte da microbiota
natural da água, entre elas as bactérias
móveis do gênero Aeromonas, gênero
considerado mais importante.
O gênero Aeromonas compreende
microrganismos de habitat
predominantemente hídrico, pertencentes
à família Aeromonadaceae. Sua
freqüência de isolamento é mais elevada
nos meses de verão, tanto nas zonas
temperadas como nas tropicais. No Brasil,
diversos estudos revelaram a incidência
de Aeromonas sp. no ambiente aquático
(águas doces, salgadas, tratadas,
estuarinas e de esgotos domésticos) em
amostras de solo de jardim e áreas de
recreação (ISONHOOD et al., 2002;
PEREIRA et al., 2004).
O gênero Aeromonas vem
passando por diversas revisões
taxonômicas e de nomenclatura nos
últimos 15 anos. Inicialmente foram
incluídas na família Vibrionaceae Véron
(2008), juntamente com os gêneros
Vibrio, Photobacterium e Plesiomonas.
Esse esquema de classificação sistemática
era conveniente, pois os três gêneros eram
fenotipicamente similares, pertenciam ao
mesmo ecossistema (água, peixe, répteis e
anfíbios) e provocavam os mesmos
espectros de doenças (gastrenterites e
septcemias) (MACDONELL et al., 1985).

3. Dentre as espécies do gênero
Aeromonas que apresentam mobilidade as
espécies Aeromonas hidrophila e
Aeromonas sobria, são consideradas as
mais patogênicas para o ser humano.
Vários estudos voltados à ecologia das
gastrenterites determinadas pelas
Aeromonas têm como preocupação de
estabelecer a água como o principal meio
de transmissão e considerando-a como
importante via de contaminação de
alimentos (ARAUJO, et al., 1989).
Embora o isolamento de Aeromonas
do meio ambiente ainda receba pouca
atenção, o número de surtos de
gastrenterite envolvendo essas bactérias,
encontra-se cada vez maior; o que pode
mostrar uma relação circunstancial entre
os surtos e atividades recreacionais em
ambientes aquáticos (MARCEL et al.,
2002).
Atualmente, a comunidade científica
tem voltado suas atenções ao estudo de
microrganismos considerados emergentes.
Uma vez que, a adaptação microbiana
pode ser responsável pela emergência de
novas doenças devido a maior
especificidade do patógeno a um
hospedeiro animal ou do surgimento de
cepas mais virulentas. A resistência
antimicrobiana frente a determinados
antibióticos é um tipo de adaptação
microbiana que pode causar doenças
veiculadas por alimentos ainda mais
graves (NOTERMANS e
HOOENNBOM, 1992; FRANCO, 1996;
TORRES, 2004).
Véron 2008 relatou o aumento na
incidência de cepas de Aeromonas sp.
multirresistentes isoladas tanto de fontes
clínicas quanto ambientais. Por isso,
existe em todo o mundo um grande
interesse no que diz respeito à elevada
prevalência de bactérias resistentes a
antibióticos.
Em vista disso, este trabalho tem
como objetivo caracterizar e analisar
fenotipicamente através da técnica
morfotintorial de Gram e testes
bioquímicos grupos de Aeromonas sp,
previamente selecionados da água do
trecho urbano do Rio Cuiabá, assim
como, os teste de susceptibilidade a
antimicrobianos.
MATERIAIS E MÉTODOS
ÁREA DE ESTUDO
O presente trabalho foi realizado no
Rio Cuiabá, um dos principais afluentes
do Rio Paraguai, fazendo parte, portanto
de uma bacia maior, Bacia Platina,
denominada em Mato Grosso de Bacia do
Alto Paraguai (PCBAP, 1997).
Estudos do PCBAP (1997) apontam
que o Rio Cuiabá é a principal fonte de
captação de água dos municípios de
Cuiabá e Várzea Grande, representando
67,6% e 83,7% respectivamente. Estas
duas cidades formam o aglomerado
urbano da capital, separadas unicamente
pelo Rio Cuiabá, onde residem
aproximadamente 900.000 habitantes.
Foram feitas 03 coletas em pontos
diferentes sendo eles: ponto 01- Porto
(15º 36' 53" S, 56º 06' 27" O), ponto 02 -
Ponte Sérgio Mota (15º 37' 37" S, 56º 04'
50" O) ambos localizados na região oeste
e ponto 03 - São Gonçalo Beira Rio
(15°38'58"S, 56°4'11” O) localizado na
região sul. A figura 1, apresenta a bacia
do rio Cuiabá, em destaque o perímetro
urbano, onde foram feitas as coletas.
Figura 1 - Bacia do Rio Cuiabá e suas sub-bacias,
adaptado de ZEILHOFER (2002).

4. COLETA E PROCESSAMENTO DAS
AMOSTRAS
As coletas foram feitas no perímetro
urbano do Rio Cuiabá, em dois períodos
sazonais, sendo uma coleta no período de
estiagem e outra no chuvoso. As amostras
foram coletadas em frascos estéreis e
mantidas sob refrigeração até o
processamento no laboratório de
Microbiologia do UNIVAG – Centro
Universitário.
De cada amostra foram feitas cinco
diluições (10-1
a 10-5)
em água peptonada à
1%. Após a incubação de 24h e 48h na
temperatura de 37°C, os tubos que
apresentaram maior crescimento foram
repicados para o meio de cultura Tripyc
Soy Agar (TSA) acrescido de 6% de
Cloreto de Sodio (NaCl) e incubados em
estufa de crescimento microbiano à de
35°,(VAN ELSAS e SMALLA, 1997,
modificado por COSTA, 2001).
CARACTERIZAÇÃO FENOTÍPICA
Os isolados foram submetidos a
uma triagem através de análises
macroscópicas (tamanho, borda, textura,
cor, elevação e odor) e características
morfotintoriais de parede celular (através
do teste de Gram). As culturas que se
apresentaram Gram-negativas, na forma
de bastonetes retos e curtos, aos pares,
isolados ou em cadeias curtas, foram
repicadas em TSA acrescidos de 6% de
NaCl e incubadas à temperatura de 28ºC,
por 24 horas seguindo a técnica de SAAD
et al., 1995.
As culturas foram submetidas à
prova de catalase e oxidase. Os cultivos
positivos nessas provas foram
considerados como pertencentes ao
gênero Aeromonas.
Como provas complementares,
foram submetidas aos testes fisiológicos
de motilidade, e bioquímicos tais como:
uréase, citrato, nitrato, gelatinase, indol,
O/F (fermentação e oxidação), V/P
(Vogues Proskauker) (que identifica
organismos capazes de produzir acetona a
partir da degradação da glicose). Também
foram realizados os testes de fermentação
de carboidratos (lactose, glicose e
maltose), visando avaliar a habilidade da
bactéria em fermentação de carboidratos.
Outro teste realizado foi o de
descarboxilação que é utilizado para
detectar a habilidade de um organismo e
descaboxilar um aminoácido, usualmente
a lisina, arginina e ornitina.
Os resultados dos testes foram
verificados a partir de chaves de
identificação fenotípica, construídas com
base no Manual Bergey (1984-1988) e
MacFaddin (1976), que permitiram
identificação em nível de gênero.
TESTE DE SUSCEPTIBILIDADE A
ANTIMICROBIANOS
O teste de difusão em meio de
cultura sólido mais usado na
determinação da atividade bacteriana é o
método de Kirby e Bauer. Tal técnica
recebeu esta denominação devido aos
pesquisadores que desenvolveram esse
método, que consiste na inoculação da
bactéria de forma homogênea sobre a
superfície de meio de cultivo especifico.
Posteriormente, discos de papel
filtro com concentrações conhecidas de
antibióticos são colocados sobre o meio
de cultura e após o crescimento, aparece
halos de inibição, e este são comparados
com os valores determinados em uma
tabela de referência (PATERSON, 2006).
Todos os isolados foram submetidos
a testes de antibiograma, utilizando, o
método de difusão de discos de
antibióticos, que, após o crescimento das
cepas em ágar Müeller Hinton, as placas
foram incubadas em estufa à 28ºC, por
18-24 horas (NCCLS, 2004).
Após esse período, os diâmetros
das zonas de inibição foram mensurados
com régua e comparados com a tabela
padrão para testes de susceptibilidade a

5. antimicrobianos e classificados como
resistentes, intermediários ou sensíveis.
(PATERSON, 2006).
Os antibióticos usados foram:
Clidamicina, Sulfazotrin, Gentamicina,
Aztrionama, Vancomicina, Amicacina,
Pefloxacin, Tetraciclina, Amoxilina. Os
agentes antimicrobianos e
quimioterápicos escolhidos representam
diferentes classes dessas substâncias,
além de terem relevante importância para
a terapêutica na medicina humana e
animal.
Os isolados também foram
submetidos a testes de patogenicidade,
utilizando-se os meios de cultura
específicos sendo eles o Agar SS e o
MacConkey.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
CARACTERIZAÇÃO FENOTÍPICA
Foram isoladas 56 estirpes com
características de cepas pertencentes ao
gênero Aeromonas. Isto foi verificado
através do teste morfotintorial de Gram,
onde a literatura diz que este gênero é
morfologicamente caracterizado como
bastonetes curtos Gram negativo.
As análises fenotípicas feitas através
das provas bioquímicas permitiram
identificar 7 espécies e uma afiliação
incerta, demonstrando que todas as
amostras analisadas da água coletada do
Rio Cuiabá, foram positivas para a
presença de Aeromonas sp, como pode ser
observado na tabela 1.
A abundância de Aeromonas sp.
encontrada neste estudo corroboram com
trabalhos de outros autores que
destacaram a ocorrência desse gênero
bacteriano no ambiente aquático,
principalmente em água doce e peixes
(HATHA, et al., 2005; HIRSCH et al.,
2006; AKINBOWALE, et al., 2007).
Obteve-se um bom crescimento das
bactérias nos meios específicos. Algumas
espécies de Aeromonas, necessitam de um
pH mais básico, acima de 8 e o meio TSA
mostrou bons resultados. Enquanto outras
espécimes de Aeromonas, preferem um
meio com maior salinidade, por isso foi
usado o meio TSA enriquecido a 6% de
NaCl.
No presente estudo, os maiores
percentuais de Aeromonas sp. coincidiram
com o período de início de chuvas na
região, onde as temperaturas são mais
elevadas, (acima de 30ºC). Dessa forma,
esses resultados sugerem que a
temperatura e a precipitação
pluviométrica podem ter influência no
aumento da ocorrência de Aeromonas sp.
(SILVA, 2010).
Tabela 1. Características fenotípicas dos
isolados encontrados nas amostras de
água
3.2. DIVERSIDADES DE
BACTÉRIAS
De acordo com a chave de
identificação utilizada nesse estudo,
(Manual Bergey1984-1988 e MacFaddin
1976), foi possível fazer a porcentagem
da diversidade de gêneros/espécies de
Aeromonas encontradas, Dentre os
gêneros encontrados a Aeromonas
salmonicida foi a espécie que teve maior
ocorrência com 53,5% de ocorrência nas
amostras coletadas. Esta foi observada
com a mesma freqüência nos dois
períodos de coletas (chuvoso e seco),
seguida da Aeromonas hydrophilia com
17,8%. (figura 2). Este dado é
preocupante tendo em vista que, estes
gêneros são patogênicos do homem e
Oxi = oxidase Cat = catalase Sac = sacarose
Mal= maltose Lact = lactose Lis = lisina Orn =
ornitina Arg = arginina Mot = motilidade V/P =
voges Proskauer Cit = citrato Nit = nitrato Gel =
gelatinose O/F = oxidação fermentação UR=
ureia

6. peixes respectivamente. Em piscicultura,
essas espécies têm grande importância
econômica, devido aos grandes prejuízos
causados por altas taxas de morbidade e
mortalidade de peixes. Seu hábitat natural
é o material em decomposição na água
(DUGENCI e CANDAN, 2003; POND et
al., 2006).
Sob o aspecto de saúde pública, A.
salmonicida, é um patógeno intestinal,
embora já tenha sido responsabilizada por
infecções extraintestinais, como
bacteremia, septicemia, pneumonia e
celulite, principalmente em indivíduos
imuno comprometidos (CARNAHAN
1993; JANDA e ABBOTT, 1998).
Figura 2. Percentagem da diversidade de
gêneros/espécies
SUSCEPTIBILIDADES A
ANTIMICROBIANOS
Nos testes de
sensibilidade/resistência realizados com
as 08 estirpes devidamente caracterizadas,
foi possível observar que a Aeromonas
salmonocida foi a que teve maior
resistência em todos os antibióticos
testados e todas as cepas apresentou
elevados percentuais de resistência frente
aos antimicrobianos testados,
principalmente à amoxicilina e
clindamicina (Tabela 2). Estes dados
sugerem atenção, devido ao grau de
patogenicidade desta estirpe. Uma vez
que as amostras foram coletadas em
pontos do Rio Cuiabá onde há uma
freqüência de uso tanto de balneabilidade
e pesca quanto abastecimento.
Tabela 2.Percentagem de resistência a
antibióticos.
Apesar de não ter sido realizada a
pesquisa de fatores de virulência nos
isolados de Aeromonas deste estudo, as
espécies identificadas (A. hydrophila, A.
salmonicida) são consideradas
potencialmente patogênicas, tanto para os
animais (homem, peixes etc..) (ABBOTT
et al., 2003). Além disso, isolados de A.
hydrophila da água apresentaram os
mesmos fatores de virulência associados à
patogênese de infecções causadas por
Aeromonas.
De acordo com Schmidt et al.
(2000), Aeromonas móveis têm sido
freqüentemente isoladas em ambientes
que apresentam elevados percentuais de
resistência aos mais diversos
antimicrobianos, o que pode ser
confirmado também neste estudo.
CONSIDERAÇOES FINAIS
De acordo com as condições de
realização desse trabalho, foi possível
concluir que Aeromonas sp. foram
identificadas em todas as amostras de
água coletadas nos pontos amostrais em
dois períodos sazonais.
Assim sendo, as águas do Rio
Cuiabá, estão contaminadas por bactérias
desse gênero, e pode estar em estado de
alerta devido as espécimes de Aeromonas
sp.encontradas, que são potencialmente
patogênicas, tendo em vista que, os
isolados apresentaram elevados
percentuais de resistência e
Cli = Clindamicina Sut = sulfazotrin Gn =
gentamicina Van = vancomicina Ami =
amicacina Pef = pefloxacin Tet = tetraciclina
Amo = amoxilina

7. multirresistência frente aos vários
antimicrobianos testados, principalmente
à amoxicilina e clindamicina.
Os resultados demonstraram
preocupação e a necessidade de um
monitoramento constante com a qualidade
da água da região de estudo, em virtude
da ocorrência das bactérias pesquisadas
nesse ambiente. Os resultados obtidos
evidenciaram o risco à saúde pública pela
possibilidade de difusão dessas bactérias
para pisciculturas e até para outros nichos
ecológicos, incluindo o ambiente humano.
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