Este documento descreve a síntese verde de nanopartículas de grafeno a partir de extrato de K. pictus usando métodos eco-friendly. As nanopartículas, chamadas KC-GNs, foram caracterizadas e demonstraram fornecer neuroproteção em células neuronais humanas contra privação de oxigênio-glicose e reoxigenação por meio da ativação da via NRF2/ARE. Os resultados sugerem que KC-GNs podem ser uma estratégia promissora para o tratamento de acidente vascular cerebral is

2. Fonte: Google imagens
IRIIRI
Trombólise farmacológica e
mecânica
Trombólise farmacológica e
mecânica
Suprimento regular de oxigênio e
glicose
Suprimento regular de oxigênio e
glicose OGD/ROGD/R

3. Fonte: Google imagens
Enzimas desintoxicantes de fase IIEnzimas desintoxicantes de fase II
NFR2NFR2
Alvoterapêutico
Alvoterapêutico

4. Fonte: Google imagens
- Neuralgia
- Furúnculos
- Feridas
- Artrite reumatoide
- Diabetes mellitus
- Saponinas
- Poliacetilenos
- Glicósidos de fenilpropanóides
- Lignanos
- Glicosídeos fenólicos simples
- Anti-inflamatórias
- Antitumorais
- Antioxidantes
- Antibacterianas

5. KC-GNsKC-GNs
- Espectroscopia ultravioleta visível (UV-Vis)
- Dispersão dinâmica de luz (DLS)
- Microscopia eletrônica de transmissão de emissão de campo (TEM)
- Espectroscopia de raios X dispersiva (EDS)
- Mapeamento elementar, difração de raios X (XRD)
- Espectroscopia de infravermelho de transformação de Fourier (FTIR)

6. Preparação de extrato de KC
O KC (a casca do caule de K. pictus) foi comprado em uma loja local de ervas, Kwang
Myoung Herb Medicine (Pusan, Coréia), em abril de 2005. O material foi identificado
e autenticado pelo Professor WS Ko, Faculdade de Medicina Oriental, Dong-
Universidade de eui, Pusan, Coréia. O espécime (KP-05-04) foi depositado no
Departamento de Biologia Molecular, Universidade Nacional de Pusan, Busan, Coréia.
Rendimento = 27 gRendimento = 27 g

7. Síntese verde de KCs
Componentes
indesejáveis
Componentes
indesejáveis
Resíduos
remanescentes
Resíduos
remanescentes
Confirmação por espectrofotometria UV-Vis
usando um Ultrospec 6300 Pro (GE Healthcare
Life Sciences, Buckinghamshire, Reino Unido)
DLS usando o software Data Transfer
Assistance e um Zetasizer Nano ZS90 (Malvern
Instruments, Malvern, Reino Unido)

9. TEM, EDS, XRDs e FTIR
As imagens de um microscópio eletrônico de transmissão de emissão de campo de
200 kV (TALOS F200X, FEI, Hillsboro, OR, EUA)
Padrão de difração de elétrons da área selecionada (SAED)
Difractômetro de raios X (XRD Empyrean Series 2, PANalytical, Almelo, Holanda)
Os espectros FTIR do extrato KC e KC-GNs foram registrados em um
espectrofotômetro FTIR (Spectrum GX; PerkinElmer, Inc., Waltham, MA, EUA) usando
grânulos KBr na faixa de 4,000 a 400 cm-1.

13. Cultura de Células
Células
SH-SY5Y
Células
SH-SY5Y
Crescidas como monocamadas em DMEM
suplementado com 10% de FBS inactivado pelo
calor
Linha celular de
neuroblastoma
derivada de
humanos
Incubação a 37 ° C numa atmosfera
umidificada contendo 5% de CO2
Para manter o crescimento exponencial, cada cultura celular foi subcultivada a cada
3 dias usando tratamento com tripsina / ácido etilenodiaminotetracético.

15. SH-SY5Y
neuroblastoma
Modelo in vitro de lesão isquêmica
câmara anaeróbia
umidificada
1% de O2
95% N2
5% de CO2
Por 8 h a 37 °
Condições normóxicas
95% O2
5% de CO2
Por 8 h a 37 °
Privação de oxigênio-glicose e reoxigenação

16. MTT
MTT Formazan
Mitocondrial
redutase
6 h a 37 ° C
SH-SY5Y
neuroblastoma
LDH
Enzima citosólica
•Integridade da membrana
Ensaios de viabilidade celular e citotoxicidade

18. SH-SY5Y
neuroblastoma
1 h a 37 ° C numa
atmosfera de
5% de CO2
CM-H2DCFDA
Fluorescente
Medição de ROS intracelulares

20. SH-SY5Y
neuroblastoma
Método para detecção de fragmentação de
DNA através da marcação da ponta
terminal de ácidos nucleicos.
Marcação de túnel

22. SH-SY5Y
neuroblastoma
10.000 células
Teste de potencial de membrana mitocondrial

24. SH-SY5Y
neuroblastoma
Reagente de extração
nuclear e citosólica
NE-PER
Teor de proteína
de lisados celulares
reagente de Bradford
Membrana
polivinilideno
Extração de proteínas e Western Blot

25. Apoptose
Regula G1/ S
Ativador apoptótico
Divisão celular

26. Transfecção transitória e ensaio dupla luciferase

27. (A) CM-H2 DCFDA (um indicador geral de
estresse oxidativo) foi usado para medir o
nível de produção de ROS intracelular.
(B) A intensidade da fluorescência foi medida
por citometria de fluxo para determinar o nível
ROS intracelular.
C) As células foram coradas com corante
JC-1 como indicador de potencial de
membrana mitocondrial e analisada por
citometria de fluxo.
D) A porcentagem indicada de células no
quadrante inferior direito emitido apenas
fluorescência verde, que foi atribuída a
membranas mitocondriais despolarizadas.

29. •Os dados foram expressos como a média ± erro padrão
• A análise estatística foi realizada usando SPSS (Versão 18.0, Chicago, IL, EUA) para
identificar diferenças significativos baseadas na análise de variância unidirecional,
seguidas pelos testes post hoc de Dunn.
•Valores de P, 0,05 foram considerados estatisticamente significativo.
•Cada experiência foi repetida mínimo de três vezes

30. •Aplicações de nanopartículas metálicas em neurociência clínica estão em estágios
iniciais de desenvolvimento, em parte por causa da complexidade do sistema
nervoso central.
•Embora a atenção á aplicação de nanopartículas metálicas em neuroproteção está
aumentando, os estudos clínicos ainda são limitados devido a falta de
conhecimento sobre as conseqüências dos PNB como agentes neuroprotetores
contra AVC isquêmico.
•Além disso, muitos dos mecanismos de sinal celular e molecular de respostas
neuroprotetoras e interações PNP-neurônicas ainda não são bem compreendidos.
• Finalmente, os resultados deste in vitro estudo precisa ser confirmado em um
modelo in vivo de isquemia acidente vascular cerebral, que será o foco de estudos
em andamento.

31. •Uma síntese nova, eco-amigável, simples e barata de KC-GNs foi relatado
usando um extrato de KC.
•O intrínseco compostos bioativos de KC atuaram como redução, limitação e
agentes estabilizadores, o que, portanto, excluiu a necessidade de usar químicos
tóxicos.
•Os KC-GNs sintetizados foram caracterizados por uma variedade de técnicas
analíticas padrão. este estudo forneceu a primeira evidência experimental de que
KC-GNs
•Induziu a ativação de NRF2 / ARE em celulas neuronal humano e forneceu um
efeito neuroprotetivo contra OGD / R .
•Coletivamente, nossos resultados revelaram que KC-GNs forneceu
neuroproteção via NRF2 / ARE e sugeriu uma estratégia terapêutica promissora
para acidente vascular cerebral isquêmico.