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Tecnologia do DNA Recombinante & Aplicações
Identificação Genética - Fingerprinting
Complementaridade de Cadeias Tm Estringência
Clonagem Inserto
Amplicação do Clone em Bactéria
 
Utilizações do DNA Clonado
Utilizações do DNA Clonado
Retrotranscrição
Vetor & Inserto
Enzimas de Restrição
4 bases
Corte & Ligação
Vetores <ul><li>Plasmídios </li></ul><ul><ul><li>Pequenos fragmentos circulares de DNA </li></ul></ul><ul><ul><li>Replicaç...
Modos de introdução de DNA recombinante em bactérias.
Vetores: pBR322 & pUC18 Seleção de vetores com clone polylinker
Vetores <ul><li>Fago Lambda </li></ul><ul><ul><li>Acomoda um total de 45-50kb </li></ul></ul><ul><ul><li>Inserto de cerca ...
Fago Lambda
Detecção de Gene de Interesse – Plaqueamento de Fagos
Uso de sondas de DNA e RNA para identificar o clone portador do gene de interesse.
Vetores <ul><li>Cosmídios </li></ul><ul><ul><li>Híbridos de fago e plasmídio </li></ul></ul><ul><ul><li>Replicação em bact...
Vetores de Grande Porte <ul><li>BAC: Bacterial Artificial Chromosome </li></ul><ul><ul><li>Cromossomo Artificial de Bactér...
Vetores de Grande Porte <ul><li>Cromossomo Artificial de Levedura </li></ul><ul><ul><li>Se comporta como um pequeno cromos...
Cromossomo Artificial de Levedura
Introdução de DNA Exógeno DNA Shotgun
Polimerase Chain Reaction - PCR
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Gel de Agarose
Southern e Northern Blots
 
 
 
 
 
 
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Tecnologia do DNA recombinante e aplicações

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Tecnologia do DNA recombinante e aplicações

  1. 1. Tecnologia do DNA Recombinante & Aplicações
  2. 2. Identificação Genética - Fingerprinting
  3. 3. Complementaridade de Cadeias Tm Estringência
  4. 4. Clonagem Inserto
  5. 5. Amplicação do Clone em Bactéria
  6. 7. Utilizações do DNA Clonado
  7. 8. Utilizações do DNA Clonado
  8. 9. Retrotranscrição
  9. 10. Vetor & Inserto
  10. 11. Enzimas de Restrição
  11. 12. 4 bases
  12. 13. Corte & Ligação
  13. 14. Vetores <ul><li>Plasmídios </li></ul><ul><ul><li>Pequenos fragmentos circulares de DNA </li></ul></ul><ul><ul><li>Replicação independente do DNA bacteriano </li></ul></ul><ul><ul><li>Presença ou ausência dentro da bactéria </li></ul></ul><ul><ul><li>Quantidade variável </li></ul></ul><ul><ul><li>Resistência a drogas e outras características </li></ul></ul><ul><ul><li>Bom método para amplificar o DNA clonado </li></ul></ul><ul><ul><li>Fragmentos clonáveis até 20kb </li></ul></ul><ul><ul><li>Fragmentos grandes são perdidos </li></ul></ul><ul><ul><li>Plasmídios clássicos </li></ul></ul><ul><ul><ul><li>pBR322 </li></ul></ul></ul><ul><ul><ul><li>pUC18 </li></ul></ul></ul>
  14. 15. Modos de introdução de DNA recombinante em bactérias.
  15. 16. Vetores: pBR322 & pUC18 Seleção de vetores com clone polylinker
  16. 17. Vetores <ul><li>Fago Lambda </li></ul><ul><ul><li>Acomoda um total de 45-50kb </li></ul></ul><ul><ul><li>Inserto de cerca de 15kb </li></ul></ul><ul><ul><li>DNA automaticamente embalado em partícula infectante </li></ul></ul><ul><li>Fagos Unifilamentares </li></ul><ul><ul><li>DNA unifilamentar é convertido dentro da bactéria para replicação </li></ul></ul><ul><ul><li>Facilidade para sequênciamento dos clones </li></ul></ul>
  17. 18. Fago Lambda
  18. 19. Detecção de Gene de Interesse – Plaqueamento de Fagos
  19. 20. Uso de sondas de DNA e RNA para identificar o clone portador do gene de interesse.
  20. 21. Vetores <ul><li>Cosmídios </li></ul><ul><ul><li>Híbridos de fago e plasmídio </li></ul></ul><ul><ul><li>Replicação em bactérias ou embalados como fagos </li></ul></ul><ul><ul><li>Sequências virais eliminadas permitindo introdução de DNA exógeno de até 45kb entre os sítios cos </li></ul></ul><ul><ul><li>Partícula viral penetra na bactéria, mas não tem potencial replicativo </li></ul></ul>
  21. 22. Vetores de Grande Porte <ul><li>BAC: Bacterial Artificial Chromosome </li></ul><ul><ul><li>Cromossomo Artificial de Bactéria </li></ul></ul><ul><ul><li>Inserto médio de 150kb </li></ul></ul><ul><ul><li>Inserto máximo de 400kb </li></ul></ul><ul><ul><li>Se replica como um plasmídio dentro da bactéria </li></ul></ul><ul><ul><li>Utilizado amplamento pelo Projeto Genoma </li></ul></ul>
  22. 23. Vetores de Grande Porte <ul><li>Cromossomo Artificial de Levedura </li></ul><ul><ul><li>Se comporta como um pequeno cromossomo que se replica dentro do eucarionte e carrega seu DNA de interesse </li></ul></ul><ul><ul><li>Tamanho médio do inserto: 500Kb </li></ul></ul><ul><ul><li>Tamanho máximo do inserto: 1Mb </li></ul></ul><ul><ul><li>Contém todas os elementos necessários para se replicar e segregar dentro da levedura </li></ul></ul>
  23. 24. Cromossomo Artificial de Levedura
  24. 25. Introdução de DNA Exógeno DNA Shotgun
  25. 26. Polimerase Chain Reaction - PCR
  26. 36. Gel de Agarose
  27. 37. Southern e Northern Blots
  28. 44. Mapas de Restrição - RFLP
  29. 46. Sequenciamento Capilar - Eletroferograma
  30. 51. Manipulação em Cultura de Células e Semeadura
  31. 53. Produção de Camundongos Transgênicos
  32. 57. Transgênico para Hormônio do Crescimento
  33. 61. Diagnóstico Pré-Natal

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