A duplicação do DNA ocorre durante a fase S da interfase e envolve a ação coordenada de várias enzimas. A helicase separa as fitas de DNA, a primase sintetiza primers de RNA, as DNA polimerases adicionam nucleotídeos de acordo com o molde e a DNA ligase une os fragmentos de Okazaki recém-sintetizados. O processo resulta em duas moléculas de DNA idênticas à original.
9. D
u
p
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c
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ç
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o
d
o
D
A informação genética é
estocada no DNA por
meio de um código (o
código genético) no qual a
seqüência de bases
adjacentes determina a
seqüência de aminoácidos
no polipeptídeo
codificado.
10. D
u
p
l
i
c
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ç
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o
d
o
D
É a única molécula capaz de sofrer auto-auto-
duplicaçãoduplicação.
Ocorre durante a fase Sfase S da intérfaseintérfase.
É do tipo semiconservativasemiconservativa, pois cada molécula
nova apresenta uma das fitas vinda da mãe e outra
fita recém sintetizada.
20. Síntese de DNA – enzimas de duplicação
Topoisomerases ou DNA topoisomerases – aliviam a
tensão do trecho de DNA que não está sendo duplicado
21. Síntese de DNA – enzimas de duplicação
Helicases – reconhecem a origem do trecho de DNA que
está sendo duplicado. Desenrola a dupla hélice na
forquilha de duplicação. Separa as cadeias
antiparalelas.
22. Desenovelamento do DNA
Retirada das histonas
Proteínas de ligação a fita simples (SSBPs)
DNA helicase
− Quebra pontes de H
DNA topoisomerases
− Tiram a tensão
23. Síntese de DNA – proteínas de duplicação
SSBs – proteínas que se ligam às fitas separadas pelas
helicases, impedindo que elas se enrolem de novo.
Mantém a estabilidade da forquilha de replicação. São
importantes na recombinação e reparação do DNA.
24. Síntese de DNA – enzimas de duplicação
Primase – sintetiza o primer de RNA para que a síntese
de DNA comece;
25. Síntese de DNA – enzimas de duplicação
Primase – sintetiza o primer de RNA para que a síntese
de DNA comece;
26. Síntese de DNA – enzimas de duplicação
Primase – sintetiza o primer de RNA para que a síntese
de DNA comece;
27. Forquilha de duplicação
Fita líder
− Primase age uma vez
Fita retardada
− Primase age várias vezes
− 1967, Fragmentos de Okasaki
Okazaki R, Okazaki T, Sakabe K, Sugimoto K. Mechanism of DNA replication
possible discontinuity of DNA chain growth. Jpn J Med Sci Biol. 1967
Jun;20(3):255-60
28. Primase
Ribonucleoproteína
Liga-se à helicase em
procariotos formando o
chamado primossomo
Sintetiza um primer de RNA
contendo aproximadamente
11 bases; fornece 3’ OH
DNA polimerase lenta e
sujeita a erros
Evita a progressão da
forquilha uma vez que a fita
líder anda mais rápido
Síntese de DNA – enzimas de duplicação
29. Síntese de DNA – enzimas de duplicação
DNA polimerases – sintetiza o DNA
30. Síntese de DNA – enzimas de duplicação
DNA polimerases – sintetizam o DNA
Enzimas que catalisam a reação de síntese do DNA
Adiciona nucleotídeos tri-fosfato à extremidades 3’OH
livre
Alongamento da cadeia de DNA sempre é feito na
direção 5’>3’ (endonuclease 5’>3’)
Incapaz de fazer DNA do zero (precisa ter extremidade
3’OH livre)
Possui mecanismo de correção de erros (exonuclease
3’>5’)
35. Síntese de DNA – enzimas de duplicação
DNA ligase - é a enzima que une os fragmentos de
Okazaki, após a retirada dos iniciadores (ou primers)
pela DNA polimerase de reparação.
Também é utilizada como ferramenta em técnicas de
Biologia Molecular para “colar” fragmentos de DNA de
interesse.
36.
DNA polimerase I
− Descoberta em 1956 (Kornberg pai)
− Função precisa descoberta apenas em 1969: remove o
primer de RNA da fita descontínua
DNA polimerase III
− Descoberta em 1970 (Kornberg filho)
− Principal enzima que realiza a replicação em
procariotos
DNA polimerase II
− Lenta, envolvida em reparo do DNA, retira os primers
Síntese de DNA – enzimas de duplicação
52. P
C
R
• Sintetizados quimicamente;
• 15 a 25 bases ;
• Define limites alvo a amplificar – marcadores genéticos
• Serve como ponto de início para a replicação;
• Permite a cópia das 2 cadeias simultaneamente nas duas
direções (para frente e para trás);
• Banco de Dados International Nucleotide Sequence Database
(www.insdc.org)
• GenBank (NCBI, NIH) European Molecular Biology Laborstory
(EMBL) DNA DataBank of Japan (DDBJ)